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lncRNA DRAIC通过调控自噬影响结直肠癌细胞增殖与凋亡

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现代肿瘤医学 2024年第10期32卷 1773-1780页

作者：吴巍芸陈晓玲何焕金谭文凯叶石才李爱婷周柱良广东医科大学附属医院消化系统疾病研究室广东湛江524001 广东医科大学附属医院消化内科广东湛江524001

目的:探讨lncRNA DRAIC对结直肠癌(colorectal cancer, CRC)细胞自噬、增殖、凋亡的影响及其作用机制。方法:使用GEPIA 2.0数据库分析DRAIC在CRC组织中的表达及预后价值。受试者工作特征(ROC)曲线评估DRAIC在CRC中的诊断价值。利用UALCA... 详细信息

目的:探讨lncRNA DRAIC对结直肠癌(colorectal cancer, CRC)细胞自噬、增殖、凋亡的影响及其作用机制。方法:使用GEPIA 2.0数据库分析DRAIC在CRC组织中的表达及预后价值。受试者工作特征(ROC)曲线评估DRAIC在CRC中的诊断价值。利用UALCAN在线数据库分析DRAIC的表达与CRC临床病理指标的关系。在CRC细胞系HCT-116和HT-29中转染DRAIC过表达质粒(OE-DRAIC)以过表达DRAIC,CCK-8法和克隆形成实验检测细胞增殖能力,流式细胞技术和TUNEL实验检测细胞凋亡情况,Western blot检测LC3B、Cleaved caspase-3、Cleaved PARP和AKT/mTOR通路蛋白的表达。转染OE-DRAIC并加入自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-MA)后,再采用同上方法分别检测CRC细胞的增殖、凋亡情况,以及LC3B、Cleaved caspase-3和Cleaved PARP蛋白的表达。结果:DRAIC在CRC组织中表达显著下调,ROC曲线下面积(AUC)为0.781。低表达DRAIC的CRC患者总生存率较差。DRAIC低表达与肿瘤分期、组织学分型、体重等临床病理指标相关。过表达DRAIC后,CRC细胞增殖能力减弱,凋亡率增加,Cleaved caspase-3、Cleaved PARP、LC3B-II/LC3B-I蛋白表达上调,p-AKT和p-mTOR蛋白相对表达量下调(P<0.05)。加入3-MA后,与OE-DRAIC组相比,OE-DRAIC+3-MA组HCT-116和HT-29细胞的增殖能力增强,凋亡率下降(P<0.05),HCT-116细胞的LC3B-II/LC3B-I蛋白相对表达量、Cleaved caspase-3和Cleaved PARP蛋白表达下调(P<0.05)。结论:DRAIC在CRC组织中低表达,并与CRC患者较差的预后相关,DRAIC通过增强CRC细胞自噬,从而抑制细胞增殖和促进细胞凋亡。

关键词：结直肠癌 lncRNA DRAIC 自噬增殖凋亡

SMAD1通过调控miR-32表达影响结直肠癌细胞增殖、凋亡和迁移

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肿瘤 2022年第2期42卷 77-92页

作者：陈永泽周宇杨慧李晓文丁元林吴巍芸广东医科大学附属医院消化系统疾病研究室广东湛江524001 广东医科大学附属医院消化内科广东湛江524001 广东医科大学公共卫生学院广东东莞523808

