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Y染色体AZFa区部分缺失1例并文献复习

中华男科学杂志 2019年第10期25卷 953-955页

作者：姜柯安陈霞梁玉冰童珂雅叶虹重庆市妇幼保健院遗传与生殖研究所

全球约有15%的育龄夫妇不孕不育,其中男性因素约占50%,由遗传缺陷导致的男性不育约为30%。研究表明,Y染色体的Yq11区存在与精子发生密切相关的基因家族,被命名为无精子因子(azoospermia factor,AZF),该区域可分为3个亚区,即AZFa、AZFb、... 详细信息

全球约有15%的育龄夫妇不孕不育,其中男性因素约占50%,由遗传缺陷导致的男性不育约为30%。研究表明,Y染色体的Yq11区存在与精子发生密切相关的基因家族,被命名为无精子因子(azoospermia factor,AZF),该区域可分为3个亚区,即AZFa、AZFb、AZFc。Y染色体微缺失是引起男性不育症的重要遗传因素之一,本实验室在临床中发现1例Y染色体AZFa区sY86位点单独缺失的罕见病例,现对其进行报告如下。

关键词：男性不育 Y染色体微缺失无精子因子(AZF) 部分缺失

染色体微阵列分析技术在产前致病性拷贝数变异诊断中的应用

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实用妇产科杂志 2021年第10期37卷 783-789页

作者：童珂雅何瑶陈科姜柯安刘东云重庆市妇幼保健院重庆市生殖医学临床研究中心人类胚胎工程重庆市重点实验室重庆400010

目的:探讨染色体微阵列分析(CMA)技术在产前致病性拷贝数变异(CNV)诊断中的应用价值。方法:收集2017年3月至2020年4月在重庆市妇幼保健院行羊膜腔穿刺术且要求行CMA检测的单胎妊娠孕妇共4430例。根据羊水穿刺的临床指征分为6组:A组:单... 详细信息

目的:探讨染色体微阵列分析(CMA)技术在产前致病性拷贝数变异(CNV)诊断中的应用价值。方法:收集2017年3月至2020年4月在重庆市妇幼保健院行羊膜腔穿刺术且要求行CMA检测的单胎妊娠孕妇共4430例。根据羊水穿刺的临床指征分为6组:A组:单一高龄组;B组:单一唐氏筛查高风险组;C组:单一超声检查异常组;D组:单一无创产前检测(NIPT)高风险组;E组:超声检查异常合并高龄/唐氏筛查高风险/NIPT高风险两个或两个以上指征,F组:NIPT高风险合并高龄/唐氏筛查高风险/超声异常两个或两个以上指征;G组:其他组。结果:(1)4430例中CMA检测胎儿异常率11.74%,其中非整倍体异常119例(2.69%),CNVs 381例(8.60%),包含致病性拷贝数变异(pCNVs)77例。(2)不同临床指征的羊水CMA检测结果提示,单一临床指征中D组染色体异常总检出率(33.20%),CNVs检出率(19.31%),非整倍体率(10.89%),包括性染色体非整倍体率(6.93%)均显著高于其他各组(P<0.05)。C组的总检出率仅次于D组。E、F组总检出率(19.76%,55.00%),包括非整倍体率(11.01%,42.50%)均显著高于C、D组(P<0.05)。(3)77例pCNVs中,31例为染色体大片段缺失和(或)重复,其中8例遗传自平衡易位的父母。46例染色体微缺失/微重复综合征,包括23例染色体微缺失/微重复性pCNVs和23例神经发育障碍的易感性CNVs。结论:CMA检测是产前遗传学诊断的有效方法之一。NIPT和超声检查是筛查羊水染色体异常的有效手段,针对不同种类的胎儿pCNVs,应合理建议核型分析或家系CMA验证的方法确定pCNVs来源和致病性,再结合超声检查、胎儿CMA结果以及双亲表型,为妊娠提供合理的指导意见,并对出生后的胎儿定期做随访,为产前胎儿评估积累更多的经验。

关键词：染色体微阵列分析无创产前检测超声检查致病性拷贝数变异出生缺陷

产肠毒素大肠杆菌987P菌毛蛋白FasA亚单位的原核表达及其免疫原性

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中国生物制品学杂志 2012年第9期25卷 1102-1105页

