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作者：孙世波南方医科大学

学位级别：硕士

背景和目的： Sonic Hedgehog(SHH)分泌信号分子家族在早期胚胎发育、器官分化过程中发挥重要的调控作用,通路的异常激活还与人类肿瘤的发生与演进密切相关。SHH蛋白是由SHH基因编码的一种高度保守的分泌型糖蛋白。上皮型钙粘蛋白(E-cad... 详细信息

背景和目的： Sonic Hedgehog(SHH)分泌信号分子家族在早期胚胎发育、器官分化过程中发挥重要的调控作用,通路的异常激活还与人类肿瘤的发生与演进密切相关。SHH蛋白是由SHH基因编码的一种高度保守的分泌型糖蛋白。上皮型钙粘蛋白(E-cadherin)是一类广泛分布于胚胎和成熟组织上皮组织介导细胞间同质粘附的钙依赖性单次跨膜糖蛋白,是在生理条件下维持组织结构形态的完整性和细胞极性的重要成分。白细胞介素-6(interleukin-6)是细胞因子网络中重要成分之一,亦是一种多功能的细胞因子,通过复杂的细胞信号传导途径,对细胞生长、分化、凋亡、转化及免疫反应等过程都具有重要的调节作用。最近越来越多的研究显示,SHH信号通路的异常激活和过度表达、E-cadherin表达减弱或缺失及IL-6的失调控参与多种肿瘤的发生过程,但SHH信号通路、E-cadherin和IL-6在炎症疾病尤其是结石性胆囊炎组织中的作用在国内尚无报道。本课题拟通过对慢性结石性胆囊炎、胆囊癌组织标本中SHH、E-cadherin和IL-6表达水平的同步观察,探讨慢性结石性胆囊炎向胆囊癌发展转化机制,目的旨在寻找胆囊癌特异性分子标志物,以利早期诊断及特异性靶向治疗。材料和方法： 1.胆囊炎标本的收集：选取广州军区武汉总医院2005年1月至2010年12月间经病理确诊、且术后病理蜡块保存完好的慢性结石性胆囊炎患者术后的组织标本120例,其中男性48例,女性72例,平均年龄51.8岁。其中轻度慢性结石性胆囊炎45例,中度慢性结石性胆囊炎45例,重度慢性结石性胆囊炎30例。对照组为囊腺癌患者术后组织标本(36例),男性20例,女性16例,平均年龄61.4岁,手术前均未放疗或化疗。 2.常规HE染色判断胆囊炎分级：60℃烤片30min,二甲苯脱蜡,梯度酒精脱水;磷酸盐缓冲液(PBS)洗5min,共3次;苏木素染色液染色5min;自来水冲洗去多余的染色液,约10min,蒸馏水洗涤;盐酸酒精分化30s;自来水冲洗,浸泡15min;伊红染色液染色30s-2min(根据染色结果和要求调整时间);梯度酒精脱水,二甲苯透明,中性树胶封片。慢性结石性胆囊炎分级标准：轻度：病程5年;B超检查提示有胆囊体积的萎缩或增大,有胆囊壁弥漫性或局限性(结节状)增厚,多伴有息肉样病变;病理检查显示黏膜上皮部分或大部分脱失,未脱失的腺上皮细胞形成代偿性区域性增生集中,增生的腺体有不规则的扩张,腺上皮细胞增生活跃。增厚的胆囊壁组织内形成单个腺管及多个腺管的异型增生灶,炎细胞浸润程度重,淋巴滤泡形成,纤维结缔组织增生,多有罗-阿氏窦下延,黏液腺分泌增强。 3.免疫组化法检测组织标本SHH、IL-6和E-cadherin蛋白表达：60℃烤片30mmin,二甲苯脱蜡,梯度酒精脱水后,对组织抗原进行高温热修复;室温下冷却至常温;磷酸盐缓冲液(PBS)洗5min,共3次,加3%过氧化氢孵育以阻断内源性过氧化物酶活性;磷酸盐缓冲液(PBS)洗2mmin,共3次;滴加非免疫性动物血清阻断非特异性结合,20min后甩去封闭液加一抗4℃保湿,过夜;PBS洗5min,共3次,滴加二抗,室温孵育30min;PBS洗2min,共3次;DAB显色,自来水终止反应并冲洗5min;苏木素复染,清水冲洗;梯度酒精脱水,二甲苯透明,中性树胶封片。 4.病理图像分析定量检测组织标本SHH、IL-6和E-cadherin蛋白含量：切片经免疫组化染色完成后,每张切片随机选取5个不同高倍视野(×400)进行拍照。免疫组织化学染色图像分析检测：在光镜下观察指标：免疫复合物沉积部位及免疫反应强度的观察。阳性判断标准：当细胞膜和(或)胞浆出现棕黄色阳性物质作为阳性细胞。观察参数：慢性结石性胆囊炎和胆囊癌组织中E-cadherin和IL-6表达的阳性颗粒的参数值——平均灰度、阳性单位。图像分析及数据统计分析：在400倍视野下,每张玻片选取5个视野,采用武汉千屏公司HMIAS-2000高清晰度彩色病理图片报告分析系统测定阳性颗粒的平均灰度和阳性单位值。 5.统计学分析：运用SPSS13.0软件进行统计学分析。胆囊炎、胆囊癌组织SHH、IL-6、E-cad蛋白表达的阳性单位、平均灰度值以x±s表示,采用单因素方差分析进行了完全随机设计的方差分析(方差齐时采用Fisher法,其中两两比较采用LSD法;方差不齐时采用Welch法,其中两两比较采用Dunnett T3法)及Pearson相关分析,以F为统计量,以双侧a=0.05作

