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原癌蛋白KRas的表达和纯化及其与小分子抑制剂ZCL1688的分子对接分析

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分析化学 2022年第2期50卷 263-270页

作者：牟榕梓孙暄吴更上海交通大学生命科学技术学院

经过特殊设计的小分子抑制剂可共价结合KRas蛋白的催化结构域,从而抑制KRas与下游效应蛋白的结合。本研究采用镍柱亲和层析、酶切标签、凝胶过滤层析等步骤制备了高纯度的KRas催化结构域(氨基酸残基1-169)蛋白;等温滴定量热(ITC)实验证... 详细信息

经过特殊设计的小分子抑制剂可共价结合KRas蛋白的催化结构域,从而抑制KRas与下游效应蛋白的结合。本研究采用镍柱亲和层析、酶切标签、凝胶过滤层析等步骤制备了高纯度的KRas催化结构域(氨基酸残基1-169)蛋白;等温滴定量热(ITC)实验证明了KRas蛋白通过K42残基与小分子抑制剂ZCL1688进行结合;通过分子对接得到KRas蛋白与ZCL1688的复合物的建模结构,发现两者的结合对KRas与下游蛋白丝氨酸/苏氨酸激酶RAF的结合有明显竞争作用。本研究建立了一种简便的KRas蛋白催化结构域(氨基酸残基1-169)高效表达与高纯度制备方法,模拟了此蛋白与ZCL1688的结合模式,并分析了该结合模式下的相互作用,为后续筛选此蛋白与小分子抑制剂的共结晶以及复合物结构解析奠定了良好基础。

关键词： KRas 丝氨酸/苏氨酸激酶RAF 小分子抑制剂蛋白的纯化分子对接弱相互作用

DNA末端硫修饰依赖的体外大片段DNA连接法

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微生物学通报 2023年第3期50卷 1220-1230页

作者：胡媚月吴更上海交通大学生命科学技术学院微生物代谢国家重点实验室上海200030

【背景】DNA组装技术是基因组合成中的一个关键技术。探索低成本、高效率的基因组合成技术一直是合成生物学的重要研究领域。在某些细菌如变铅青链霉菌中,DNA上有磷硫酰化修饰(简称硫修饰),而在另一些细菌如天蓝色链霉菌中存在一种含有... 详细信息

【背景】DNA组装技术是基因组合成中的一个关键技术。探索低成本、高效率的基因组合成技术一直是合成生物学的重要研究领域。在某些细菌如变铅青链霉菌中,DNA上有磷硫酰化修饰(简称硫修饰),而在另一些细菌如天蓝色链霉菌中存在一种含有硫修饰识别结构域(sulfur-binding domain,SBD)的识别蛋白,可以特异性识别DNA上的硫修饰,这启发了我们发展出一种新的DNA组装技术。【目的】探究在DNA末端硫修饰的连接中,T4 DNA连接酶与SBD相融合蛋白和单独的T4 DNA连接酶相比,是否有更高的连接效率。【方法】根据同源重组原理,设计硫修饰引物,扩增硫修饰的DNA片段。构建T4 DNA连接酶与SBD融合蛋白的3种表达载体T4-linker-SBD(Hga)、T4-linker-SBD(Spr)和T4-linker-SBD(Mmo),表达纯化以上3种融合蛋白。比较3组浓度梯度(2.4、0.24、0.024 mg/mL)T4 DNA连接酶与融合蛋白在2.5 kb和8.0 kb DNA片段连接上的差异。【结果】DNA末端硫修饰的2.5kb和8.0kb的两端片段均能扩增,而且3种融合蛋白均能表达。在两段2.5 kb片段的体外连接实验中,每组T4 DNA连接酶与融合蛋白均能连接成5 kb片段;然而在两段8.0 kb片段的体外连接实验中,相同连接时间和相同酶浓度下,仅融合蛋白T4-linker-SBD(Hga)能够将8.0 kb片段连接成16 kb的长片段。【结论】根据两组琼脂糖凝胶电泳的实验结果可知,在两段8.0 kb的DNA长片段连接实验中,T4-linker-SBD(Hga)融合蛋白具有更高的连接效率。本研究方法以较低的成本和比较高的效率为大片段DNA组装提供了一种新的方法和思路。

关键词：硫原子识别结构域 DNA连接组装 DNA硫修饰基因组合成

稳定表达TSC1/TSC2蛋白质复合物的293T细胞系的建立

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中国细胞生物学学报 2012年第12期34卷 1215-1219页