目的:研究SMAD家族成员1(SMAD family member 1,SMAD1)通过调控微RNA(microRNA,miRNA,miR)-32对结直肠癌(colorectal cancer,CRC)细胞增殖、凋亡和迁移等生物学行为的影响,并探讨可能的作用机制。方法:实时荧光定量PCR法检测SMAD1在CRC细胞HCT-8、HCT-116和HT-29以及正常结肠上皮细胞株NCM460中的表达水平。采用脂质体法分别将特异性针对SMAD1基因的si RNA(siSMAD1)和si RNA-阴性对照(negative control,NC)(siNC)转染至人CRC细胞HCT-116中,用实时荧光定量PCR和蛋白质印迹法检测沉默效果。分别采用CCK-8法、FCM法、划痕愈合实验和Transwell小室实验检测沉默SMAD1表达对细胞增殖、凋亡和迁移的影响;实时荧光定量PCR法和蛋白质印迹法检测沉默SMAD1表达对HCT-116细胞中miR-32及其宿主基因TMEM245及靶基因PTEN表达的影响;实时荧光定量PCR法检测上皮-间质转化相关因子波形蛋白(Vimentin)、E-钙黏蛋白(E-cadherin)和N-钙黏蛋白(N-cadherin)mRNA的表达水平。采用染色质免疫共沉淀法检测SMAD1是否能直接与TMEM245/miR-32的启动子区相结合。分别将miR-32-模拟物(miR-32-mimics)以及阴性对照-模拟物(NC-mimics)转入HCT-116细胞,采用实时荧光定量PCR法检测转染效率和SMAD1的表达水平。分别同时共转染siSMAD1+miR-32-mimics以及siSMAD1+NC-mimics至HCT-116细胞,采用CCK-8法、FCM法、划痕愈合实验和Transwell小室实验分别检测共转染后细胞增殖、凋亡和迁移能力的改变,实时荧光定量PCR法和蛋白质印迹法检测转染后对PTEN和上皮-间质转化相关因子表达的影响。结果:CRC细胞HCT-8、HCT-116和HT-29中SMAD1 mRNA的表达水平均高于正常结肠上皮细胞株NCM460细胞(P均<0.05)。siSMAD1转入HCT-116细胞后,HCT-116细胞中SMAD1 mRNA和蛋白的表达水平均明显下调(P均<0.05)。沉默SMAD1基因表达后,HCT-116细胞的增殖和迁移能力均被抑制,而凋亡率明显增加(P均<0.05),miR-32和TMEM245 mRNA的表达水平下调,PTENmRNA和蛋白表达水平上调(P均<0.05),Vimentin和N-cadherin mRNA的表达下调,E-cadherin mRNA表达上调(P均<0.05)。染色质免疫共沉淀结果显示,SMAD1能与TMEM245/miR-32核心启动子区相结合(P<0.05)。与siSMAD1+NC-mimics共转染组相比,siSMAD1+miR-32-mimics共转染组细胞增殖、迁移能力增强,凋亡率减少,PTEN蛋白表达水平下调,Vimentin和N-cadherin mRNA的表达上调,E-cadherin mRNA表达下调(P均<0.05)。结论:沉默SMAD1表达可通过下调miR-32表达来上调PTEN的表达水平,进而抑制CRC细胞的增殖和迁移能力,促进细胞凋亡。

关键词：结直肠肿瘤 SMAD1基因微RNA 细胞增殖细胞凋亡细胞迁移

长链非编码RNA调控细胞自噬参与消化系统肿瘤发生发展的研究进展

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医学理论与实践 2023年第15期36卷 2546-2548页

作者：陈晓玲吴巍芸广东医科大学附属医院消化内科广东省湛江市524001

长链非编码RNA(lncRNA)是一类长度超过200个核苷酸,不具备编码蛋白质能力的RNA。lncRNA可在染色质修饰、转录和转录后等不同水平调控基因表达,参与肿瘤的发生发展。自噬是发生在真核细胞内依赖溶酶体的分解代谢过程,通过降解和循环利用... 详细信息

长链非编码RNA(lncRNA)是一类长度超过200个核苷酸,不具备编码蛋白质能力的RNA。lncRNA可在染色质修饰、转录和转录后等不同水平调控基因表达,参与肿瘤的发生发展。自噬是发生在真核细胞内依赖溶酶体的分解代谢过程,通过降解和循环利用细胞中受损的细胞器或多余的蛋白质,从而维持细胞内环境的动态平衡。自噬异常与肿瘤的发生发展密切相关。lncRNA可通过调控细胞自噬的启动、自噬体囊泡成核、自噬体膜的伸长、自噬体与溶酶体融合等来影响自噬,参与多种消化道肿瘤的恶性进程。本文就lncRNA调控细胞自噬参与消化系统肿瘤发生发展的研究进展展开综述。