关键词：慢性结石性胆囊炎胆囊癌 Sonic hedgehog E-cadherin IL-6

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Sonic Hedgehog信号通路与肿瘤发生及特异性靶向治疗

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中华实验外科杂志 2012年第5期29卷 985-986页

作者：孙世波王峰波卢绮萍广州军区武汉总医院普通外科武汉430070

Hedgehog（HH）基因最初于1980年在研究果蝇基因突变时发现，因果蝇胚胎腹侧布满尖状突起形似刺猬而命名为Hedgehog。后来多个实验室在脊椎动物中发现HH家族，并对HH信号通路分子进行了系统的研究。HH信号通路不但在胚胎正常发育、神经... 详细信息

Hedgehog（HH）基因最初于1980年在研究果蝇基因突变时发现，因果蝇胚胎腹侧布满尖状突起形似刺猬而命名为Hedgehog。后来多个实验室在脊椎动物中发现HH家族，并对HH信号通路分子进行了系统的研究。HH信号通路不但在胚胎正常发育、神经分化、消化管的区域特异性分化中起着重要作用，

关键词： Hedgehog信号通路特异性靶向治疗肿瘤发生基因突变神经分化脊椎动物正常发育

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小干扰RNA对大鼠T淋巴细胞CD28基因表达的抑制作用

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中华实验外科杂志 2007年第1期24卷 25-27页

作者：朱冠宇孙世波刘伟姚志发哈尔滨医科大学附属第二临床医学院 150086

目的探讨小干扰RNA（siRNA）对大鼠T淋巴细胞共刺激分子CD28基因表达及干扰后的T细胞的功能的影响。方法设计针对目标基因的siRNA，转染大鼠T淋巴细胞，逆转录-聚合酶链反应（（RT，PCR）方法检测CIY28 mRNA水平，MLR检测转染后的T淋巴... 详细信息

