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不同佐剂新城疫、禽流感二联灭活疫苗(全悬浮)对鸡体液免疫的影响

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中国兽医学报 2020年第4期40卷 691-694页

作者：李厚伟彭丹丹张先锋姬星宇胡永浩甘肃农业大学动物医学院甘肃兰州7300701 商丘美兰生物工程有限公司河南柘城476200

为了筛选新城疫、禽流感二联灭活疫苗生产所用的优质佐剂,选用3种白油和1种纳米铝胶佐剂同新城疫和禽流感病毒制成灭活疫苗,并分为A、B、C、D组,然后对各组疫苗进行无菌、物理性状、安全性及免疫效力检验。结果表明:由4种佐剂制备的疫... 详细信息

为了筛选新城疫、禽流感二联灭活疫苗生产所用的优质佐剂,选用3种白油和1种纳米铝胶佐剂同新城疫和禽流感病毒制成灭活疫苗,并分为A、B、C、D组,然后对各组疫苗进行无菌、物理性状、安全性及免疫效力检验。结果表明:由4种佐剂制备的疫苗的无菌性、物理性状及安全性均符合国家标准,但各组免疫效果不同,其中除了C组疫苗黏度较高且在第1周时吸收较慢外,其他组疫苗在安全性以及免疫效力方面均能达到理想效果,其中D组由纳米铝胶佐剂制备的疫苗免疫效果最佳,具有很好的应用价值。

关键词：佐剂新城疫禽流感灭活疫苗免疫效果

不同黏膜佐剂对猪丁型冠状病毒诱导小鼠免疫应答的影响

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微生物学报 2022年第7期62卷 2686-2701页

作者：李厚伟张先锋王彦辉姬星宇王蕾张真真李倩倩张云飞胡永浩甘肃农业大学动物医学院甘肃兰州730070 河南普华基因科技有限公司河南郑州450045 河南农业大学动物医学院河南郑州450046

【目的】旨在为猪丁型冠状病毒(porcine deltacoronavirus,PDCoV)灭活疫苗黏膜免疫筛选理想佐剂,降低疫苗副作用。利用小鼠模型评价不同佐剂制备的PDCoV灭活疫苗对体液免疫、细胞免疫和黏膜免疫应答的影响。【方法】将甘露聚糖肽(PA)、C... 详细信息

【目的】旨在为猪丁型冠状病毒(porcine deltacoronavirus,PDCoV)灭活疫苗黏膜免疫筛选理想佐剂,降低疫苗副作用。利用小鼠模型评价不同佐剂制备的PDCoV灭活疫苗对体液免疫、细胞免疫和黏膜免疫应答的影响。【方法】将甘露聚糖肽(PA)、CpGODN2395、单磷酰脂质A(MPLA)佐剂分别与IMS 1313、GEL02佐剂联合制备PDCoV灭活疫苗,经鼻腔免疫BALB/c小鼠;将ISA201佐剂制备的PDCoV灭活疫苗经皮下免疫BALB/c小鼠,将PDCoV灭活抗原经鼻腔免疫BALB/c小鼠作为对照,间隔14 d加强免疫一次。用ELISA方法检测小鼠血清、支气管肺泡灌洗液(BALF)中的IgG、IgG1、IgG2a、IL-4、IFN-γ及粪便和BALF中sIgA表达水平;用MTT方法检测疫苗免疫后对小鼠脾淋巴细胞增殖的影响;观察并记录小鼠免疫后的临床表现,HE染色方法观察免疫小鼠主要器官组织的病理学变化,评价疫苗的安全性。【结果】ISA201组小鼠BALF和血清中的抗体(IgG、IgG1)及IL-4表达水平相对较高,但IgG2a、IFN-γ和粪便中sIgA表达水平较低;相较于IMS 1313组、IMS1313+2395组、IMS1313+PA组、IMS1313+MPLA组,GEL02组、GEL02+2395组、GEL02+PA组、GEL02+MPLA组小鼠BALF和血清中的抗体(IgG、IgG1、IgG2a)、IL-4、IFN-γ及粪便中sIgA表达水平均较高;其中GEL02+2395组小鼠BALF和血清中IgG2a抗体、IFN-γ及BALF和粪便中sIgA表达水平显著高于其他组;GEL02+2395疫苗、IMS1313+2395疫苗可促进T淋巴细胞增殖;小鼠主要器官组织未见明显病理变化,GEL02疫苗、GEL02+2395疫苗免疫小鼠的副反应最轻微【。结论】GEL02与CpG ODN2395佐剂联合制备PDCoV灭活疫苗经鼻腔免疫小鼠,不仅可增强小鼠体液免疫水平,也可有效提高细胞免疫和黏膜免疫水平,为黏膜疫苗的研发提供数据支持。

