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作者：原贵波扬州大学

学位级别：硕士

具有保守FxxhVQxhTG氨基酸残基的VQ蛋白被认为是一种植物特异性蛋白,第一种VQ蛋白SIBI（VQ23）发现于拟南芥中。近年来由于植物基因组测序趋于完善,VQ蛋白在多种植物中均被鉴定出来,大多数VQ基因编码的蛋白长度小于300个氨基酸且不含内... 详细信息

具有保守FxxhVQxhTG氨基酸残基的VQ蛋白被认为是一种植物特异性蛋白,第一种VQ蛋白SIBI（VQ23）发现于拟南芥中。近年来由于植物基因组测序趋于完善,VQ蛋白在多种植物中均被鉴定出来,大多数VQ基因编码的蛋白长度小于300个氨基酸且不含内含子。VQ蛋白在植物生长分化、种子发育以及响应生物胁迫和非生物胁迫等方面发挥着重要的作用,其作用模式多为与其他蛋白因子相互作用,参与信号传导,主要包括与丝裂原活化蛋白激酶（mitogen-activated protein kinase,MAPK）家族和WRKY转录因子（WRKY TFs）家族互作。目前对于VQ蛋白的研究主要集中在拟南芥中,相关机理功能研究较为深入,而在其他植物中则知之甚少。我们已有的研究已经鉴定出番茄中的26个VQ蛋白,并通过酵母双杂筛选出SlVQ6为SlMPK1的互作蛋白,且SlMPK1为番茄高温胁迫过程中的负调控因子,因此SlVQ6可能作为SlMPK1信号通路中的互作因子而响应高温应答。本实验构建SlVQ6原核蛋白表达载体,通过蛋白表达纯化获得GST-SlVQ6蛋白,并通过GST pull-down验证了 SlMPK1和SlVQ6的互作关系,酵母双杂交技术确定SlVQ6与SlMPK1重要的互作位点,体外磷酸化进一步表明SlVQ6作为SlMPK1的下游底物被磷酸化,并通过GST pull-down筛选出SlVQ6的37个互作蛋白。构建过表达和干扰SlVQ6载体,利用转基因技术获得过表达SlVQ6拟南芥、番茄转基因植株及干扰SlVQ6番茄植株,并对其在高温条件下进行表型分析和生理生化指标测定,初步阐释SlVQ6在高温胁迫下的机理和功能。主要研究结果如下:*** pull-down 验证 SlVQ6 与 SlMPK1 的相互作用本实验成功构建了 pGEX-4T-1-SlVQ6表达载体,利用大肠杆菌原核蛋白表达技术,以IPTG诱导蛋白表达,并通过GST亲和层析柱纯化出高纯度的GST-SlVQ6蛋白。进一步利用GST pull-down和Westrenblot技术在体外证明SlVQ6和SlMPK1蛋白之间存在相互作用（以GST蛋白作为阴性对照）。2.酵母双杂交确定SlVQ6和SlMPK1的互作区域研究首先通过将pGBKT7/SlMPK1转化酵母菌,验证诱饵蛋白SlMPK1存在自激活,并通过向酵母四缺培养基加20 mM 3-AT成功抑制其自激活;其次将SlVQ6蛋白分为多个具有功能的片段序列,并通过设计特异性引物,分别成功构建7个pGADT7/SlVQ6猎物载体和pGBKT7/SlVQ6诱饵载体,利用点对点杂交分别与pGBKT7/SlMPK1和pGADT7/SlMPK1质粒共转酵母营养缺陷培养基,成功确定SlVQ6的重要互作区域为102-174个氨基酸。3.体外磷酸化验证SlVQ6为SlMPK1的下游底物以GST为阴性对照,GST-SlVQ6为实验组在激酶缓冲液中与SlMPK1反应,通过12%SDS-PAGE电泳并干燥处理后成像,实验结果表明SlVQ6作为SlMPK1的下游底物而被磷酸化。4.过表达SlVQ6拟南芥、番茄和干扰SlVQ6番茄植株获得扩增SlVQ6和RNAiSlVQ6基因并连接到pBI121载体上构建pBI121-SlVQ6过表达和pBI121-RNAiSlVQ6载体,利用农杆菌介导的簪花法和转基因技术分别转化拟南芥和番茄,经过卡那霉素筛选后获得过表达SlVQ6拟南芥、番茄和干扰SlVQ6番茄植株。RT-PCR进一步对转基因植株进行检测,其中,拟南芥获得5个独立的转基因株系,过表达SlVQ6和干扰SlVQ6番茄分别获得5个和20个独立的转基因株系。5.高温胁迫下过表达SlVQ6拟南芥表型和生理指标分析转基因拟南芥T3代纯系植株（不同时期）进行45℃高温处理,在正常条件下恢复,观察幼苗表型以及下胚轴表型。结果显示,高温胁迫对拟南芥过表达株系的抑制远高于野生型。高温条件下,野生型和空载EV拟南芥在APX、SOD、POD、GR活性相对于未处理出现下降的趋势,但远高于过表达株系的活性。6.高温胁迫下过表达SlVQ6番茄表型和生理指标分析过表达SlVQ6番茄在45℃高温条件下处理,观察其恢复表型。结果显示,野生型番茄生长状况优于过表达株系;高温条件下的野生型番茄叶绿素含量也远远高于过表达植株;高温胁迫下的DAB,NBT染色表型表明,过表达番茄植株的耐高温能力同样低于野生型番茄;抗氧化酶活性测定结果显示野生型均高于过表达株系,表明在高温胁迫下,过表达SlVQ6植株抗氧化系统受到的影响更大。说明过表达SlVQ6番茄耐高温能力相对于野生型减弱,且SlVQ6在高温胁迫下发挥负调控的作用。