目的探讨小干扰RNA（siRNA）对大鼠T淋巴细胞共刺激分子CD28基因表达及干扰后的T细胞的功能的影响。方法设计针对目标基因的siRNA，转染大鼠T淋巴细胞，逆转录-聚合酶链反应（（RT，PCR）方法检测CIY28 mRNA水平，MLR检测转染后的T淋巴细胞的增殖能力，ELISA法检测细胞因子水平。结果siRNA转染大鼠T淋巴细胞后，抑制CD28分子的表达，半定量RT-PCR检测显示T淋巴细胞CD28的mRNA均有明显的下降，siRNA转染48h后，siRNA-1、siRNA-2、siRNA-3、siRNA-4组CD28基因表达均受到抑制，其抑制率最高为（88．56±4．70）％，T细胞增殖能力、IL-2，IFN-1水平明显低于对照组。结论siRNA可以特异性抑制大鼠T淋巴细胞共刺激分子CD28基因的转录和表达，降低大鼠T细胞的增殖能力，抑制了IL-2，IFN-1细胞因子的分泌水平。

关键词：小干扰RNA T细胞 CD28 免疫耐受

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肝外伴肝内胆管结石的微创治疗现状与进展

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中国普通外科杂志 2014年第8期23卷 1117-1120页

作者：尹飞飞孙世波哈尔滨医科大学附属第二医院普通外科黑龙江哈尔滨150086

肝外伴肝内胆管结石是普通外科常见病,其治疗方法既有传统手术,也包括内镜、腹腔镜及胆道镜技术在内的各种微创治疗措施。但单独应用每一项治疗的方案都有其局限性,也不能最大限度地发挥各自的优势。笔者通过查阅并总结近年来相关文献,... 详细信息

肝外伴肝内胆管结石是普通外科常见病,其治疗方法既有传统手术,也包括内镜、腹腔镜及胆道镜技术在内的各种微创治疗措施。但单独应用每一项治疗的方案都有其局限性,也不能最大限度地发挥各自的优势。笔者通过查阅并总结近年来相关文献,就肝外伴肝内胆管结石的微创治疗现状与进展作一综述。

关键词：胆总管结石治疗内窥镜腹腔镜胆道镜综述文献

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肝胆管结石术中胆管引流方式合理选择

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中国实用外科杂志 2016年第3期36卷 286-289页

作者：周杰张起帆孙世波崔忠林南方医科大学南方医院肝胆外科广东广州510515

肝胆管结石病的处理中,胆管引流至关重要。不恰当的胆道内引流会使病情更趋复杂,并给进一步处理带来不必要的困难。肝叶切除是治疗肝胆管结石的主要手段。在取净结石的前提下,应主要根据Oddi括约肌的功能状态以及胆总管的扩张程度来决... 详细信息

肝胆管结石病的处理中,胆管引流至关重要。不恰当的胆道内引流会使病情更趋复杂,并给进一步处理带来不必要的困难。肝叶切除是治疗肝胆管结石的主要手段。在取净结石的前提下,应主要根据Oddi括约肌的功能状态以及胆总管的扩张程度来决定胆管引流方式,胆肠吻合的手术指征须严格控制。对于Oddi括约肌功能正常的病例,均应采用T管引流,无须行胆肠吻合。只有对确认胆总管下端炎性狭窄或Oddi括约肌松弛、合并胆总管高度扩张的病例,才有必要行胆肠吻合。

关键词：肝胆管结石胆道引流胆肠吻合

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微小RNA调控自噬信号通路的研究进展

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中华实验外科杂志 2014年第5期31卷 1157-1158页

作者：尤泊森陈晓宁孙世波哈尔滨医科大学附属第二医院普外科 150086

自噬是一种细胞成分的自我降解过程，它通过双层膜或单层膜包裹受损、变形、衰老或失去功能的蛋白质以及细胞器，从而形成自噬体，然后运送到溶酶体形成自噬溶酶体，降解其所包裹的内容物，进而实现细胞本身的代谢需要和细胞器的更新。

关键词：自噬体微小RNA 信号通路自噬溶酶体调控降解过程细胞成分细胞器

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CO_2气腹促进肿瘤生长及种植转移机制的研究进展

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哈尔滨医科大学学报 2009年第2期43卷 209-210,F0003页

作者：孙铁为吕瑞光孙世波哈尔滨医科大学第二临床医学院普外七科黑龙江哈尔滨150081

自法国Mouret完成第1例腹腔镜胆囊切除术以来,以腹腔镜为代表的微创外科技术在普外、妇产、泌尿、胸外和整形等各个领域得到广泛应用,微创外科正以前所未有的速度发展,被公认为是21世纪外科发展的主流方向之一。随着腹腔镜手术的应用范... 详细信息

