检索结果-南通市图书馆

作者：和春昊河南农业大学

学位级别：硕士

肠球菌是条件性致病菌,由于耐药基因以及致病性在各种生物之间质粒转移,导致各种生物例如人、猪等哺乳动物感染肠球菌的机率增加,肠球菌的治疗和预防愈加困难。在肠球菌的感染中定植是关键的步骤,胶原蛋白黏附素ace能够促进肠球菌的黏... 详细信息

肠球菌是条件性致病菌,由于耐药基因以及致病性在各种生物之间质粒转移,导致各种生物例如人、猪等哺乳动物感染肠球菌的机率增加,肠球菌的治疗和预防愈加困难。在肠球菌的感染中定植是关键的步骤,胶原蛋白黏附素ace能够促进肠球菌的黏附定植,损伤机体。因此,研究胶原蛋白黏附素的抗原表位疫苗成为预防和治疗肠球菌的关键。但是由于表位疫苗的免疫原性一般比较低,需要疫苗佐剂的添加来增强免疫原性,提高抗体水平。铁蛋白不仅能作为疫苗佐剂还能作为抗原递呈系统发挥作用。铁蛋白在不同的p H值下,亚基能够自动的组装和解体,可以利用蛋白亚基的表面连接抗原,提高抗原的特异性抗体水平。试验一为了制备铁蛋白纳米笼,首先解剖本课题组饲养的健康猪,对新鲜心脏通过TRIzol法提取总RNA,通过反转录试剂盒将RNA逆转录成c DNA,运用Primer 5.0对猪源铁蛋白亚基基因序列设计一对特异性引物,扩增出H亚基（546bp）,将H亚基与PMD18-T载体连接、转化,提质粒,测序正确后,与原核表达载体p ET-32a连接,大量表达蛋白,成功诱导出与预期的目的蛋白分子量相符的蛋白。铁蛋白亚基为可溶性蛋白,利用镍柱纯化蛋白,SDS-PAGE和Western Blot证明铁蛋白亚基具有良好的免疫原性,超滤浓缩蛋白,制备样品,透射电子显微镜成像观察铁蛋白的表征。结果表明铁蛋白亚基在生理条件下能够自组装成为纳米笼,并且具有中空结构,与天然的铁蛋白类似。我们可以得出这样的结论:缺铁核铁蛋白能够通过原核表达制备,操作简单,产量高。为铁蛋白作为疫苗佐剂和载体的打下基础。试验二为了制备携带抗原表位的铁蛋白纳米笼,首先利用生物信息学技术对胶原蛋白黏附素的氨基酸序列进行抗原表位预测,将预测的六条抗原表位基因序列合成在原核表达载体p ET-32a,命名为p ET-32a-ace1、p ET-32a-ace2、p ET-32a-ace3、p ET-32a-ace4、p ET-32a-ace5、p ET-32a-ace6,以及实验室保存的重组质粒p ET-32a-ace,设计一对新的特异性引物,扩增铁蛋白H亚基,将目的基因插入原核表达载体,转化、提质粒、测序成功后,表达融合蛋白,制备样品,透射电子显微镜下观察融合蛋白的表征,结果是p ET-32a-ace1-H、p ET-32a-ace3-H、p ET-32a-ace5-H、p ET-32a-ace6-H、p ET-32a-ace-H这五个融合蛋白为可溶性蛋白,p ET-32a-ace2-H、p ET-32a-ace4-H均为包涵体,由于蛋白本身的特性问题,只做可溶性蛋白,对五种蛋白SDS-PAGE和Western Blot,结果表明蛋白均有较强的免疫原性,电镜结果:p ET-32a-ace1-H、p ET-32a-ace3-H、p ET-32a-ace5-H、p ET-32a-ace6-H的表征是铁蛋白纳米笼,具有中空结构,直径与天然铁蛋白类似;p ET-32a-ace-H同样能形成蛋白纳米笼,但是没有中空结构,纳米笼的直径比天然铁蛋白大很多。我们可以知道铁蛋白与抗原表位连接之后,仍然能够自组装成为铁蛋白,但是由于抗原序列的长度不同,导致纳米笼的结构不同。p ET-32a-ace-H由于抗原序列大于H亚基序列,导致某些抗原蛋白被包裹在中空结构中,透射电镜观察不到中空结构。五个携带抗原表位的铁蛋白纳米笼的制备为下一步的动物实验提供了疫苗。试验三通过间接ELISA方法测定家兔的特异性抗体水平。首先大量制备实验二的各抗原表位疫苗,免疫家兔,同时设立对照组家兔,用普通的胶原蛋白黏附素免疫,耳缘静脉每周采血,ELISA测抗体效价,达到后心脏采血,分离血清,根据ELISA结果,可以知道六个蛋白的免疫原性趋势为:p ET-32a-ace5-H＞p ET-32a-ace-H＞p ET-32a-ace＞p ET-32a-ace6-H＞p ET-32a-ace3-H＞p ET-32a-ace1-H。p ET-32a-ace5-H、p ET-32a-ace-H的抗体水平均显著高于p ET-32a-ace对照组;p ET-32a-ace6-H的抗体水平与对照组的抗体水平相当;p ET-32a-ace3-H、p ET-32a-ace1-H的抗体水平均低于p ET-32a-ace对照组,因此得出结论,铁蛋白能够明显增强抗原的免疫原性,提高抗体的免疫水平,最佳的抗原表位疫苗的是p ET-32a-ace5-H。综上所述,带抗原表位的铁蛋白纳米笼能引起高水平以及快速的免疫应答,铁蛋白作为载体以及佐剂,能够明显的增强表位蛋白的免疫原性,为研制粪肠球菌表位疫苗提供了理论基础和试验依据。