关键词：长链非编码RNA 自噬消化系统肿瘤

PBL联合Seminar教学法在呼吸专硕科研能力培养中的应用

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高教学刊 2023年第36期9卷 91-94页

作者：黎东明吴巍芸吴东广东医科大学第一临床学院内科诊断学教研室广东湛江524001

观察PBL联合Seminar教学法在呼吸内科专硕科研能力的应用效果。以30名接受传统讲授式教学的专硕为对照组,30名接受传统讲授教学和PBL联合Seminar教学法的专硕为试验组。教学结束后,比较两组出科考核成绩和调查问卷结果。前者包括理论考... 详细信息

观察PBL联合Seminar教学法在呼吸内科专硕科研能力的应用效果。以30名接受传统讲授式教学的专硕为对照组,30名接受传统讲授教学和PBL联合Seminar教学法的专硕为试验组。教学结束后,比较两组出科考核成绩和调查问卷结果。前者包括理论考试及科研综合能力考核,后者包括文献阅读数量、自主学习能力、科研思维能力、科研写作能力和问题分析能力、科研经历及科研产出。与对照组相比,试验组的出科考核成绩和科研综合能力显著升高,差异有统计学意义(P<0.05);其自主学习、科研思维、科研写作、问题分析能力、科研经历及科研产出亦明显提升,差异有统计学意义(P<0.05)。PBL联合Seminar教学法能激发研究生的学术兴趣和动力,提高学生的科研能力。

关键词： PBL教学法 Seminar教学模式科研能力呼吸内科专业学位硕士研究生教育

消化系统肿瘤m6A甲基化修饰对非编码RNA调控的研究进展

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宁夏医科大学学报 2023年第10期45卷 1047-1052页

作者：李晓文吴巍芸广东医科大学附属医院消化内科湛江524001

m6A甲基化修饰是哺乳动物中最丰富的RNA修饰方式,是表观遗传学重要的调控方法之一,通过添加、移除或者识别结合m6A位点,参与RNA合成与代谢过程,进而调控基因的表达。非编码RNA(ncRNA)是一类缺乏编码多肽或蛋白质能力的RNA,在肿瘤的发生... 详细信息

m6A甲基化修饰是哺乳动物中最丰富的RNA修饰方式,是表观遗传学重要的调控方法之一,通过添加、移除或者识别结合m6A位点,参与RNA合成与代谢过程,进而调控基因的表达。非编码RNA(ncRNA)是一类缺乏编码多肽或蛋白质能力的RNA,在肿瘤的发生和发展中发挥着重要作用,是癌细胞增殖、凋亡、迁移、侵袭、耐药等生物学特性的调节因子。越来越多的研究表明,m6A甲基化修饰可通过调控ncRNA参与肿瘤的发生和发展。本研究就消化系统肿瘤中m6A甲基化修饰对ncRNA表达调控的研究进展作一综述。