关键词：番茄 SlVQ6 SlMPK1 GSTpull-down 高温胁迫

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应用GST pull-down技术筛选番茄SIVQ6互作蛋白

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中国农业科学 2020年第15期53卷 3146-3157页

作者：原贵波莫双榕钱莹臧栋楠杨帆蒋红亮武媛丁海东扬州大学生物科学与技术学院

【目的】含有VQ基序(VQ)的蛋白质是植物特异性蛋白质,具有保守的"FxxhVQxhTG"氨基酸序列,调节植物生长和发育。番茄SlMPK1在高温胁迫过程中发挥重要作用,酵母双杂交(Y2H)显示SlVQ6蛋白能够与SlMPK1相互作用,通过GST pull-down技术进一... 详细信息

【目的】含有VQ基序(VQ)的蛋白质是植物特异性蛋白质,具有保守的"FxxhVQxhTG"氨基酸序列,调节植物生长和发育。番茄SlMPK1在高温胁迫过程中发挥重要作用,酵母双杂交(Y2H)显示SlVQ6蛋白能够与SlMPK1相互作用,通过GST pull-down技术进一步验证SlMPK1与SlVQ6的互作以及SlVQ6的互作网络,为研究SlVQ6介导的高温应答信号通路奠定基础。【方法】通过pGEX-4T-1-PC-VQ6质粒构建,以含有目的基因SIVQ6的菌液为模板,设计特异性引物,扩增目的基因序列,将获得的目的基因VQ6克隆到载体pGEX-4T-1的Bam HⅠ和NotⅠ的酶切位点之间,将获得的重组质粒pGEX-4T-1-PC-VQ6转入TOP10克隆菌株经IPTG(异丙基硫代半乳糖苷)诱导表达,通过GST柱亲和纯化获得目标蛋白PC-VQ6,进而获得预期GST-SlVQ6融合蛋白,通过体外磷酸化进一步确定SlVQ6是否是SlMPK1的下游底物;以GST-SlVQ6为诱饵蛋白固定于GST Sepharose Beads上,与番茄叶片总蛋白孵育后洗脱,收集洗脱液进行SDS-PAGE凝胶电泳验证,通过LC-MS/MS检测SlVQ6可能互作的候选蛋白,并对筛选的SIVQ6互作蛋白通过GO、KEGG和蛋白互作网络进行生物信息学分析。【结果】成功构建pGEX-4T-1-PC-SlVQ6基因重组表达质粒,并获得带有GST标签的GST-SlVQ6融合蛋白,其分子量大小约为54 kD;将GST-SlVQ6和His-SlMPK1进行体外磷酸化试验,SlMPK1能够磷酸化SlVQ6,而作为阴性对照的GST与SlMPK1无相互作用,且SlVQ6不存在自磷酸化的现象,表明GST-SlVQ6和His-SlMPK1具有相互作用,且SlVQ6是SlMPK1的下游底物;以GST-SlVQ6融合蛋白为诱饵蛋白(空GST为阴性对照),利用pull-down试验筛选番茄叶片组织蛋白中与SlVQ6蛋白结合的蛋白,经SDS-PAGE分离、液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)鉴定以及Mascot与蛋白数据库检索,共鉴定出37个与SlVQ6结合的蛋白,包括蛋白激酶Receptor