关键词：猪丁型冠状病毒佐剂黏膜免疫

鸡新城疫-传染性支气管炎-禽流感(H9亚型)-鸡滑液囊支原体四联灭活疫苗免疫效果研究

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中国家禽 2024年第8期46卷 61-68页

作者：沈丹丹李双双周欣李厚伟丁丽萍姬星宇张先锋商丘美兰生物工程有限公司河南商丘476200 河南普华基因科技有限公司河南郑州450045 河南农业大学河南郑州450045

为探讨制备的鸡新城疫-传染性支气管炎-禽流感(H9亚型)-鸡滑液囊支原体四联灭活疫苗(以下简称新支流滑四联灭活疫苗)免疫效果,试验采用新城疫病毒(NDV)La Sota株接种BHK-21-sc悬浮细胞,用易感鸡胚增殖传染性支气管炎病毒(IBV)M41株,H9... 详细信息

为探讨制备的鸡新城疫-传染性支气管炎-禽流感(H9亚型)-鸡滑液囊支原体四联灭活疫苗(以下简称新支流滑四联灭活疫苗)免疫效果,试验采用新城疫病毒(NDV)La Sota株接种BHK-21-sc悬浮细胞,用易感鸡胚增殖传染性支气管炎病毒(IBV)M41株,H9亚型禽流感病毒(AIV)ML01株接种MDCK-sc悬浮细胞,用改良Frey氏培养基发酵培养鸡滑液囊支原体(MS)ML-MS1株,收获抗原液,制备新支流滑四联灭活疫苗,并对疫苗进行安全性和效力测定;以0.05、0.1、0.3 mL/只的剂量接种30日龄SPF鸡,免疫后7、14、21 d采血测定NDV HI和AIV(H9亚型)HI抗体,并于免疫后21 d进行NDV和AIV攻毒;30日龄SPF鸡首免H120株,免疫后21 d采血测定IBV HI抗体效价,并以0.05、0.1、0.3 mL/只的剂量进行二免,免疫后7、14、21、28 d采血测定IBV HI抗体;以0.05、0.1、0.3 mL/只的剂量接种30日龄SPF鸡,免疫后7、14、21、30 d采血测定MS ELISA抗体,并于免疫后30 d进行MS攻毒。结果显示:制备的新支流滑四联灭活疫苗安全性良好、效力合格;免疫后21 d NDV HI效价为6.6~8.8 log2,AIV HI效价为7.0~9.7 log2;免疫后28 d IBV HI效价为5.6~7.8 log2,且二免是首免的3.2~14.9倍;免疫后30 d MS ELISA效价为3 164~6 847;攻毒试验结果显示,0.05 mL/只剂量组对ML-MS1攻毒保护率为80%(8/10),其余组均为100%(10/10)保护。研究表明,新支流滑四联灭活疫苗对SPF鸡安全、有效,以0.1 mL/只剂量免疫SPF鸡可获得较好的免疫效果。

关键词：新城疫传染性支气管炎 H9亚型禽流感滑液囊支原体灭活疫苗免疫效果

鸡新城疫中药免疫增强剂灭活疫苗的制备及免疫效果观察

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河南畜牧兽医（综合版） 2018年第3期39卷 7-8页

作者：张雯雯姬星宇乔云龙李自波胡玉胜河南省畜牧局河南郑州450008 商丘美兰生物工程有限公司

利用当归多糖的免疫活性，制备鸡新城疫中药免疫增强剂灭活疫苗，经安全检验、稳定性检验、无菌检验，合格后免疫实验用鸡，二免后每周采集血清检测抗体水平和鸡γ干扰素（IFN-γ）水平，并设立对照组。经检验，制备的鸡新城疫中药免疫... 详细信息

利用当归多糖的免疫活性，制备鸡新城疫中药免疫增强剂灭活疫苗，经安全检验、稳定性检验、无菌检验，合格后免疫实验用鸡，二免后每周采集血清检测抗体水平和鸡γ干扰素（IFN-γ）水平，并设立对照组。经检验，制备的鸡新城疫中药免疫增强剂灭活疫苗抗体水平高于传统灭活疫苗，（IFN-γ）水平均高于传统疫苗，显示良好的免疫效果。