关键词： m6A甲基化修饰非编码RNA 消化系统肿瘤调控机制

MiR-192对结直肠癌细胞ZEB2表达及迁移和侵袭的影响

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肿瘤 2014年第1期34卷 13-18页

作者：吴巍芸梁坚叶石才周宇广东医学院附属医院消化内科广东湛江524001

目的:探讨miR-192对结直肠癌SW480和SW620细胞ZEB2(zinc-finger E-box binding homeobox2)表达及迁移和侵袭能力的影响。方法:将miR-192模拟物(miR-192 mimics)分别转染SW480和SW620细胞,应用实时荧光定量RT-PCR和蛋白质印迹法检测转染后SW480和SW620细胞中miR-192、ZEB2 mRNA和ZEB2蛋白的表达,细胞划痕实验和Transwell侵袭实验检测转染后SW480和SW620细胞迁移和侵袭能力的改变。将重组载体pmiR-ZEB2-wt和miR-192 mimics共转染入SW480细胞,应用双荧光素酶报告基因验证ZEB2基因3'端非翻译区(3'-untranslated region,3'-UTR)是否有miR-192的结合位点。结果:与转染miR-192模拟物阴性对照组比较,miR-192 mimics转染后SW480和SW620细胞中miR-192的表达水平上调(P<0.05),ZEB2mRNA及其蛋白的表达水平明显下调(P<0.05),细胞的迁移和侵袭能力下降(P<0.05)。双荧光素酶报告基因验证结果显示,pmiR-ZEB2-wt和miR-192 mimics共转染后,SW480细胞中荧光素酶活性下降(P<0.05),ZEB2基因3'-UTR存在miR-192的结合位点。结论:ZEB2可能是miR-192的靶基因之一,上调SW480和SW620细胞中miR-192的表达可抑制ZEB2的表达,发挥抑制细胞迁移和侵袭的作用。

关键词：结直肠肿瘤微RNAs肿瘤侵润 ZEB2 细胞,SW480,SW620

miR-192与ZEB2在结直肠癌中的表达及其临床意义

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中国癌症杂志 2014年第7期24卷 507-511页

作者：吴巍芸周宇广东医学院附属医院消化内科广东湛江524001

背景与目的:微小RNA(microRNA,miRNA)是一类具有重要调控作用的非编码小分子RNA,在多种疾病的发生、发展中起重要作用。本研究通过检测结直肠癌(colorectal cancer,CRC)组织中miR-192及E盒结合锌指蛋白2(zinc finger E-box binding home... 详细信息

背景与目的:微小RNA(microRNA,miRNA)是一类具有重要调控作用的非编码小分子RNA,在多种疾病的发生、发展中起重要作用。本研究通过检测结直肠癌(colorectal cancer,CRC)组织中miR-192及E盒结合锌指蛋白2(zinc finger E-box binding homeobox 2,ZEB2)mRNA、蛋白表达,分析miR-192的异常表达与CRC的临床病理特征的关系及与ZEB2的相关性。方法:选择CRC组织和癌旁组织(距肿瘤边缘≥5 cm)各30例,结直肠腺瘤组织25例,正常结直肠组织15例。实时定量PCR(quantitative real-time polymerase chain reation,qRT-PCR)法检测上述各组中miR-192及ZEB2 mRNA表达;蛋白质印迹法(Western blot)检测ZEB2蛋白表达;对CRC组织中miR-192与临床病理特征关系及前者与ZEB2的相关性进行分析。结果:CRC组miR-192表达明显下调,ZEB2 mRNA和蛋白表达明显上调,分别与癌旁组、结直肠腺瘤组及正常组相比,差异均有统计学意义(P<0.05);miR-192的表达下调与CRC的淋巴结转移(P=0.021)和远处转移(P=0.023)相关。在CRC组织中,miR-192与ZEB2蛋白的表达呈显著的负相关关系(r=-0.365,P<0.05)。结论:miR-192在CRC组织中的表达下调与肿瘤的转移有关,且可能通过ZEB2参与CRC的发生、发展过程。

关键词：微小RNA 结直肠癌 E盒结合锌指蛋白2 临床意义

肝细胞癌m6A相关免疫基因预后模型构建及DDX1在肝细胞癌中的作用

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中华肿瘤防治杂志 2024年第2期31卷 85-94页

作者：邓青吴巍扬州大学医学院江苏扬州225009 无锡市第五人民医院急诊科江苏无锡214001 扬州大学附属医院普通外科江苏扬州225012

目的筛选肝细胞癌中N6-甲基腺苷(m6A)相关免疫基因构建预后模型,并探讨其关键基因DDX1在肝癌细胞中的作用。方法本研究选取癌症基因组图谱(TCGA)数据库中368例肝癌样本数据作为训练数据集,基因表达综合数据库(GEO)GSE 14520数据集中242... 详细信息