关键词：粪肠球菌铁蛋白胶原蛋白黏附素免疫原性 ELISA

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粪肠球菌Ace抗原表位预测及重组表位疫苗载体构建与表达

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河南农业大学学报 2019年第3期53卷 379-384页

作者：郭珍珍和春昊李滨洲楚红燕张晨昕杨国宇陈丽颖河南农业大学牧医工程学院河南郑州450002 北京化工大学国际教育学院北京102200 河南省动物性食品安全重点实验室河南郑州450002

利用生物信息学软件预测抗原表位,然后将筛选出的6个抗原表位基因片段分别与铁蛋白H亚基基因片段连接,并克隆到pET-32a表达载体中,构建能融合表达Ace抗原表位和铁蛋白H亚基的重组质粒pET-32a-ace1、pET-32a-ace2、pET-32a-ace3、pET-32a... 详细信息

利用生物信息学软件预测抗原表位,然后将筛选出的6个抗原表位基因片段分别与铁蛋白H亚基基因片段连接,并克隆到pET-32a表达载体中,构建能融合表达Ace抗原表位和铁蛋白H亚基的重组质粒pET-32a-ace1、pET-32a-ace2、pET-32a-ace3、pET-32a-ace4、pET-32a-ace5、pET-32a-ace6,并经测序验证;优化诱导条件获得原核表达的重组蛋白后,用SDS-PAGE和WesternBlot验证其相对分子质量大小和免疫原性;将重组蛋白进行纯化超滤,然后进行透射电镜成像检查。结果显示,本研究成功构建了7种原核表达载体;在IPTG诱导下获得了5种可溶性表达的融合蛋白,且均有较强的免疫原性;重组融合蛋白Ace1-H、Ace3-H、Ace5-H和Ace6-H在透射电镜下观察到了具有与天然铁蛋白类似的特殊中空结构,且其直径与天然铁蛋白纳米笼类似;而带多表位的重组蛋白Ace-H虽然也能自组装成纳米级颗粒,但没有中空核心,其直径也比天然铁蛋白略大。

关键词：粪肠球菌胶原蛋白黏附素铁蛋白纳米笼表位

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共培养对猪源粪肠球菌N41株部分生物学特性的影响

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中国预防兽医学报 2018年第1期40卷 74-77页

作者：和春昊武二丽李滨洲赵娣金钺王亚宾陈丽颖河南农业大学牧医工程学院河南郑州450002 河南省动物性食品安全重点实验室河南郑州450002

为探讨粪肠球菌在体外共培养条件下其生物膜形成、黏附能力和抗吞噬作用等生物学特性的变化,本研究以猪源粪肠球菌N41菌株为受试菌株,将其分别与大肠杆菌O157∶H7、沙门氏菌肠炎亚种ATCC 14028以及金黄色葡萄球菌ATCC 25923等参考菌株... 详细信息