关键词：当归多糖中药免疫增强剂鸡新城疫抗体 IFN-γ

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复方中药制剂中连翘苷提取工艺的比较研究

河南畜牧兽医 2022年第10期43卷 11-13页

作者：王彦辉姬星宇焦金英李自波高媛媛河南中盛动物药业有限公司河南郑州450008 河南普华基因科技有限公司

目的:探讨不同提取方法对含连翘的复方中药制剂中连翘苷提取率的影响。方法:以连翘苷含量为考察指标,比较研究分煎、合煎、醇提和超声提等提取方式所得中药复方制剂中连翘苷提取率。结果:采用整体投料,传统水提工艺提取所得连翘苷提取... 详细信息

目的:探讨不同提取方法对含连翘的复方中药制剂中连翘苷提取率的影响。方法:以连翘苷含量为考察指标,比较研究分煎、合煎、醇提和超声提等提取方式所得中药复方制剂中连翘苷提取率。结果:采用整体投料,传统水提工艺提取所得连翘苷提取率最高,提取率达66.6%。结论:传统合煎法是复方中药制剂连翘苷提取的最佳工艺。

关键词：复方中药制剂连翘连翘苷提取工艺

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不同产地鱼腥草中4种活性成分分析评价

江苏农业科学 2020年第1期48卷 193-199页

作者：焦金英姬星宇李自波李国辉王彦辉余祖功商丘美兰生物工程有限公司河南商丘476000 南京农业大学江苏南京210095 河南普华基因科技有限公司河南郑州450000

研究旨在建立一种鲜鱼腥草蒸馏液中4种活性成分4-萜品醇、α-松油醇、乙酸龙脑酯、甲基正壬酮的含量测定的气相色谱法,应用该方法测定不同产地鱼腥草的4种活性成分含量。参照鱼腥草注射液质量标准,建立4种活性成分含量测定的前处理和气... 详细信息

研究旨在建立一种鲜鱼腥草蒸馏液中4种活性成分4-萜品醇、α-松油醇、乙酸龙脑酯、甲基正壬酮的含量测定的气相色谱法,应用该方法测定不同产地鱼腥草的4种活性成分含量。参照鱼腥草注射液质量标准,建立4种活性成分含量测定的前处理和气相色谱检测法,并对其进行方法学验证;应用所建方法对湖北省、四川省、贵州省、广东省广州市4个地区的鲜鱼腥草中活性成分进行测定分析。结果表明,所建立的方法专属性强,4种活性成分在0.1~1.5 mg/mL的范围内,相关系数均大于0.999,线性关系优良,方法重复性试验样品中4种成分平均RSD≤1.2%,中间精密度试验样品中4种成分平均RSD≤1.3%,精密度好,回收率在80%~120%之间,准确度高。测得湖北省、四川省、贵州省的4种成分含量均符合规定,其中以湖北和四川地区含量相对较高。上述研究可为鱼腥草的药材选择、鱼腥草药材内在质量的综合评价和全面控制提供新的参考依据。

关键词：鱼腥草不同产地活性成分气相色谱法

猪丁型冠状病毒在悬浮培养猪肾细胞LLC-PK1上的增殖特性分析

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畜牧兽医学报 2022年第6期53卷 2024-2028页

作者：李厚伟王蕾张先锋胡慧张真真张云飞刘林涛姬星宇胡永浩甘肃农业大学动物医学院兰州730070 商丘美兰生物工程有限公司柘城476200 河南农业大学动物医学院郑州450046

旨在分析猪丁型冠状病毒(porcine deltacoronavirus,PDCoV)在悬浮培养的猪肾细胞LLC-PK1上的增殖特性,为PDCoV灭活疫苗的规模化生产提供细胞材料。采用逐步降血清法优化LLC-PK1细胞悬浮培养工艺;利用有限稀释法筛选PDCoV适应性细胞株;... 详细信息