作者：贺志良姜柯安宋方洲马永平重庆医科大学生物化学与分子生物学教研室重庆400016 重庆医科大学分子医学与肿瘤研究中心重庆400016

目的表达、纯化产肠毒素大肠杆菌(Enterotoxigenic Escherichia coli,ETEC)987P菌毛蛋白FasA亚单位,并检测其免疫原性。方法将去掉5′端信号肽序列的fasA基因克隆至原核表达载体pQE-30中,构建重组表达质粒pQE-30-fasA,转化*** M15,0.5 m... 详细信息

目的表达、纯化产肠毒素大肠杆菌(Enterotoxigenic Escherichia coli,ETEC)987P菌毛蛋白FasA亚单位,并检测其免疫原性。方法将去掉5′端信号肽序列的fasA基因克隆至原核表达载体pQE-30中,构建重组表达质粒pQE-30-fasA,转化*** M15,0.5 mmol/L IPTG诱导表达。表达的融合蛋白6×His-FasA经Ni-Agarose His纯化和复性后,经皮下多点注射免疫BALB/c小鼠,每次100μg,共免疫3次,间隔2周,末次免疫10 d后,摘除小鼠眼球取血,分离血清,采用间接ELISA法检测抗血清效价。结果重组表达质粒pQE-30-fasA经PCR、双酶切和测序证实构建正确;表达的6×His-FasA融合蛋白相对分子质量约为18 500,主要以包涵体形式表达,表达量占菌体总蛋白的30%;纯化的蛋白纯度可达95%,浓度为0.6 mg/ml,免疫小鼠所得抗血清效价为1∶125 000。结论已成功在*** M15中表达了6×His-FasA融合蛋白,纯化的融合蛋白免疫原性良好,为进一步研制以双歧杆菌为表达系统的新型ETEC亚单位口服疫苗奠定了基础。

关键词：产毒素大肠杆菌菌毛蛋白质类 FasA亚单位原核细胞基因表达免疫原性

产肠毒素大肠杆菌K88菌毛蛋白与大肠杆菌不耐热肠毒素b亚单位的原核表达及其鼻腔免疫效果

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中国生物制品学杂志 2012年第9期25卷 1091-1094页

作者：姜柯安贺志良宋方洲马永平重庆医科大学生物化学与分子生物学教研室重庆医科大学分子医学与肿瘤研究中心重庆400016

目的原核表达产肠毒素大肠杆菌(Enterotoxigenic Escherichia coli,ETEC)K88菌毛蛋白与大肠杆菌不耐热肠毒素(Heat-labile enterotoxin,LT)b亚单位(LTb),并评价其鼻腔免疫效果。方法采用PCR技术分别扩增不含信号肽的K88和LTb基因,克隆... 详细信息

目的原核表达产肠毒素大肠杆菌(Enterotoxigenic Escherichia coli,ETEC)K88菌毛蛋白与大肠杆菌不耐热肠毒素(Heat-labile enterotoxin,LT)b亚单位(LTb),并评价其鼻腔免疫效果。方法采用PCR技术分别扩增不含信号肽的K88和LTb基因,克隆至表达载体pQE30中,构建重组表达质粒pQE30-K88和pQE30-LTb,转化大肠杆菌M15,IPTG诱导表达。表达的重组K88和LTb蛋白纯化、复性后,进行SDS-PAGE分析。分别用K88单独、K88联合LTb滴鼻免疫BALB/c小鼠,以生理盐水作为对照,每次间隔1周,共4次,末次免疫后10 d,分离血清,并收集鼻腔和小肠黏膜冲洗液,间接ELISA法检测各组血清特异性IgG和黏膜sIgA抗体水平。结果重组表达质粒pQE30-K88和pQE30-LTb经双酶切和测序证实构建正确;表达的重组K88和LTb蛋白相对分子质量分别为28 100和12 500,表达量分别约占菌体总蛋白的35%和40%,主要以包涵体形式存在;纯化复性后的重组蛋白纯度均可达95%以上。K88联合LTb滴鼻免疫组血清特异性IgG及鼻腔、小肠黏膜冲洗液中特异性SIgA水平均较K88单独免疫组和对照组明显增高,且差异有统计学意义(P<0.01)。结论在大肠杆菌中高效表达并纯化了重组K88和LTb蛋白,K88联合LTb滴鼻免疫BALB/c小鼠后,可增强特异性血清抗体反应,且诱导了黏膜免疫应答,为将来开发新型的ETEC基因工程疫苗奠定了基础。