for Activated C Kinase 1B(RACK1B),通过GO、KEGG和蛋白互作网络的生物信息学分析,表明这些蛋白参与多种信号通路,其中8个核糖体蛋白可能与高温胁迫密切相关。【结论】SlVQ6是SlMPK1的底物蛋白,且37个蛋白可能与SlVQ6互作,这些蛋白与胁迫反应有着密切的联系,可能会在提高番茄植株高温耐受性等方面发挥重要作用。

关键词：番茄 SlVQ6 SlMPK1 pull-down 互作蛋白

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人格化运作与治理性团结——驻村第一书记助推乡村振兴的结对治理

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西北农林科技大学学报(社会科学版) 2025年

作者：李丹阳钟楚原西北农林科技大学人文社会发展学院西北农林科技大学马克思主义学院

如何密切政府与民众间的关系,成为推动国家治理体系和治理能力现代化的重要议题。借助对浙西、鄂西南、陕南典型村庄的田野观察,围绕驻村第一书记助推乡村振兴的结对治理实践,发现在治理中存在从条块结对到人格化结对的治理机制和治理... 详细信息

如何密切政府与民众间的关系,成为推动国家治理体系和治理能力现代化的重要议题。借助对浙西、鄂西南、陕南典型村庄的田野观察,围绕驻村第一书记助推乡村振兴的结对治理实践,发现在治理中存在从条块结对到人格化结对的治理机制和治理逻辑。(1)纵向行政系统的驻村第一书记依托条块结对的制度安排及人格化运作的适应性调整,通过创设联系接点、延展需求曲线和重构行动网络打造体系化的联结机制,进而在结对关系建立、结对治理运行和结对成效释放中形塑与横向乡村自治系统多元主体间团结协作的治理共同体,并呈现出“治理性团结”的运行机理。(2)治理性团结以“体系化联结”和“人格化运作”为核心互动机制,阐明了处于在位控制的行政系统如何援引有“体”有“系”的联结渠道,吸纳第一书记回应乡村社会诉求和重构政府民众关联,其运行逻辑符合行政激活自治的本质特征、政治势能与群众路线的生成诱因以及共享发展机制的决定性影响。(3)不同于西方社会通过政治性交往和规范化联系等非人格化机制间接联系生活世界的生活政治化思路,系统通过作为“体”的党政科层体系及其代理和作为“系”的复杂人格化机制及其他补充机制直面生活世界中的群众具体性,呈现出系统生活化的联结思路。

关键词：结对治理驻村第一书记体系化联结人格化运作治理性团结

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油酸钠体系下PBTCA对氟碳铈矿与萤石的浮选分离及机理研究

