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p75NTR阳性人食管鳞癌细胞的干细胞特性研究

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p75NTR阳性人食管鳞癌细胞的干细胞特性研究

作者：叶仕新福建医科大学

学位级别：硕士

食管肿瘤干细胞是食管癌组织中一小部分具有自我更新、无限增殖和多向分化潜能的细胞，它在食管癌组织中所占比例虽然很少，却与食管癌发生、发展与转移密切相关。p75是一种低亲和性神经营养素受体(neurotrophinreceptor p75，p75)，属... 详细信息

食管肿瘤干细胞是食管癌组织中一小部分具有自我更新、无限增殖和多向分化潜能的细胞，它在食管癌组织中所占比例虽然很少，却与食管癌发生、发展与转移密切相关。p75是一种低亲和性神经营养素受体(neurotrophinreceptor p75，p75)，属Ⅰ型跨膜TNF受体超家族成员。在以往的研究中，p75曾被用来分离神经冠干细胞，鼠脂肪多能干细胞和人角膜上皮原始祖细胞等。Okumura等研究证明正常食道上皮细胞中的p75细胞具有增殖、自我更新及多向分化能力，经鉴定为食道上皮干细胞。本实验将采用流式细胞分选技术对食管鳞癌细胞以p75为标志进行分选，而后将p75和p75—食管鳞癌细胞进行生物学特性研究和基因表达谱差异筛选，并以筛选出的某一差异基因为目的基因，通过干扰其表达后研究p75食管鳞癌细胞增殖及侵袭情况。第一部分p75阳性食管鳞癌细胞生物学特性研究目的：分选获取p75食管鳞癌细胞，通过一系列实验探讨其是否具有TSC的特性。方法：以流式细胞仪分选获取相应p75和p75—食管鳞癌细胞，而后分别进行细胞单克隆形成能力、增殖分化能力、侵袭能力、耐药能力、成瘤能力的对比研究试验，来探讨p75人食管鳞癌细胞的TSC的特性。结果：成功分选出p75和p75—食管鳞癌细胞;p75细胞的单克隆形成能力、自我更新能力、侵袭能力强于p75—细胞;在对化疗药物的耐受能力及小鼠致瘤能力上，p75细胞明显强于p75—细胞。结论：p75食管鳞癌细胞比p75—细胞具有更强的侵袭性、致瘤能力及耐化疗能力，可能富集食管磷癌干细胞。第二部分p75阳性和p75阴性食管鳞癌细胞差异表达功能基因筛选目的：对比p75和p75—食管鳞癌细胞基因表达谱差异，探寻并筛选p75食道鳞癌细胞中干细胞特性相关基因的表达，为从肿瘤干细胞角度研究食管肿瘤的发病机理和寻找新的治疗靶点提供线索。方法：采用全基因组表达谱芯片对p75和p75—细胞进行基因表达谱差异分析及筛选，并对筛选出的显著差异表达基因，应用RT-PCR方法比较部分基因丰度。结果：在食管鳞癌细胞中p75细胞较p75—细胞，Bmi-1和EZH2显著高表达(P＜0.01);根据生物学功能分类结果，初步筛选出和干细胞特性密切相关的与TGF-β和Wnt信号途径相关的上调基因共12条。结论：p75与p75—细胞比较，p75食管鳞癌细胞高表达与干细胞特性相关基因(Bmi-1、EZH2)，进一步证实了p75食管鳞癌细胞具有肿瘤干细胞特性。并为寻找食管鳞癌干细胞靶向治疗提供线索。第三部分RNA干扰沉默EZH2基因对P75NTR阳性食管鳞癌细胞增殖及侵袭的影响目的：以第二部分筛选的差异基因EZH2为目的基因，通过干扰沉默目的基因后，对p75食管鳞癌细胞增殖及侵袭有何影响。方法：以EZH2基因为靶点，设计构建其干扰小RNA的表达载体并转染p75食管鳞癌细胞，之后通过一系列实验，评价RNA干扰沉默EZH2基因后对p75食管鳞癌细胞增殖及侵袭的影响结果：p75食管鳞癌细胞中成功转染了干扰EZH2基因表达小RNA载体，细胞转染后，实验组细胞倍增时间较对照组明显延长(P＜0.01);细胞成克隆实验、细胞凋亡实验中实验组与对照组两者差异有统计学意义;Transwell小室侵袭实验显示实验组细胞侵袭率明显低于对照组。结论：RNA干扰抑制EZH2基因表达能显著降低p75食管鳞癌干细胞的增殖和侵袭能力，提示EZH2基因有望成为食管鳞癌干细胞基因治疗的潜在靶点。

