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何首乌二苯乙烯合成酶基因FmSTS2的克隆,鉴定和与二苯乙烯苷表达关系分析

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药物生物技术 2013年第2期20卷 124-127页

作者：陆娣赵炜夏晚霞赵树进南方医科大学广东广州510515 广州军区广州总医院广东广州510010

克隆并鉴定何首乌中二苯乙烯合成酶基因FmSTS2,并研究其在何首乌各组织的表达与二苯乙烯苷表达的关系,为研究二苯乙烯合成酶基因在二苯乙烯苷合成及其调控中的功能奠定基础。采用互补cDNA末端快速扩增技术克隆目的片段,得到一种二苯乙... 详细信息

克隆并鉴定何首乌中二苯乙烯合成酶基因FmSTS2,并研究其在何首乌各组织的表达与二苯乙烯苷表达的关系,为研究二苯乙烯合成酶基因在二苯乙烯苷合成及其调控中的功能奠定基础。采用互补cDNA末端快速扩增技术克隆目的片段,得到一种二苯乙烯合成酶基因FmSTS2(GeneBank登录号:JX914503),其互补cDNA全长1 644 bp。将FmSTS2连接pET-28a原核表达载体并转化BL21大肠杆菌构建原核表达系统,Ni-NTA亲和树脂纯化可溶性蛋白后以丙二酰-COA和香豆酰-COA为底物进行催化反应,HPLC鉴定反应产物为含有二苯乙烯母核的白藜芦醇,证明FmSTS2是一种二苯乙烯合成酶基因。HPLC测定何首乌各组织二苯乙烯苷含量;RT-PCR检测何首乌的块根,老藤,茎,叶中表达FmSTS2的程度依次降低,与二苯乙烯苷在各个组织的含量高低一致。

关键词： FmSTS2 二苯乙烯苷原核表达活性鉴定基因表达

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体外模拟消化维生素C和钙软糖的动力学研究

现代食品科技 2018年第11期34卷 83-88,274页

作者：徐晓飞钟浩权刘玮夏晚霞杨继国维乐维营养与健康研究中心广东广州510623 华南协同创新研究院广东东莞523808 华南理工大学食品科学与工程学院广东广州510640

采用体外模拟消化法对钙软糖和维生素C软糖功效成分的释放动力学进行研究,对软糖的微观结构进行表征,并考察膳食成分对软糖功效成分在模拟胃液中释放的影响。结果显示,维生素C软糖和钙软糖的崩解时限分别为155 min和22 min;维生素C软糖... 详细信息

采用体外模拟消化法对钙软糖和维生素C软糖功效成分的释放动力学进行研究,对软糖的微观结构进行表征,并考察膳食成分对软糖功效成分在模拟胃液中释放的影响。结果显示,维生素C软糖和钙软糖的崩解时限分别为155 min和22 min;维生素C软糖功效成分,在2 h内逐步释放,2 h其功效成分释放93.6%,钙软糖功效成分30 min内释放率接近100%。微观结构显示,两种软糖胶体都呈现基本的胶体网状结构,但网络结构的形态并不相同。维生素C软糖的释放动力以Higuchi的拟合效果最好,符合骨架缓释制剂释放规律,而钙软糖则以一级动力拟合最佳。此外,胃液含5%淀粉会减缓维生素C软糖中功效成分的释放,而其它膳食成分对其释放无显著影响,钙软糖在模拟胃液中的消化释放特性不受膳食成分的影响。结果表明:与片剂和硬胶囊剂相比,软糖的崩解时间和消化释放速度均较缓慢,具有一定的缓释作用。

关键词：功能食品体外模拟消化崩解微观结构

双链RNA干扰技术在毛状根体系中对何首乌芪合酶基因Fm STS功能研究中的应用

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安徽农业科学 2012年第16期40卷 8818-8822页

作者：朱宽鹏夏晚霞赵树进华南理工大学生物科学与工程学院广东广州510640 广州军区广州总医院药剂科广东广州510010

[目的]将双链RNA介导的基因沉默与发根农杆菌瞬间表达渗入相结合,为植物功能基因的研究提供一套有效的方法。[方法]构建含gfp基因、CaMV 35S启动子及基于何首乌中芪合酶Fm STS基因序列设计的双链RNA的干扰重组质粒pBIN-35S-正向-反向-G... 详细信息

[目的]将双链RNA介导的基因沉默与发根农杆菌瞬间表达渗入相结合,为植物功能基因的研究提供一套有效的方法。[方法]构建含gfp基因、CaMV 35S启动子及基于何首乌中芪合酶Fm STS基因序列设计的双链RNA的干扰重组质粒pBIN-35S-正向-反向-GFP(干扰),并将其与空白表达质粒pBIN-35S-GFP(空白)分别导入野生型发根农杆菌MSU440中,转化何首乌无菌苗的叶片,诱导生成毛状根。[结果]双链RNA介导的芪合酶Fm STS基因表达沉默,空白对照组二苯乙烯苷含量为2.18 mg/g,是双链RNA干扰组(0.65 mg/g)的3倍多。[结论]应用dsRNA介导的RNAi能有效沉默何首乌Fm STS基因,芪合酶Fm STS基因是何首乌中二苯乙烯苷合成代谢的关键酶基因。