作者：闫丽君吴更上海交通大学生命科学技术学院微生物代谢国家重点实验室上海200240

我们使用Clonetech的同源重组酶连接人TSC1、TSC2全长蛋白编码cDNA ORF到pBudCE4.1真核细胞双元表达载体上,用脂质体Lipofectamine 2000介导重组质粒pBudCE4.1/TSC2/TSC1导入293T细胞,用含125μg/mL Zeocin的培养基筛选稳定表达TSC1/TSC2蛋白的细胞株,并用Western blot方法鉴定稳转细胞株的稳定性。该实验成功建立了稳定表达TSC1/TSC2蛋白的293T细胞系,从而为今后研究TSC1/TSC2蛋白的结构与功能提供实验基础。

关键词： TSC1 TSC2 稳转细胞系真核细胞双元表达载体 Zeocin

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双级受拉抗拔桩变形及上拔特性研究

双级受拉抗拔桩变形及上拔特性研究

作者：吴更东北京交通大学

学位级别：硕士

传统的抗拔桩中上拔荷载是作用在桩身顶部的,随着上拔荷载的增加,桩侧摩阻力由浅及深地逐渐发挥作用。同时,在上拔作用下,桩身处于拉伸状态,由于泊松效应,桩径会产生收缩,对桩侧摩阻力的发挥产生负面影响;除此之外桩身拉应力过大还容易... 详细信息

传统的抗拔桩中上拔荷载是作用在桩身顶部的,随着上拔荷载的增加,桩侧摩阻力由浅及深地逐渐发挥作用。同时,在上拔作用下,桩身处于拉伸状态,由于泊松效应,桩径会产生收缩,对桩侧摩阻力的发挥产生负面影响;除此之外桩身拉应力过大还容易导致混凝土开裂,致使钢筋暴露、腐蚀,进而影响到抗拔的承载力与使用寿命。本文提出了一种新型的抗拔桩受力结构——双级受拉抗拔桩。其在普通的钢筋混凝土桩中心位置增加一根上部与钢筋、混凝土脱开的主筋,将部分上拔力直接传递至桩身中部,这样在上拔荷载下桩侧摩阻力会从两个位置同时开始发挥作用,并且桩身的拉应力也将大大减小。本文主要进行了以下研究:(1)结合原位上拔试验数据,对传统桩顶单一位置受力条件下的抗拔桩在上拔荷载作用下的位移、轴力及侧摩阻力特征进行了分析研究。(2)介绍了有限元分析的基本原理,利用FORTRAN语言对广义双曲线接触模型进行程序化,然后将其接入到ABAQUS,并应用于抗拔桩数值模拟计算中,最后对比分析了试验结果与数值模拟结果,验证了数值模型的正确性。(3)利用ABAQUS中建立的数值模型,变更受力条件,使荷载分别作用在桩身不同深度,研究了不同受力位置条件下抗拔桩的变形及上拔特征。(4)在上述研究的基础上,进一步改变模型受力条件,令上拔荷载按不同比例分别作用在桩顶与桩身中部或中下部,分析了桩顶-桩身中部(中下部)双级受拉作用下,不同荷载分配比例时,双级受拉抗拔桩的应力、变形、侧摩阻力、桩身轴力、桩顶位移的特征及变化规律,研究了双级受拉抗拔桩的变形及上拔特征。

关键词：抗拔桩双级受拉变形侧摩阻力数值模拟

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试论“拿放动脉”与“号脉”

中医杂志 2016年第7期57卷 628-630页

作者：吴更伟郝东方国际中医综合研究所香港大学中医药学院

论述三部九候之脉诊与拿放动脉治法的相互关系,探讨、提倡古代医家诊治合一的思维模式。基于临床实践,提出天人相应、有的放矢、圆通教诲等拿放动脉应用要素,并结合三部九候理论,具体提出拿放动脉的作用、部位、适应病证、操作方法等,... 详细信息

论述三部九候之脉诊与拿放动脉治法的相互关系,探讨、提倡古代医家诊治合一的思维模式。基于临床实践,提出天人相应、有的放矢、圆通教诲等拿放动脉应用要素,并结合三部九候理论,具体提出拿放动脉的作用、部位、适应病证、操作方法等,同时强调拿放动脉手法的局限性、临床应用禁忌及注意事项。

