猪丁型冠状病毒在悬浮培养猪肾细胞LLC-PK1上的增殖特性分析

作     者：李厚伟 王蕾 张先锋 胡慧 张真真 张云飞 刘林涛 姬星宇 胡永浩 LI Houwei;WANG Lei;ZHANG Xianfeng;HU Hui;ZHANG Zhenzhen;ZHANG Yunfei;LIU Lintao;JI Xingyu;HU Yonghao

作者机构：甘肃农业大学动物医学院兰州730070 商丘美兰生物工程有限公司柘城476200 河南农业大学动物医学院郑州450046 

出 版 物：《畜牧兽医学报》 (ACTA VETERINARIA ET ZOOTECHNICA SINICA)

年 卷 期：2022年第53卷第6期

页      面：2024-2028页

核心收录：

学科分类：090601[农学-基础兽医学] 09[农学] 0906[农学-兽医学] 

基　　金：国家自然科学基金面上项目(31772773,31972678) 河南省重大科技专项(181100110500) 

主　　题：LLC-PK1细胞 悬浮培养 猪丁型冠状病毒 

摘      要：旨在分析猪丁型冠状病毒(porcine deltacoronavirus,PDCoV)在悬浮培养的猪肾细胞LLC-PK1上的增殖特性,为PDCoV灭活疫苗的规模化生产提供细胞材料。采用逐步降血清法优化LLC-PK1细胞悬浮培养工艺;利用有限稀释法筛选PDCoV适应性细胞株;利用间接免疫荧光法鉴定PDCoV对LLC-PK1细胞的感染性;分别对PDCoV接种LLC-PK1悬浮细胞的初始密度、MOI、收毒时间、TPCK胰酶浓度等参数进行优化,确定最佳悬浮培养条件。成功筛选出可高效增殖PDCoV的单克隆悬浮细胞株LLC-PK1Sa,且利用其增殖的PDCoV可特异性的感染LLC-PK1细胞;PDCoV按MOI为10^(-3)接种于密度为2×10^(6) cells·mL^(-1)的LLC-PK1Sa细胞,当TPCK胰酶终浓度达到7.5μg·mL^(-1)时,接毒后48 h收获的病毒液滴度最高。本研究首次实现了PDCoV在LLC-PK1Sa悬浮细胞中的高效增殖,并对悬浮培养条件进行了初步优化,可为PDCoV灭活疫苗的规模化生产提供理论参考。