关键词： dsRNA RNAi 何首乌二苯乙烯苷毛状根次级代谢

何首乌中Ⅲ型聚酮合酶基因FmPKS2的原核表达及鉴定

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现代生物医学进展 2013年第2期13卷 216-220页

作者：陆娣赵炜夏晚霞赵树进广州军区广州总医院药学部广东广州510010 南方医科大学广东广州510515

目的:对传统中药何首乌中Ⅲ型聚酮合酶基因FmPKS2进行原核表达并鉴定重组蛋白酶活性,为研究该酶基因在何首乌有效成分代谢合成及其调控中的功能奠定基础。方法:根据何首乌FmPKS2(GenBank登录号:GQ984139)基因序列,通过PCR扩增其全长的... 详细信息

目的:对传统中药何首乌中Ⅲ型聚酮合酶基因FmPKS2进行原核表达并鉴定重组蛋白酶活性,为研究该酶基因在何首乌有效成分代谢合成及其调控中的功能奠定基础。方法:根据何首乌FmPKS2(GenBank登录号:GQ984139)基因序列,通过PCR扩增其全长的编码区,克隆至原核表达载体PET-28a,构建重组质粒PET-FmPKS2,将其转化原核表达菌株*** BL21(DE3),并用IPTG诱导表达,SDS-PAGE鉴定融合蛋白可溶性,通过Ni-NTA亲和树脂纯化可溶性蛋白后以丙二酰-COA和香豆酰-COA为底物进行催化反应,TLC鉴定反应产物。结果:经过诱导,重组菌表达分子量为42KD左右的融合蛋白,其中可溶性重组蛋白最优表达条件为IPTG浓度0.5 mmol/L,诱导时间6h,温度25℃。纯化后的可溶性重组蛋白催化丙二酰-COA和香豆酰-COA得到的产物经TLC鉴定为二苯乙烯类化合物白藜芦醇。结论:成功实现FmPKS2的原核表达且融合蛋白以可溶形式存在,催化反应证明FmPKS2融合蛋白具有二苯乙烯合酶的活性。

关键词： FmPKS2 原核表达融合蛋白活性鉴定

植物芪类合成途径相关酶、基因和调控机制研究进展

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现代生物医学进展 2013年第3期13卷 573-577页

作者：陆娣朱宽鹏夏晚霞赵树进广州军区广州总医院药学部广东广州510010 南方医科大学广东广州510515 华南理工大学生物科学与工程学院广东广州510006

植物芪类化合物,是一类具有抗菌植保作用的次生代谢产物,因具有抑菌、抗氧化、抗肿瘤等多种生物活性而越来越受到重视。本文对植物芪类生物合成途径中涉及到的相关酶、基因和代谢调控机制的研究现状和应用系统生物学研究芪类生物合成途... 详细信息

植物芪类化合物,是一类具有抗菌植保作用的次生代谢产物,因具有抑菌、抗氧化、抗肿瘤等多种生物活性而越来越受到重视。本文对植物芪类生物合成途径中涉及到的相关酶、基因和代谢调控机制的研究现状和应用系统生物学研究芪类生物合成途径的相关酶、基因的方法进行综述,并讨论了芪类生物合成相关酶、基因研究的重要意义和应用,以期为调节芪类产量、满足药用保健需求及植物防御、作物品质改良提供帮助。

关键词：芪类次生代谢物合成相关酶代谢调控系统生物学生物合成途径

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乳酸菌发酵转化人参皂苷

现代食品科技 2018年第9期34卷 136-142,157页

作者：夏晚霞张尚微葛亚中任杰余庆涛杨继国宁正祥华南协同创新研究院广东东莞523808 华南理工大学食品科学与工程学院广东广州510640 无限极(中国)有限公司广东广州510640

筛选适合发酵转化人参皂苷的乳酸菌,并对发酵工艺进行优化,探讨人参提取物发酵过程中人参皂苷的生物转化路径。结果显示:植物乳杆菌转化人参皂苷的效果最好,得到的稀有皂苷含量相对较高;发酵工艺为:发酵温度35℃、发酵时间16 d、初始p H... 详细信息