目的筛选肝细胞癌中N6-甲基腺苷(m6A)相关免疫基因构建预后模型,并探讨其关键基因DDX1在肝癌细胞中的作用。方法本研究选取癌症基因组图谱(TCGA)数据库中368例肝癌样本数据作为训练数据集,基因表达综合数据库(GEO)GSE 14520数据集中242例肝癌样本数据作为验证数据集,并基于表达相关性进行m6A相关的免疫基因筛选。通过LASSO Cox回归模型筛选与预后相关的m6A免疫基因,并构建风险评分(RS)模型。根据RS中位数值,分别将训练集和验证集中所有样本分为高与低风险组,Kaplan-Meier法评估高低风险组的生存预后差异。使用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测肝癌细胞系(HuH-7、SK-HEP-1、PLC/PRF/5和SNU-449)以及人正常肝细胞系THLE-2中筛选的关键基因表达水平;挑选表达变化较显著的基因,运用功能加强和缺失实验对其功能进行细胞验证。one-way ANOVA法比较多组间统计学差异,其中两两比较采用Tukey法。结果基于共表达分析共获得130个m6A相关免疫基因,最终筛选了5个基因(DDX1、HDAC1、HDAC2、NRAS和PLK1)用于RS模型构建。构建的模型显示,与低风险组比较,高风险组的生存率较低,在TCGA(P<0.001)和GSE 14520数据集(P=0.003)中,差异有统计学意义。与其他基因相比,DDX1在肝癌细胞中高表达。CCK-8实验结果显示,过表达DDX1可促进PLC/PRF/5和SNU-449细胞增殖,差异有统计学意义,P<0.05。Transwell结果显示,与阴性对照组相比,DDX1过表达可促进PLC/PRF/5和SNU-449细胞的迁移(105.00±12.53 vs 173.67±12.22;100.00±10.15 vs 147.33±12.10)和侵袭(83.00±10.81 vs 131.00±13.23;85.33±10.01 vs 135.00±12.49)。DDX1过表达可升高细胞丙二醛(1.01±0.10 vs 1.73±0.13)和活性氧(17.54±1.30 vs 25.97±2.24)水平,但降低超氧化物歧化酶(1.03±0.12 vs 0.52±0.12)的水平。DDX1敲除得到了相反的结果。结论本研究基于5个m6A相关免疫基因构建的预后模型可以有效预测肝癌患者的预后以及对免疫治疗的反应。其中DDX1可促进肝癌进展。

关键词：肝细胞癌 N6-甲基腺苷预后 DDX1

从玄府理论探讨风药在中医治疗抑郁症中的应用

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世界科学技术-中医药现代化 2024年 1-5页

作者：吴巍黄世敬中国中医科学院广安门医院

通过对玄府理论的探讨，本文对抑郁症的病机、治法进行分析和总结，并探讨风药在中医治疗抑郁症中的应用。在对玄府理论的内涵及风药的历史变革梳理的基础上，总结出抑郁症主要病机为玄府开阖阻滞，气血津液不通，神机运转不遂。基本治... 详细信息

通过对玄府理论的探讨，本文对抑郁症的病机、治法进行分析和总结，并探讨风药在中医治疗抑郁症中的应用。在对玄府理论的内涵及风药的历史变革梳理的基础上，总结出抑郁症主要病机为玄府开阖阻滞，气血津液不通，神机运转不遂。基本治法为开通玄府治郁，并辨证佐以理气、化浊、活血、补虚。通过对风药功效和药物成分作用的归纳，探讨其在治疗抑郁症方面的应用。通过玄府理论再次认识抑郁症，并认识到风药在治疗抑郁症方面有独特的作用，还可以协助其他药物，明显增效其治疗抑郁症的作用。

关键词：抑郁症玄府理论风药用药规律