为探讨粪肠球菌在体外共培养条件下其生物膜形成、黏附能力和抗吞噬作用等生物学特性的变化,本研究以猪源粪肠球菌N41菌株为受试菌株,将其分别与大肠杆菌O157∶H7、沙门氏菌肠炎亚种ATCC 14028以及金黄色葡萄球菌ATCC 25923等参考菌株共培养,通过结晶紫染色法测定其生物被膜生成量,通过菌落计数对猪肠上皮细胞黏附情况和小鼠腹腔巨噬细胞的抗吞噬能力进行定量。结果显示,大肠杆菌O157∶H7对粪肠球菌N41菌株生物膜生成量、黏附作用和抗吞噬作用的变化均不明显(p>0.05);沙门氏菌ATCC 14028对粪肠球菌N41菌株的黏附作用明显增强(0.010.05);而金黄色葡萄球菌ATCC 25923则对粪肠球菌N41菌株的生物膜量增加和黏附作用明显增强(p<0.01),抗吞噬作用也所有增强(0.01

关键词：粪肠球菌共培养生物膜黏附抗吞噬作用

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携肠球菌Ace抗原的铁蛋白纳米粒制备与免疫效果检测

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河南农业大学学报 2020年第4期54卷 638-642页

作者：和春昊金钺张晨昕郭珍珍李滨洲吴秋玲王亚宾陈丽颖河南农业大学牧医工程学院河南郑州450002 北京化工大学国际教育学院北京1022002 河南省动物性食品安全重点实验室河南郑州450002

为制备携肠球菌胶原蛋白黏附素Ace抗原表位的铁蛋白纳米颗粒,并评价其免疫效果,利用生物信息学软件预测Ace抗原表位,合成相应的基因片段,分别构建含有相应抗原表位基因与铁蛋白H亚基基因的融合表达载体,同时构建融合表达Ace蛋白和H亚基... 详细信息

为制备携肠球菌胶原蛋白黏附素Ace抗原表位的铁蛋白纳米颗粒,并评价其免疫效果,利用生物信息学软件预测Ace抗原表位,合成相应的基因片段,分别构建含有相应抗原表位基因与铁蛋白H亚基基因的融合表达载体,同时构建融合表达Ace蛋白和H亚基的质粒pET-32a-ace-H,分别转入大肠杆菌中进行融合表达。利用Western blot鉴定各重组融合蛋白的反应原性,并利用透射电镜观察目的蛋白表征。用重组铁蛋白纳米颗粒分别制备免疫原进行家兔接种试验,并定期检测家兔血清特异性抗体水平。结果显示,正确构建了6个Ace蛋白抗原表位基因与H亚基基因的融合表达载体pET-32a-ace1-H^pET-32a-ace6-H,其中pET-32a-ace1-H、pET-32a-ace3-H、pET-32a-ace5-H和pET-32a-ace6-H为可溶性表达载体。Western blot检测显示可溶性表达的4种融合蛋白均具有较好的反应原性。透射电镜图像显示,4种融合蛋白均形成了具有中空结构的铁蛋白纳米笼,其直径与天然铁蛋白类似;而融合蛋白Ace-H纳米笼没有中空结构,且直径比天然铁蛋白大。家兔免疫试验结果显示,6种融合蛋白均在家兔体内诱导产生了特异性抗体,而且,携带单个Ace表位的铁蛋白纳米颗粒Ace1-H、Ace3-H、Ace5-H与携带多表位的Ace重组蛋白以及Ace-H纳米颗粒相比,其诱导的抗体效价和消长规律均一致,其中以铁蛋白纳米粒Ace5-H的免疫效果为最佳。本研究结果表明铁蛋白纳米颗粒能有效增强蛋白质抗原的免疫原性,有望作为候选表位疫苗佐剂得到应用。