筛选适合发酵转化人参皂苷的乳酸菌,并对发酵工艺进行优化,探讨人参提取物发酵过程中人参皂苷的生物转化路径。结果显示:植物乳杆菌转化人参皂苷的效果最好,得到的稀有皂苷含量相对较高;发酵工艺为:发酵温度35℃、发酵时间16 d、初始p H 6.0、底物浓度10%、接种量10%;得到的发酵液中稀有皂苷的含量可达到106.52μg/m L(F2)、74.62μg/m L(Rg3)和100.56μg/m L(CK),较发酵前分别提高188.13%、203.21%和395.86%。人参皂苷的可能转化路径与发酵过程中6种常见皂苷含量的变化是一致的。研究结果表明:植物乳杆菌发酵人参提取物过程中常见皂苷向稀有皂苷转化,通过发酵工艺优化使得稀有皂苷含量显著提高,得到的发酵产物用于人参产品的开发具有一定的优势,为人参品的深加工奠定基础。

关键词：人参皂苷乳酸菌发酵生物转化工艺优化

何首乌不同部位二苯乙烯苷含量以及芪合酶FM-STS时空表达差异

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现代生物医学进展 2012年第30期12卷 5819-5822,5804页

作者：朱宽鹏生书晶赵炜陆娣夏晚霞赵树进广州军区广州总医院广东广州510010 华南理工大学生物科学与工程学院广东广州510640 南方医科大学广东广州510515

目的:探究何首乌不同部位主要有效成分二苯乙烯苷含量差异以及相对应部位何首乌芪合酶基因FM-STS表达差异。方法:通过液氮碾磨提取广东德庆同一株何首乌根茎叶中的RNA以及用50%稀乙醇过夜浸提芪合物二苯乙烯苷;使用乙腈和水为流动相(体... 详细信息

目的:探究何首乌不同部位主要有效成分二苯乙烯苷含量差异以及相对应部位何首乌芪合酶基因FM-STS表达差异。方法:通过液氮碾磨提取广东德庆同一株何首乌根茎叶中的RNA以及用50%稀乙醇过夜浸提芪合物二苯乙烯苷;使用乙腈和水为流动相(体积比为20∶80),利用高效液相色谱分析其二苯乙烯苷含量差异;采用实时荧光定量PCR分析芪合酶基因Fm-STS表达差异,以β-actin作为内参对照,2-△△CT公式计算各组别中FM-STS的含量。结果:根茎叶中芪合物二苯乙烯苷含量依次为14.62mg/g、1.78mg/g和0.47mg/g(干重),在mRNA水平上检测基因Fm-STS表达量为叶片中最高,根是叶的1/10倍,茎是叶的1/64倍。结论:芪合酶基因FM-STS主要在何首乌叶片中表达,二苯乙烯苷主要在叶片中合成,进而转移到根块中富集。

关键词：何首乌二苯乙烯苷芪合酶基因荧光定量PCR

芪合酶基因Fm-STS在何首乌毛状根中的过量表达分析

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现代生物医学进展 2013年第5期13卷 832-836,979页

作者：朱宽鹏生书晶赵炜陆娣夏晚霞赵树进广州军区广州总医院广东广州510010

目的:通过过量表达探究在何首乌中得到的芪合酶基因Fm-STS的功能。方法:由含CaMV 35S启动子驱动以及荧光标记蛋白(Green fluorescent protein,GFP)基因的植物转基因基础表达质粒pBIN-35S-GFP构建过量表达质粒pBIN-35S-STS-GFP(阳性),并... 详细信息

目的:通过过量表达探究在何首乌中得到的芪合酶基因Fm-STS的功能。方法:由含CaMV 35S启动子驱动以及荧光标记蛋白(Green fluorescent protein,GFP)基因的植物转基因基础表达质粒pBIN-35S-GFP构建过量表达质粒pBIN-35S-STS-GFP(阳性),并同空白表达质粒pBIN-35S-GFP(空白)均导入野生型发根农杆菌ATCC15834中,转化何首乌外植体(无菌苗叶片),诱导生成毛状根并培养,对毛状根进行高效液相色谱分析芪合物二苯乙烯苷含量变化以及实时荧光定量检测基因Fm-STS表达差异。结果:在过表达组和空白组中毛状根中发根农杆菌Ri质粒中的rolB基因和外源基因GFP均有表达,芪合物二苯乙烯苷含量依次为4.67 mg/g和2.18 mg/g(干重),在mRNA水平上检测基因Fm-STS表达量:过表达组是空白组的2.41倍。结论:基因FM-STS是何首乌中芪合物二苯乙烯苷生物合成过程中的酶基因,过量表达在基因功能研究中有良好的应用。

关键词：过量表达何首乌毛状根荧光定量PCR 高效液相色谱法

经皮穴位电刺激联合局部浸润麻醉对腹腔镜胆囊切除术患者术后疼痛及早期恢复质量的影响

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经皮穴位电刺激联合局部浸润麻醉对腹腔镜胆囊切除术患者术后疼痛...

作者：王晚霞扬州大学

学位级别：硕士