关键词：肿瘤干细胞食管鳞癌 p75NTR流式细胞仪基因芯片EZH2siRNA 细胞增殖细胞侵袭

妊娠高血压病合并HELLP综合征4例临床分析

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福建医药杂志 2008年第4期30卷 68-69页

作者：叶仕新张宇福建医科大学附属漳州市医院 363000

HELLP综合征(hemoloysisel evated liver enzymes and low platets syndrome count syndrome,HELLP)是妊娠高血压病的一种严重并发症,其临床主要表现为溶血、肝酶升高及血小板减少,母婴病死率较高。2004年1月－2008年1月我院共收治妊娠... 详细信息

HELLP综合征(hemoloysisel evated liver enzymes and low platets syndrome count syndrome,HELLP)是妊娠高血压病的一种严重并发症,其临床主要表现为溶血、肝酶升高及血小板减少,母婴病死率较高。2004年1月－2008年1月我院共收治妊娠高血压病并发HELLP综合征患者4例,现将其临床资料分析如下。[第一段]

关键词： HELLP综合征妊娠高血压病临床分析严重并发症 liver count 血小板减少母婴病死率

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单操作孔全胸腔镜肺癌根治术62例

中国微创外科杂志 2016年第5期16卷 411-413页

作者：连铎煌徐驰曾志勇陈锦华叶仕新杨鲸蓉南京军区福州总医院胸心外科福州350025 南京军区福州总医院统计室福州350025

目的探讨单操作孔全胸腔镜肺叶切除术治疗肺癌的临床应用价值。方法 2013年2月~2014年12月,采用单操作孔全胸腔镜肺叶切除术治疗肺癌62例。经一个操作孔和一个观察孔手术,观察孔取腋中线第8肋间（左侧稍靠近腋后线）,约1.5 cm,操作孔上... 详细信息

目的探讨单操作孔全胸腔镜肺叶切除术治疗肺癌的临床应用价值。方法 2013年2月~2014年12月,采用单操作孔全胸腔镜肺叶切除术治疗肺癌62例。经一个操作孔和一个观察孔手术,观察孔取腋中线第8肋间（左侧稍靠近腋后线）,约1.5 cm,操作孔上肺叶切除取腋前线第4肋间,中、下肺叶切除取第5肋间,切口长3~5 cm,术后常规放置1根胸腔引流管。结果全组无手术死亡,无中转开胸,无严重并发症发生。2例加做副操作孔。手术时间（135.5±43.2）min,术中出血量（65.7±32.4）ml。术后胸腔引流（7.6±4.3）d,术后住院时间（10.5±3.8）d。清扫淋巴结（16.4±7.7）枚。结论单操作孔全胸腔镜肺叶切除术治疗肺癌安全、可靠。

关键词：单操作孔电视胸腔镜肺叶切除术肺癌

小干扰RNA沉默EZH2基因对人食管鳞癌细胞增殖及侵袭的影响

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中华实验外科杂志 2011年第12期28卷 2183-2185页

作者：叶仕新曾志勇杨胜生黄盛东陈安平福建医科大学福总临床医学院福州350025 南京军区福州总医院心胸外科中国人民解放军心胸外科研究所

目的观察EZH2基因对人食管鳞癌细胞株Eca109增殖及侵袭的影响。方法体外合成2条针对EZH2基因的小干扰RNA（siRNA）序列，通过脂质体转染导入人食管鳞癌Eca109细胞中，转染2个无关siRNA作为对照。通过监测细胞增长、成克隆实验、细胞凋... 详细信息

目的观察EZH2基因对人食管鳞癌细胞株Eca109增殖及侵袭的影响。方法体外合成2条针对EZH2基因的小干扰RNA（siRNA）序列，通过脂质体转染导入人食管鳞癌Eca109细胞中，转染2个无关siRNA作为对照。通过监测细胞增长、成克隆实验、细胞凋亡实验、细胞周期、侵袭实验等，评价抑制EZH2基因表达对Eca109细胞增殖及侵袭的影响。结果细胞转染后，实验组细胞倍增时间为（26．7±0．9）h，较对照组（22．6±0．8）h明显延长（P〈0．01）；细胞成克隆实验、细胞凋亡实验中实验组与对照组分别为[（39．1±2．3）％比（65．1±3．0）％，P〈0．01]、[（9．51±0．19）％比（1．11±0．08）％，P〈0．01]，两者差异有统计学意义；而细胞周期中实验组和对照组s期细胞为[（32．1±0．7）％比（31．9±0．4）％，P〉0．05]，差异无统计学意义；Transwell小室侵袭实验显示实验组细胞侵袭率明显低于对照组[（35．0±0．4）％比（51．8±0．7）％，P〈0．01]。结论RNA干扰抑制EZH2基因表达能显著降低Eca109细胞的增殖和侵袭能力，提示EZH2基因有望成为食管鳞癌基因治疗的潜在靶点。