关键词：粪肠球菌胶原蛋白黏附素铁蛋白纳米颗粒表位疫苗

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共培养沙门菌对粪肠球菌N41株生长特性及毒力基因的影响

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中国兽医学报 2017年第8期37卷 1528-1533页

作者：武二丽和春昊金钺刘玲玲胡慧曹晗王亚宾陈丽颖河南农业大学牧医工程学院河南郑州450002 河南省动物性食品安全重点实验室河南郑州450002

为探讨共培养条件下沙门菌对粪肠球菌N41分离株生长特性及其不同生长时期26种毒力基因转录的影响,将N41菌株、沙门菌菌株单独/混合培养后,分别进行菌落计数并绘制生长曲线,观察其生长状况及影响,同时提取其对数中期、对数后期、稳定前... 详细信息

为探讨共培养条件下沙门菌对粪肠球菌N41分离株生长特性及其不同生长时期26种毒力基因转录的影响,将N41菌株、沙门菌菌株单独/混合培养后,分别进行菌落计数并绘制生长曲线,观察其生长状况及影响,同时提取其对数中期、对数后期、稳定前期和稳定期的总RNA,SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR方法分析N41菌株26种毒力基因的转录情况。结果显示,共培养后沙门菌和N41生长均受到影响,其中,在N41菌体浓度降低约3.9倍,而沙门菌菌体浓度降低约110倍。在N41菌株26种毒力基因中,沙门菌促进了ebpA、ebpC、rnjB、ace、ebpR、psr等12种毒力基因在4个不同生长时期的转录,但同时也降低了毒力基因SlyA和sprE在4个生长期中转录水平;另外,除了CylL-S、CylL-L、efaA和AS在4个生长时期变化不明显外,其余的大部分毒力基因都在对数后期转录水平有明显上升,但在其他生长时期则表现不同。这说明,两菌共培养后,N41菌株明显抑制了沙门菌的生长,同时沙门菌也整体促进了N41菌株毒力基因的转录。本试验为研究细菌间相互作用机制以及肠球菌的致病机制奠定基础。

关键词：粪肠球菌N41 沙门菌生长特性毒力基因荧光定量PCR

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猪源铁蛋白重链亚基纳米粒的制备

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河南农业大学学报 2018年第3期52卷 361-365页

作者：李滨洲和春昊吴秋玲郭珍珍张留君杨国宇王亚宾陈丽颖河南农业大学牧医工程学院河南郑州450002 河南省动物性食品安全重点实验室河南郑州450002

根据Gen Bank公布的铁蛋白重链基因序列,设计出1对特异性引物;提取猪心脏总RNA,采用RT-PCR方法扩增出铁蛋白重链亚基基因片段,经测序正确后,再将双酶切的纯化产物与PET32a原核表达载体相连接,构建重组质粒、把测序正确的重组质粒转化入... 详细信息

根据Gen Bank公布的铁蛋白重链基因序列,设计出1对特异性引物;提取猪心脏总RNA,采用RT-PCR方法扩增出铁蛋白重链亚基基因片段,经测序正确后,再将双酶切的纯化产物与PET32a原核表达载体相连接,构建重组质粒、把测序正确的重组质粒转化入大肠杆菌BL21(DE3),用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)进行诱导表达。将表达的重组蛋白用Ni^+离子亲和层析柱纯化后,用SDS-PAGE和Western blot鉴定纯化的表达产物。将鉴定正确的铁蛋白产物置于透射电镜下观察其表征,以进一步鉴定铁蛋白纳米颗粒是否自组装成功。结果表明,本研究成功表达并纯化出了猪源铁蛋白重链亚基,而透射电镜下观察到了大量直径为10~13 nm的颗粒,说明重组猪源铁蛋白重链纳米粒自组装成功。

关键词：猪铁蛋白纳米粒免疫佐剂

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基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱技术分离鉴定生鲜猪肉中沙门氏菌/大肠杆菌类似菌

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食品安全质量检测学报 2018年第4期9卷 717-722页