旨在分析猪丁型冠状病毒(porcine deltacoronavirus,PDCoV)在悬浮培养的猪肾细胞LLC-PK1上的增殖特性,为PDCoV灭活疫苗的规模化生产提供细胞材料。采用逐步降血清法优化LLC-PK1细胞悬浮培养工艺;利用有限稀释法筛选PDCoV适应性细胞株;利用间接免疫荧光法鉴定PDCoV对LLC-PK1细胞的感染性;分别对PDCoV接种LLC-PK1悬浮细胞的初始密度、MOI、收毒时间、TPCK胰酶浓度等参数进行优化,确定最佳悬浮培养条件。成功筛选出可高效增殖PDCoV的单克隆悬浮细胞株LLC-PK1Sa,且利用其增殖的PDCoV可特异性的感染LLC-PK1细胞;PDCoV按MOI为10^(-3)接种于密度为2×10^(6) cells·mL^(-1)的LLC-PK1Sa细胞,当TPCK胰酶终浓度达到7.5μg·mL^(-1)时,接毒后48 h收获的病毒液滴度最高。本研究首次实现了PDCoV在LLC-PK1Sa悬浮细胞中的高效增殖,并对悬浮培养条件进行了初步优化,可为PDCoV灭活疫苗的规模化生产提供理论参考。

关键词： LLC-PK1细胞悬浮培养猪丁型冠状病毒

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黄芪抗炎作用的研究进展

河南畜牧兽医 2022年第11期43卷 7-9页

作者：王彦辉赵自冰李自波姬星宇李红霞河南中盛动物药业有限公司河南郑州450000 河南普华基因科技有限公司河南省畜牧兽医服务中心

黄芪作为一种传统中草药,具有多种药理学功能,其抗炎作用备受关注。综合近年来国内外学者的研究,从对趋化因子、细胞因子、黏附分子、信号通道的影响论述了黄芪抗炎的研究进展,希望能够为黄芪的开发与临床应用提供参考。

关键词：黄芪抗炎

BHK-21细胞规模化培养鸡新城疫病毒工艺的研究和初步应用

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中国兽医杂志 2023年第7期59卷 54-61页

作者：周欣丁丽萍李庆东侯乐孜沈丹丹李双双姬星宇张先锋商丘美兰生物工程有限公司河南商丘476200 河南普华基因科技有限公司河南郑州450045 商丘市动物检疫和疫病预防控制中心河南商丘476000 河南农业大学动物医学院河南郑州450046

为了实现鸡新城疫病毒HN2018株(基因Ⅶ型)在乳仓鼠肾(BHK-21)细胞上的无血清规模化培养,本试验采用悬浮培养技术驯化和筛选了1株能够稳定传代的BHK-21-xh悬浮细胞株;使用该细胞以初始密度为100×10^(4)个/mL接种摇瓶进行培养,并对摇瓶... 详细信息

为了实现鸡新城疫病毒HN2018株(基因Ⅶ型)在乳仓鼠肾(BHK-21)细胞上的无血清规模化培养,本试验采用悬浮培养技术驯化和筛选了1株能够稳定传代的BHK-21-xh悬浮细胞株;使用该细胞以初始密度为100×10^(4)个/mL接种摇瓶进行培养,并对摇瓶培养鸡新城疫病毒HN2018株的接毒细胞密度、培养温度、接毒量、收毒时间等工艺参数进行摸索和优化;利用摇瓶优化的病毒培养工艺,在10和100 L生物反应器中逐级放大培养BHK-21-xh悬浮细胞,接种鸡新城疫病毒;采用生物反应器悬浮培养的鸡新城疫病毒HN2018株细胞毒与鸡胚毒分别制备成灭活疫苗,免疫SPF鸡进行免疫效力的比较。结果显示,在摇瓶中培养72 h细胞密度均不低于800×10^(4)个/mL,细胞活率均不低于96%;按照BHK-21-xh细胞密度不低于800×10^(4)个/mL,病毒感染复数(MOI)为0.216进行接毒,同时添加终浓度为20μg/mL的胰蛋白酶,于35℃温度条件下培养64~72 h收获病毒液,鸡新城疫悬浮培养细胞毒红细胞凝集(HA)效价最高能够达到10log 2。在生物反应器中接种鸡新城疫病毒,其HA效价均能达到10log 2。细胞苗与鸡胚苗免疫效力相当,攻毒后均能获得100%保护,且免疫血清红细胞凝集抑制(HI)抗体效价均远高于新城疫国家标准。结果表明,应用细胞无血清全悬浮培养技术规模化培养鸡新城疫病毒HN2018株,生产工艺稳定,获得的抗原效价和纯度高,制备的灭活疫苗免疫效力良好,能够应用于新城疫疫苗的规模化生产。

关键词： BHK-21-xh细胞新城疫病毒生物反应器悬浮培养