关键词：食管鳞癌 EZH2 RNA干扰增殖侵袭

侧俯卧位胸、腹腔镜联合食管癌根治术治疗食管癌46例临床分析

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中国内镜杂志 2012年第10期18卷 1077-1079页

作者：徐驰曾志勇杨胜生庄聪文叶仕新杨鲸蓉连铎煌南京军区福州总医院胸心外科福建福州350025

目的探讨侧俯卧位胸、腹腔镜联合食道癌根治术的临床效果。方法对46例食管癌行侧俯卧位胸腹腔镜联合食管癌根治术:先左侧侧俯卧位行胸腔镜下胸段食管的游离及淋巴结清扫;胸部手术完成后改平卧位行腹腔镜下胃的游离及淋巴结清扫;胃游离... 详细信息

目的探讨侧俯卧位胸、腹腔镜联合食道癌根治术的临床效果。方法对46例食管癌行侧俯卧位胸腹腔镜联合食管癌根治术:先左侧侧俯卧位行胸腔镜下胸段食管的游离及淋巴结清扫;胸部手术完成后改平卧位行腹腔镜下胃的游离及淋巴结清扫;胃游离后剑突下小切口完成管状胃的制作,再将管状胃经食管床拉至左颈部与颈段食管行端侧吻合。结果无中转开胸及开腹。总手术时间:210～330min,平均266min;腹腔镜手术时间45～120min,平均78min;胸腔镜手术时间65～125min,平均87min。术中无大出血,总出血量80～180mL,平均135mL,其中腹腔出血10～30mL,平均15mL。共清扫纵隔淋巴结429枚,平均每例9.3枚;清扫胃左动脉旁、贲门旁淋巴结159枚,平均每例3.5枚。术后住院9～13d,平均9.6d。住院期间患者无死亡。术后并发症:无吻合口漏,快速房颤2例,肺部感染3例。结论侧俯卧位胸腹腔镜联合食道癌根治术在技术上是可行的,并且是安全的。

关键词：侧俯卧位食管癌手术胸腔镜腹腔镜

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胸腔Castleman病1例报告

福建医药杂志 2015年第2期37卷 180-181页

作者：郭帅曾志勇叶仕新徐驰杨鲸蓉福建医科大学福建医科大学福总临床医学院中国人民解放军南京军区福州总医院胸心外科福州350025

Castleman病是一种原因不明的反应性淋巴结病之一,临床上可分为局限型和多中心型,其中局限型多见,常发于胸腔,易误诊为肺癌或结核球,本例患者彩超示双侧附件区包块,CA125高,易误诊为卵巢癌伴肺转移,现将我院收治的局灶型Castleman病1例... 详细信息

Castleman病是一种原因不明的反应性淋巴结病之一,临床上可分为局限型和多中心型,其中局限型多见,常发于胸腔,易误诊为肺癌或结核球,本例患者彩超示双侧附件区包块,CA125高,易误诊为卵巢癌伴肺转移,现将我院收治的局灶型Castleman病1例报告如下。

关键词：反应性淋巴结局限型附件区包块 Castleman病1 中心型结核球局灶型肺转移白细胞计数双侧附件区

过表达HGF促慢性缺血心肌处血管生成的实验研究

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中国现代医学杂志 2012年第15期22卷 25-30页

作者：陈安平曾志勇刘洪涛叶仕新袁杨黄盛东福建医科大学福总临床医学院心胸外科福建福州350025 南京军区福州总医院心胸外科福建福州350025 第二军医大学长海医院心胸外科上海200433

目的研究过表达HGF对促进缺血心肌处血管生成作用及对心功能的影响。方法经左胸冠状动脉回旋支放置Ameroid环的方法建立稳定有效的慢性心肌缺血猪模型。随机分为3组(n=6)于缺血心肌处分别注射4×109pfu 200μL AdHGF、4×109pfu 200μL ... 详细信息

目的研究过表达HGF对促进缺血心肌处血管生成作用及对心功能的影响。方法经左胸冠状动脉回旋支放置Ameroid环的方法建立稳定有效的慢性心肌缺血猪模型。随机分为3组(n=6)于缺血心肌处分别注射4×109pfu 200μL AdHGF、4×109pfu 200μL AdNull、200μL Ns。继续饲养4周,检测心脏功能及心肌HGF蛋白表达等。结果全部实验动物成功构建慢性缺血性心脏病模型;治疗后心脏彩超检查示AdHGF组左室前壁缺血区室壁增厚,灌注明显改善,运动增强,LVEDV、LEEF、FS明显增加(P<0.05);AdHGF组心肌组织HGF蛋白较对照组获得较高表达(P<0.05);AdHGF组心肌血管数量及密度均明显高于对照组(P<0.05);Ad-HGF组VIII因子阳性的血管数量明显高于AdNull组(P<0.05)。结论过表达HGF促进慢性缺血心肌处血管生成,增加心肌血流灌注,改善缺血心肌局部微环境,从而改善和保护心功能的作用。