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有色金属科学与工程 2025年

作者：李婷刘诚杨思原武汉理工大学资源与环境工程学院关键非金属矿产资源绿色利用教育部重点实验室

本文研究了在捕收剂油酸钠体系下，2-磷酸基-1，2，4-三羧酸丁烷(PBTCA)作为抑制剂分离氟碳铈矿与萤石的可行性。单矿物浮选试验结果表明，油酸钠捕收剂对氟碳铈矿和萤石均具有良好的捕收性能，PBTCA可选择性地抑制萤石的浮选而不影响... 详细信息

本文研究了在捕收剂油酸钠体系下，2-磷酸基-1，2，4-三羧酸丁烷(PBTCA)作为抑制剂分离氟碳铈矿与萤石的可行性。单矿物浮选试验结果表明，油酸钠捕收剂对氟碳铈矿和萤石均具有良好的捕收性能，PBTCA可选择性地抑制萤石的浮选而不影响氟碳铈矿的浮选。人工混合矿浮选试验结果表明，在PBTCA/油酸钠药剂制度作用下，可得到氟碳铈矿品位为83.53%，回收率大于 80%的精矿产品，有效地实现了氟碳铈矿与萤石矿物之间的浮选分离。Zeta电位结果表明，PBTCA与萤石表面的相互作用力较PBTCA与氟碳铈矿表面的相互作用力更强，PBTCA可选择性地抑制油酸钠捕收剂在氟碳铈矿物表面的吸附。XPS分析结果表明，PBTCA主要是通过其分子结构中的羧基和磷酸基与萤石表面的钙离子发生化学作用，从而实现对氟碳铈矿浮选过程中萤石的选择性抑制。

关键词：氟碳铈矿萤石 PBTCA 浮选分离化学吸附

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无心之失抑或有的放矢：上市公司存贷双高异象与审计质量

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管理评论 2025年

作者：窦超原亚男杨雪罗棪心中央财经大学商学院北京交通大学经济管理学院

我国上市公司的审计质量一直饱受争议，而近些年一再爆雷的“存贷双高”型企业进一步凸显了这一问题的严重性，上市公司造假案件不仅对资本市场造成极大冲击，也集中暴露了会计师事务所在审计工作中的职责缺位与利益勾结问题，引发了市... 详细信息

我国上市公司的审计质量一直饱受争议，而近些年一再爆雷的“存贷双高”型企业进一步凸显了这一问题的严重性，上市公司造假案件不仅对资本市场造成极大冲击，也集中暴露了会计师事务所在审计工作中的职责缺位与利益勾结问题，引发了市场对企业“存贷双高”异象与审计质量问题的关注及担忧。立足于当前证监会坚持“一案双查”的现状，究竟上市公司的“存贷双高”异象与审计质量间存在何种关系？如何来改善“存贷双高”型企业的审计质量以防范风险？本文在理论分析的基础上，以2007—2018年沪深A股上市公司为研究样本进行了实证分析，系统验证了“存贷双高”型企业存在的低水平审计质量问题，凸显了这一财务异象潜在的隐患特征。进一步，从公司内部治理机制与外部治理渠道展开了缓解机制的探究，并探究了“存贷双高”影响审计质量的路径。研究结果表明，提升审计委员会的人员规模与独立性可以有效改善“存贷双高”型企业的审计质量，而公司面临的卖空压力越大、媒体关注度越高亦能显著提高“存贷双高”型企业的审计质量。同时，“存贷双高”通过审计合谋影响审计质量。上述结果不仅揭示了现阶段审计工作在防范“存贷双高”型企业爆雷中的职责缺位，也给相关市场主体预防风险和监管部门加强监督提供了借鉴参考，有助于资本市场更好地认清“存贷双高”这一财务异象与审计质量之间的关系。

关键词：存贷双高审计质量缓解机制

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民众戏剧社同人与现代中国话剧道路的探索

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河南师范大学学报(哲学社会科学版) 2025年 129-136页