自法国Mouret完成第1例腹腔镜胆囊切除术以来,以腹腔镜为代表的微创外科技术在普外、妇产、泌尿、胸外和整形等各个领域得到广泛应用,微创外科正以前所未有的速度发展,被公认为是21世纪外科发展的主流方向之一。随着腹腔镜手术的应用范围扩大,[第一段]

关键词：气腹肿瘤转移

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微小RNA对肿瘤影响的研究进展

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中华实验外科杂志 2007年第12期24卷 1607-1608页

作者：孙铁为王瑾吴德全孙世波哈尔滨医科大学附属第二医院普外一科 150086

微小RNA（miRNA）是一组小的非编码调控RNA，长度为21—23个核苷酸，miRNAs在物种进化中相当保守，在植物、动物和真菌中发现的miRNAs都是受到细胞类型和分化阶段严格调控的，只在特定的组织和发育阶段表达。

关键词：微小RNA miRNAs 肿瘤物种进化细胞类型阶段表达核苷酸调控

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肠系腹静脉阻塞误诊3例分析

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中国急救医学 1994年第6期14卷 39-41页

作者：韩德恩孙世波田素礼穆海燕哈医大二院外科大连市路灯管理处卫生所

肠系腹静脉阻塞误诊３例分析哈医大二院外科韩德恩，孙世波，田素礼大连市路灯管理处卫生所穆海燕肠系膜静脉阻塞早期诊断困难，随病情发展，病死率明显升高，有时切除大段肠管即使能挽救生命，结果也必然造成病人终生的营养吸收障碍，... 详细信息

肠系腹静脉阻塞误诊３例分析哈医大二院外科韩德恩，孙世波，田素礼大连市路灯管理处卫生所穆海燕肠系膜静脉阻塞早期诊断困难，随病情发展，病死率明显升高，有时切除大段肠管即使能挽救生命，结果也必然造成病人终生的营养吸收障碍，使其生活质量明显降低。本组３例早期...

关键词：肠系膜静脉阻塞误诊

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人白细胞介素-10基因的克隆与逆转录病毒载体的构建

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中华实验外科杂志 2006年第9期23卷 1064-1066页

作者：孙世波邰升张新宇哈尔滨医科大学附属第二医院肝胆外科 150086

目的克隆、测序人白细胞介素(hIL)-10基因片段,构建逆转录病毒载体(MSCV- hIL-10)。方法采用刀豆蛋白A活化的人外周血单个核细胞培养提取总RNA,设计随机引物并逆转录反应合成hIL-10 cDNA第1链,并以hIL-10特异性引物行PCR扩增,获得hIL-1... 详细信息

目的克隆、测序人白细胞介素(hIL)-10基因片段,构建逆转录病毒载体(MSCV- hIL-10)。方法采用刀豆蛋白A活化的人外周血单个核细胞培养提取总RNA,设计随机引物并逆转录反应合成hIL-10 cDNA第1链,并以hIL-10特异性引物行PCR扩增,获得hIL-10克隆基因片段,将hIL-10克隆基因片段,经双酶切后定向插入到逆转录病毒载体(MSCV)中,用脂质体法转染PT67包装细胞,以G418筛选阳性克隆。结果聚合酶链反应(PCR)扩增出534 bp特异性片段,测序结果表明同源性与GenBank报道完全一致,hIL-10基因片段插入MSCV载体中经转染包装后得到2×10~7 CFU／ml的分泌hIL-10的病毒悬液,hIL-10的分泌量为1220ng／10~6细胞·d^(-1)。结论成功克隆hIL-10开放阅读框架,成功构建MSCV-hIL-10重组质粒,获得高滴度的分泌hIL- 10的病毒悬液,hIL-10的表达可以应用于移植排斥的基因治疗。

关键词：克隆白细胞介素-10 逆转录病毒载体

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