作者：李滨洲陈飞郭珍珍和春昊吴秋玲金钺王亚宾陈丽颖河南农业大学牧医工程学院郑州450002 河南省动物性食品安全重点实验室郑州450002

目的利用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(matrix-assisted laser desorption ionization time-of-flight mass spectrometry,MALDI-TOF-MS)技术鉴别生鲜猪肉中大肠杆菌和沙门氏菌的常规检验中出现的类似菌。方法在郑州市不同地区分... 详细信息

目的利用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(matrix-assisted laser desorption ionization time-of-flight mass spectrometry,MALDI-TOF-MS)技术鉴别生鲜猪肉中大肠杆菌和沙门氏菌的常规检验中出现的类似菌。方法在郑州市不同地区分批次采集164份生鲜猪肉样品,按照国标方法进行增菌培养,选择性培养基HE和EMB对细菌进行分离纯化。通过MALDI-TOF-MS技术对疑似菌落进行鉴定;提取被检菌株基因组DNA,根据MALDI-TOF-MS鉴定出的细菌种类,参考Gen Bank中相关菌株的已知基因序列分别设计引物,进行PCR扩增、测序和序列比对,以验证MALDI-TOF-MS鉴定结果。结果经MALDI-TOF-MS方法鉴定,从68个疑似菌株中分别检出柠檬酸杆菌(Citrobacter)6株、奇异变形杆菌(Proteobacteria)5株、肺炎克雷伯氏菌(Klebsiella pneumoniae)9株、绿脓杆菌(Pseudomonas aeruginosa)1株、阴沟肠杆菌(Enterobacter cloacae)3株、不动杆菌(Acinetobacter)1株。PCR结果与MALDI-TOF-MS鉴定结果完全一致。结论 MALDI-TOF-MS可用于生鲜猪肉检验过程中大肠杆菌和沙门氏菌的分离鉴定。本次共检出6种在HE和EMB培养基上与沙门氏菌/大肠杆菌菌落特征类似的肠杆菌科其他细菌,说明在生鲜猪肉中存在着一定程度的条件致病性肠道细菌污染,因此具有一定的食品安全风险。

关键词：生鲜肉基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱法条件致病菌肠道病原菌

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Bi4Ti3O12薄膜的制备与性能研究

Bi4Ti3O12薄膜的制备与性能研究

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作者：周和春广东工业大学

学位级别：硕士

随着集成电路技术的快速发展,人们对半导体器件材料的性能研究越来越深入。铋层状结构的BiTiO(BIT)以其优异的铁电性能,较高的居里温度、良好的光电性能、较强的抗疲劳性以及各向异性引起越来越多的研究者的关注。BiTiO本身的独特晶体... 详细信息