关键词：产肠毒素大肠杆菌 K88菌毛蛋白大肠杆菌不耐热肠毒素b亚单位原核细胞基因表达黏膜免疫

49例同型地中海贫血携带者产前基因诊断分析

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重庆医学 2017年第10期46卷 1360-1362页

作者：姜柯安刘东云陈霞李雪齐贾朝莉黄国宁重庆市妇幼保健院遗传与生殖研究所 400013

目的探讨防止严重类型地中海贫血(简称地贫)患儿出生的有效手段和重要意义。方法 2013年1月至2015年12月于该院产前检查的孕妇及配偶通过地贫筛查和基因诊断,对确诊的49例同型地贫携带者夫妇进行羊水地贫产前基因诊断,并在产前诊断后进... 详细信息

目的探讨防止严重类型地中海贫血(简称地贫)患儿出生的有效手段和重要意义。方法 2013年1月至2015年12月于该院产前检查的孕妇及配偶通过地贫筛查和基因诊断,对确诊的49例同型地贫携带者夫妇进行羊水地贫产前基因诊断,并在产前诊断后进行随访。结果在49例同型地贫携带者夫妇中,基因诊断检测出α-地贫主要突变类型为--^(SEA)/αα(50.0%)、-α^(3.7)/αα(36.5%)、-α^(4.2)/αα(11.5%),β-地贫主要突变类型为CD17/N(42.0%)、CD41-42/N(26.0%)、IVS-Ⅱ-654/N(22.0%)。产前诊断检测出HbH病4例,Bart′s水肿胎儿2例,重型β-地贫10例,α-地贫携带者19例,β-地贫携带者10例,α-地贫合并β-地贫1例,健康胎儿3例。随访结果与产前诊断结果相符。结论通过开展地贫产前筛查和产前诊断能有效地防止重症地贫患儿出生。

关键词：地中海贫血基因诊断产前诊断

人轮状病毒vp4全基因原核穿梭表达质粒的构建及鉴定

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中国生物制品学杂志 2011年第10期24卷 1126-1129页

作者：李世彬李江贺志良姜柯安张璐渝刘革力马永平重庆医科大学分子医学与肿瘤研究中心生物化学与分子生物学教研室重庆400016

目的构建人轮状病毒(Rotavirus,RV)vp4全基因原核穿梭表达质粒,经大肠杆菌表达验证后转化入双歧杆菌。方法从pMD19-T simple-vp4质粒中扩增RV vp4全基因,克隆至pBEX载体中,构建重组表达质粒pBEX-vp4,转化至大肠杆菌BL21(DE3)中进行表达,... 详细信息

目的构建人轮状病毒(Rotavirus,RV)vp4全基因原核穿梭表达质粒,经大肠杆菌表达验证后转化入双歧杆菌。方法从pMD19-T simple-vp4质粒中扩增RV vp4全基因,克隆至pBEX载体中,构建重组表达质粒pBEX-vp4,转化至大肠杆菌BL21(DE3)中进行表达,经SDS-PAGE和Western blot鉴定后,电转化法将重组质粒转化入双歧杆菌,提取质粒,进行PCR及双酶切鉴定。结果重组表达质粒pBEX-vp4经酶切、PCR和测序证明构建正确;在大肠杆菌BL21(DE3)中可表达相对分子质量约87 000的重组VP4蛋白,表达量较低,以包涵体形式表达,可与羊抗人轮状病毒多克隆抗体特异性结合;经PCR及双酶切鉴定,重组质粒pBEX-vp4已成功转入双歧杆菌中。结论重组表达质粒pBEX-vp4可在大肠杆菌中表达RV VP4蛋白,并可经电转化法有效地将重组表达质粒转化入双歧杆菌,为下一步在双歧杆菌中进行表达及研制基于双歧杆菌表达系统的RV重组亚单位口服活疫苗奠定了基础。