作者：焦欣波西北大学文学院

1919年“五四运动”后,“民众”观念日渐盛行,“以非营业的性质、提倡艺术的新剧为宗旨”,且以《戏剧》为阵地的民众戏剧社成立。作为文明戏迈向现代话剧重要的转捩性事件,极具现代思想的民众戏剧社同人秉持五四新文化革新精神,除提倡... 详细信息

1919年“五四运动”后,“民众”观念日渐盛行,“以非营业的性质、提倡艺术的新剧为宗旨”,且以《戏剧》为阵地的民众戏剧社成立。作为文明戏迈向现代话剧重要的转捩性事件,极具现代思想的民众戏剧社同人秉持五四新文化革新精神,除提倡“爱美的戏剧”之外,还持续推动罗曼·罗兰“民众戏剧”、安托万“小剧场”等观念的落地,并引发非职业化与职业化的演剧论争。就现有史料而言,梳理总结民众戏剧社同人的道路探索及其主张,不仅有助于现代话剧理论形态与实践路径讨论的深入,而且有助于对话剧与中国社会及民众之间关系考察的深入。

关键词：罗曼·罗兰 “问题剧” “无形剧场” “爱美的戏剧” “职业的戏剧”

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120种(品种)鼠尾草在上海地区适应性的综合评价

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西北植物学报 2025年

作者：黄艳波上海辰山植物园华东野生濒危资源植物保育中心

【目的】构建鼠尾草适应性综合评价体系,筛选上海(长三角)地区适栽的鼠尾草物种。【方法】用层次分析法(AHP)构建由5个约束层22个指标层组成的适应性评价体系,对国内外120种(品种)鼠尾草属植物的适应性进行综合评估。【结果】抗性/突出... 详细信息

【目的】构建鼠尾草适应性综合评价体系,筛选上海(长三角)地区适栽的鼠尾草物种。【方法】用层次分析法(AHP)构建由5个约束层22个指标层组成的适应性评价体系,对国内外120种(品种)鼠尾草属植物的适应性进行综合评估。【结果】抗性/突出性状和生长势是适应性评价体系中2个主要表征鼠尾草适应能力的因子。120个供试鼠尾草的适应性从高到低共划分为4个等级:Ⅰ级>3.50分,Ⅱ级为3.00～3.50分,Ⅲ级为2.50～3.00分,Ⅳ级≤2.50分。其中,Ⅰ级包括丹参等23个原种和樱红小花鼠尾草等10个品种,在上海地区的适应性最好,推广栽培价值最大。【结论】制定了一套全面、合理、实用的鼠尾草适应性评价体系,明确了在上海(长三角)地区适应能力不同的鼠尾草种类,为不同地区引种与栽培鼠尾草属植物提供参考标准以及可直接选择的物种。

关键词：适应性评价层次分析法(AHP) 唇形科抗性鼠尾草属丹参

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结合卷积增强窗口注意力的双分支网络语音增强

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计算机研究与发展 2025年

作者：张晨辉原之安钱宇华山西大学大数据科学与产业研究院山西省机器视觉与数据挖掘工程研究中心(山西大学)

在复杂环境以及突发背景噪音条件下，语音增强任务具有极大的困难和挑战.主要原因是现有的语音增强方法未能有效捕获语谱图特征，尤其是局部信息.在过去的研究中，Transformer模型更专注于音频的全局信息，而忽略了局部信息的重要性.在... 详细信息