关键词：拿放动脉号脉脉诊三部九候

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微机维修图解指南

人源γ-分泌酶的重要亚基nicastrin蛋白表达与纯化

1995年

作者：杨宏君

来源：南通市图书馆图书评论

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基因组学与应用生物学 2015年第5期34卷 909-916页

作者：齐佩瑾吴更微生物代谢国家重点实验室上海交通大学生命科学技术学院上海200240

γ-分泌酶是具有天冬氨酸内切酶活性跨膜蛋白复合物,与阿尔茨海默症的病理特征的β-淀粉样蛋白(amyloid proteinβ,Aβ)生成有关。Nicastrin(NCT)是Ⅰ型单次跨膜糖蛋白,具有709个氨基酸。它是γ-分泌酶的重要组分,具有募集和结合γ-分... 详细信息

γ-分泌酶是具有天冬氨酸内切酶活性跨膜蛋白复合物,与阿尔茨海默症的病理特征的β-淀粉样蛋白(amyloid proteinβ,Aβ)生成有关。Nicastrin(NCT)是Ⅰ型单次跨膜糖蛋白,具有709个氨基酸。它是γ-分泌酶的重要组分,具有募集和结合γ-分泌酶底物的功能,参与γ-分泌酶的组装过程。本研究中,利用昆虫杆状病毒表达系统表达人源NCT全长和胞外结构域,得到了纯度较好的蛋白,用于晶体初筛。由于nicastrin自身高度糖基化,使用Endo H和PNGase F去糖基化酶进行体外脱糖基作用,使得蛋白均一度提高,纯化到较稳定的胞外结构域蛋白,为下一步对人源nicastrin蛋白进行结构生物学研究奠定了基础。

关键词： γ-分泌酶 Nicastrin 蛋白表达纯化去糖基化

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模拟技术在人造丝企业管理创新的研究和应用

模拟技术在人造丝企业管理创新的研究和应用

作者：吴更安浙江大学

学位级别：硕士

模拟技术随着计算机技术的发展其使用领域变得越来越广泛，但在我国大量的应用成功事例主要在航天和国防领域，企业中使用相对较少，而在规模不大的中小企业成功应用的例子，则少之又少。本研究针对企业的实际，对人造丝企业实施模拟技... 详细信息

模拟技术随着计算机技术的发展其使用领域变得越来越广泛，但在我国大量的应用成功事例主要在航天和国防领域，企业中使用相对较少，而在规模不大的中小企业成功应用的例子，则少之又少。本研究针对企业的实际，对人造丝企业实施模拟技术应用，使这个小企业的管理创新取得了一个突破，得到了显著的成果，体现企业管理创新存在很大的潜力，同时也说明，应用模拟技术可以使企业实现一个投入少收效大的美好愿望。本研究工作主要结论如下： 1、模拟技术可以在人造丝企业应用并能取得良好的效果，真正实现资源的优化配置。这一新颖的管理理念和管理技术在人造丝制造企业和相类似的化工行业得到推广应用，将会大大地提高我国这些企业竞争能力。 2、一个困难重重、利用常规方法解围无效的企业，模拟技术的成功应用能为企业的生存和发展带来生机。 3、模拟技术能为企业战略决策的优化提供服务。现在仍有不少企业的发展战略的制定还是凭经验、或者是依靠简单的计算，很难保证方案的最优化、取得良好结果。应用模拟技术建立企业发展战略模型，能够对企业的变化和发展情况进行模拟，对各种方案进行比较、实施定量分析，能模拟出发展战略实现后企业的各种结果，并从中选择最佳发展战略。

关键词：计算机模拟企业营运优化企业发展战略

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多模式实时工业图象检测系统

计算机工程与应用 1998年第9期34卷 55-57页

作者：吴更石梁德群西安交通大学图象处理与识别研究所

工业界对图象检测技术有十分迫切的需要。这里介绍一种适用于多种工业检测对象的多模式的实时工业图象检测／分析系统结构。系统采用双体交叉访问与处理流重叠相结合的并行结构，在多相时序控制下实现多模式的转移和配合。同时给出了两... 详细信息

工业界对图象检测技术有十分迫切的需要。这里介绍一种适用于多种工业检测对象的多模式的实时工业图象检测／分析系统结构。系统采用双体交叉访问与处理流重叠相结合的并行结构，在多相时序控制下实现多模式的转移和配合。同时给出了两个较典型的工业图象检测的实例，验证了系统的可行性和广泛的适用性。

关键词：石油管道图象检测系统工业检测图象识别