随着集成电路技术的快速发展,人们对半导体器件材料的性能研究越来越深入。铋层状结构的BiTiO(BIT)以其优异的铁电性能,较高的居里温度、良好的光电性能、较强的抗疲劳性以及各向异性引起越来越多的研究者的关注。BiTiO本身的独特晶体结构使其具有优良的可裁剪性和可设计性。而且与传统的钙钛矿铁电材料如钛酸钡和锆钛酸铅等相比,BiTiO具有相对较低的禁带宽度,约为3.0 eV左右,这种特性能够使其对太阳光的吸收可拓展到可见光区域。这些独特的特性使BiTiO在信息存储技术、光电器件和传感器件中具有广泛的应用前景。基于以上研究背景,本文主要以溶胶凝胶法制备BiTiO薄膜器件,深入研究其阻变特性、光伏效应和光电二极管特性。本文的主要研究内容如下:首先,我们采用溶胶凝胶法将BiTiO铁电薄膜制备成Au/BIT/LNO/Si结构,研究其忆阻性能。结果证实了该器件具有可重复和稳定的双极电阻开关(RS)特性。在空气中退火的器件在电压为0.1和-0.1 V时的开关比约为10。在100个连续测试周期后,RS性能没有显著下降。我们还探讨了影响器件RS行为的因素。通过对退火后器件的RS特性的研究结合XPS分析,我们发现RS的性质与氧空位的存在密切相关。在空气中退火的器件比在氧气中退火的器件的RS效应有明显的提高。根据斜率拟合,器件的传导机制为欧姆传导和空间电荷限制电流(SCLC)。本研究成功地将BiTiO铁电薄膜应用于记忆电阻器RS层。此外,本文还提出了导电丝理论来充分解释RS行为与氧空位之间的关系,为设计高质量的随机存取电阻存储器提供了有意义的灵感。其次,我们采用溶胶凝胶法在ITO透明导电衬底上成功制备了BIT/TiO复合薄膜。研究了复合薄膜的微观结构、物理特性、光电响应以及极化对其光电响应的影响。电流-电压和电流-时间特性表明复合薄膜比纯BiTiO和TiO薄膜具有更好的光电性能。并利用异质结的能带变化来解释复合膜增强光伏性能的传导机理。此外,还探讨了外加偏压和极化操作对复合薄膜光电特性的影响。结果表明,施加正偏置电压可提高光电响应,而施加负偏置电压可降低光电响应。同时,负极化操作明显提高了光电性能,而正极化操作不仅降低了光生电流,而且能使光生电流的方向发生改变。这种可调制的光伏效应是由于铁电退极化场与异质结界面内建电场之间的耦合效应。本研究为复合薄膜提高和控制铁电光伏性能提供了思路,可应用于新型太阳能转换技术。最后,我们采用溶胶凝胶法制备了一种基于Au/BIT/P-Si结构的新型光电二极管。该光电二极管具有优异的紫外光(UV)控制光电二极管特性。器件在紫外光照射下具有较大的导通光电流,在8 V的偏置电压和30.5 mW/cm的紫外光强度下,光电流最高可达0.6 mA。在给定的正电压下,光电二极管的光电流随着紫外光强度的增加而显著增加。另外在实验的基础上,我们研究了紫外光辐照和偏压作用下光电二极管的能带变化和载流子运动的传导机制。

关键词： Bi4Ti3O12 溶胶凝胶法阻变铁电光伏二极管

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发挥再保险价值全面护航中国式现代化

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中国金融 2023年第4期 9-11页

作者：和春雷中国再保险(集团)股份有限公司党委

中国共产党第二十次全国代表大会是在全党全国各族人民迈上全面建设社会主义现代化国家新征程、向第二个百年奋斗目标进军的关键时刻召开的一次十分重要的大会。学习宣传贯彻党的二十大精神,是当前和今后一个时期的首要政治任务。本刊... 详细信息

中国共产党第二十次全国代表大会是在全党全国各族人民迈上全面建设社会主义现代化国家新征程、向第二个百年奋斗目标进军的关键时刻召开的一次十分重要的大会。学习宣传贯彻党的二十大精神,是当前和今后一个时期的首要政治任务。本刊特开设“深入学习贯彻党的二十大精神”专栏,对金融系统深入学习贯彻党的二十大精神,坚持党对金融工作的坚强领导,坚持金融工作的政治性、人民性,坚持走中国特色金融发展之路的实践进行系列报道。

关键词：保险价值全国代表大会中国式现代化特色金融关键时刻新征程系列报道发展之路

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浅谈在小学语文课堂教学中如何激发学生的学习兴趣

浅谈在小学语文课堂教学中如何激发学生的学习兴趣

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中小幼教师新时期第三届“教育教学与创新研究”论坛

作者：和春莲西藏日喀则市康马县嘎拉乡中心小学

学生在自我技能与知识学习中,其从自身发展视域出发,对于即将学到的知识与技能具备了浓厚的学习和探究兴趣,那么他们就会主动集中精力和时间来进行对应知识探究,进而保证学习效果。基于此,教师不妨积极使用角色扮演、合作学习以及微课... 详细信息

学生在自我技能与知识学习中,其从自身发展视域出发,对于即将学到的知识与技能具备了浓厚的学习和探究兴趣,那么他们就会主动集中精力和时间来进行对应知识探究,进而保证学习效果。基于此,教师不妨积极使用角色扮演、合作学习以及微课、云平台教育等模式来保证学生的培养效果,满足其自我发展需求,提升其综合素养。

关键词：小学语文激发兴趣方式方法

来源： cnki会议评论

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