关键词：轮状病毒疫苗 vp4 双歧杆菌

25371例不孕不育患者地中海贫血基因型分布调查

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实用妇产科杂志 2018年第5期34卷 390-393页

作者：姜柯安刘东云陈霞陈文红贾朝莉黄国宁重庆市妇幼保健院遗传与生殖研究所重庆400013

目的:了解重庆及周边地区不孕不育患者地中海贫血(简称地贫)的基因携带率和突变类型,为开展胚胎植入前地贫基因诊断提供基础资料。方法:通过血液学参数分析筛查来我院就诊的不孕不育患者25371例,其中重庆籍16684例,四川籍4253例,贵州籍2... 详细信息

目的:了解重庆及周边地区不孕不育患者地中海贫血(简称地贫)的基因携带率和突变类型,为开展胚胎植入前地贫基因诊断提供基础资料。方法:通过血液学参数分析筛查来我院就诊的不孕不育患者25371例,其中重庆籍16684例,四川籍4253例,贵州籍2050例,云南西藏等其他地区籍贯2384例;对筛查阳性者用Gap-PCR和反向点杂交技术进行地贫基因诊断分析。结果:共检出828例地贫携带者,总携带率为3.26%;其中重庆籍携带率为3.35%,四川籍携带率为3.48%,贵州籍携带率2.93%,云南西藏等地区籍携带率为2.56%;各籍贯间地贫携带率差异无统计学意义(P>0.05)。共检测出9种α-地贫基因型和11种β-地贫基因突变类型,其中最常见的α-地贫基因型为-α^(3.7)/αα、-^(SEA)/αα、-α^(4.2)/αα,最常见的β-地贫基因突变类型为CD41-42、CD17、IVS-Ⅱ-654。结论:重庆及周边地区不孕不育患者具有较高地贫携带率,在本地区对不孕不育患者提供遗传指导,开展胚胎植入前地贫基因诊断对减少患者负担具有重要临床意义。

关键词：地中海贫血基因诊断植入前基因诊断

厂商炒作实在“猛”市场反应有点“淡” 005

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产肠毒素大肠埃希菌CfaB亚单位的免疫原性分析

科技日报

作者：姜柯安邢人洁胡良友乔地

“液晶”呼啸而来每年暑期，电脑市场就会随着学生的“解放”而热卖，业内人士称之为“暑卖”。今年暑期，对于大多数电脑迷尤其是大、中、小学生来说，众多商?

关键词：

来源： cnki报纸评论

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中国微生态学杂志 2012年第3期24卷 215-218页

作者：贺志良姜柯安宋方洲马永平重庆医科大学生物化学与分子生物学教研室重庆400016 重庆医科大学分子医学与肿瘤研究中心重庆400016

目的表达并纯化产肠毒素大肠埃希菌(Enterotoxigenic Escherichia coli,ETEC)CFA/I定居因子的CfaB亚单位,分析其免疫原性。方法将不含信号肽序列的cfaB基因克隆到pQE-30上,构建重组质粒pQE-30-cfaB并转化*** M15,表达融合蛋白6×His-Cf... 详细信息

目的表达并纯化产肠毒素大肠埃希菌(Enterotoxigenic Escherichia coli,ETEC)CFA/I定居因子的CfaB亚单位,分析其免疫原性。方法将不含信号肽序列的cfaB基因克隆到pQE-30上,构建重组质粒pQE-30-cfaB并转化*** M15,表达融合蛋白6×His-CfaB,将表达的蛋白纯化和复性后免疫BALB/c小鼠,制备抗CfaB的抗血清,用ELISA法检测抗血清效价。结果 6×His-CfaB融合蛋白高效表达,相对分子质量为15.5 kD,纯化复性后免疫小鼠所得抗血清效价为1∶125000。结论成功构建了高效表达6×His-CfaB融合蛋白的重组质粒,表达的融合蛋白免疫小鼠后获得了高效价的抗血清,为进一步研制以双歧杆菌为表达系统的新型ETEC亚单位口服疫苗奠定了基础。

关键词： CfaB亚单位原核表达抗血清免疫原性