关键词：肝细胞生长因子慢性缺血性心脏病血管生成微环境移植

肺腺癌昼夜节律基因相关预后风险模型的构建与验证

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中国胸心血管外科临床杂志 2024年

作者：崔严奇赵虎张亚伟倪琳连铎煌杨鲸蓉叶仕新许蜂蜂张锦灿曾志勇福建医科大学福总临床医学院联勤保障部队第九〇〇医院(原南京军区福州总医院)普外科联勤保障部队第九〇〇医院(原南京军区福州总医院)心胸外科

目的探索昼夜节律基因与肺腺癌（lung adenocarcinoma,LUAD）的发生发展、预后及肿瘤微环境（tumor microenvironment,TME）之间的关系。方法采用癌症基因组图谱数据，评估昼夜节律基因集在LUAD中的表达、拷贝数变异和体细胞突变频率... 详细信息

目的探索昼夜节律基因与肺腺癌（lung adenocarcinoma,LUAD）的发生发展、预后及肿瘤微环境（tumor microenvironment,TME）之间的关系。方法采用癌症基因组图谱数据，评估昼夜节律基因集在LUAD中的表达、拷贝数变异和体细胞突变频率。采用GO、KEGG和GSEA富集分析探索生物钟基因影响LUAD进展的潜在机制。通过Cox分析、LASSO回归、支持向量机递归特征消除和随机森林筛选特征昼夜节律基因并建立预后模型，并在此基础上构建列线图预测患者1、3、5年生存率。绘制Kaplan-Meier生存曲线、受试者工作特征（receiver operating characteristic,ROC）曲线和时间依赖性ROC曲线评价模型的预测能力，GEO外部数据集进一步验证了预测模型的预后价值。此外，我们还评估了预后模型与免疫细胞和免疫检查点基因的关联。最后，利用单细胞RNA测序（single cell RNA sequencing,scRNA-seq）分析探讨预后相关的特征昼夜节律基因与TME中不同免疫细胞群体之间的分子特征。结果昼夜节律差异表达基因主要富集于cGMP-PKG信号通路、脂质与动脉粥样硬化和JAK-STAT信号通路等相关生物学过程。筛选出7个昼夜节律基因：LGR4、CDK1、KLF10、ARNTL2、RORA、NPAS2、PTGDS。根据中位风险评分（RiskScore），将样本分为高风险组和低风险组。与低风险组患者相比，高风险组患者表现出更不利的预后结局。免疫学特征分析显示，低风险组和高风险组之间的多种免疫细胞存在浸润差异。大多数免疫检查点基因在高风险组中的表达水平较高，并且RiskScore与CD276、TNFSF4、PDCD1LG2、CD274和TNFRSF9的表达呈正相关，与CD40LG和TNFSF15的表达呈负相关。通过scRNA-seq分析，RORA和KLF10主要表达于自然杀伤细胞。结论基于7个特征昼夜节律基因的预后模型在预测LUAD的生存方面具有一定的预测价值。昼夜节律基因的表达失调可能通过影响TME来调控LUAD的发生、进展以及预后，这为之后从昼夜节律紊乱影响免疫细胞机制的角度寻找治疗LUAD的潜在策略提供了可能的方向。

关键词：昼夜节律肺腺癌机器学习免疫微环境单细胞分析列线图

骨髓间充质干细胞对海水淹溺致急性肺损伤治疗作用的研究进展

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中国胸心血管外科临床杂志 2015年第4期22卷 375-379页

作者：郭帅曾志勇杨胜生徐驰叶仕新福建医科大学福州总医院临床医学院南京军区福州总医院心胸外科福州350025

随着海上活动的增加,海水淹溺性急性肺损伤/呼吸窘迫综合征的发生率逐年增高,光镜下其病理特征为肺间质水肿,肺泡间隔断裂,大量的红细胞及炎性细胞浸润。临床表现为持续性低氧血症和酸中毒,病情重,死亡率高,治疗效果差。骨髓间充质干细... 详细信息

随着海上活动的增加,海水淹溺性急性肺损伤/呼吸窘迫综合征的发生率逐年增高,光镜下其病理特征为肺间质水肿,肺泡间隔断裂,大量的红细胞及炎性细胞浸润。临床表现为持续性低氧血症和酸中毒,病情重,死亡率高,治疗效果差。骨髓间充质干细胞具有自我更新及多向分化潜能,可以归巢到受损的肺部,通过诱导分化为肺泡上皮及肺血管内皮细胞,进行肺组织修复,可能成为治疗海水淹溺性急性肺损伤及急性呼吸窘迫综合征的新方法。

关键词：骨髓间充质干细胞海水淹溺急性肺损伤急性呼吸窘迫综合征