在复杂环境以及突发背景噪音条件下，语音增强任务具有极大的困难和挑战.主要原因是现有的语音增强方法未能有效捕获语谱图特征，尤其是局部信息.在过去的研究中，Transformer模型更专注于音频的全局信息，而忽略了局部信息的重要性.在音频经过短时傅里叶变换（STFT）处理后，多数模型仅使用幅值信息，而忽略了相位信息，导致它们未能有效捕获语谱图特征，从而影响了语音增强的效果.基于此设计出一个带有卷积增强窗口注意力的双分支语音增强神经网络，该模型采用U-NET架构.该模型通过双分支结构对音频的幅值和相位信息同时建模.在2个分支之间引入复值计算模块以实现信息交互，在编码器层和解码器层之间的跳跃连接部分采用卷积增强窗口注意力模块，该模块执行基于非重叠窗口的自注意力操作，在捕获局部上下文信息的同时显著降低了语音增强模型的计算复杂度.该模型在公开的Voicebank-Demand数据集上进行测试，与基线模型DCUNET16和DCUNET20相比，在客观语音质量评估指标（perceptual evaluation of speech quality， PESQ）分别提高了0.51和0.47.除了PESQ指标外，其他指标也都有显著的提升.相较于现有的各类语音增强模型，该模型在各项指标上均处于领先水平，尤其是在PESQ得分方面的提升更为显著.

关键词：语音增强双分支网络语谱图特征卷积增强窗口注意力全局信息局部信息

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基于最小频移键控调制的测风激光雷达

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光学学报 2025年

作者：潘亦晨肖正原陈嘉庚何祖源上海交通大学区域光纤通信网与新型光通信系统国家重点实验室

对于相干多普勒测风激光雷达(CDWL)，传统的单频脉冲方案因峰值功率存在上限，其距离分辨率和最大测量距离、风速测量精度两项指标之间存在相互制约。脉冲编码调制是解决上述制约关系的重要手段，但各种调制方式能够实现的最终系统性能... 详细信息

对于相干多普勒测风激光雷达(CDWL)，传统的单频脉冲方案因峰值功率存在上限，其距离分辨率和最大测量距离、风速测量精度两项指标之间存在相互制约。脉冲编码调制是解决上述制约关系的重要手段，但各种调制方式能够实现的最终系统性能有所差异。本文提出了一种基于最小频移键控(MSK)调制的CDWL方案，利用MSK调制波形的低串扰特性，相应地增加脉冲宽度，实现了CDWL性能的进一步提升。通过理论分析、仿真及实验，证明了MSK调制方案相较于二进制相移键控(BPSK)调制具有更强的串扰抑制能力与更高的风速测量精度。在20 W峰值功率上限，20 ns码片宽度以及63位编码的条件下，实测该方案可在450 m探测距离内实现3 m的距离分辨率与0.20 m/s的风速测量精度。

关键词：激光雷达最小频移键控串扰抑制距离分辨率风速测量精度

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中国古老月季‘月月粉’等位基因不平衡分析与分子标记开发利用

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园艺学报 2025年

作者：阎旭李月傅小鹏宁国贵梁梅华中农业大学果蔬园艺作物种质创新与利用全国重点实验室

利用已报道的中国古老月季‘月月粉’（Rosa chinensis‘Old Blush’）的两套单倍型基因组——RcOB＿hap1与RcOB＿hap2，对其基因组进行全面的比较分析。同时利用生物信息学方法鉴定‘月月粉’中的不平衡等位基因，开发相应分子标记。... 详细信息

利用已报道的中国古老月季‘月月粉’（Rosa chinensis‘Old Blush’）的两套单倍型基因组——RcOB＿hap1与RcOB＿hap2，对其基因组进行全面的比较分析。同时利用生物信息学方法鉴定‘月月粉’中的不平衡等位基因，开发相应分子标记。结果表明，两套单倍型基因组共线性较好，但RcOB＿hap2组装的完整性明显优于RcOB＿hap1。‘月月粉’杂合度为3.48%，含有大量的单碱基变异、小片段插入或缺失以及大片段染色体变异。全基因组范围可能存在1 157对蛋白功能差异的等位基因，720对表达显著差异的等位基因。GO注释以及KEGG富集结果表明，不平衡等位基因主要参与了代谢合成调控、生长发育以及环境适应等过程。围绕‘月月粉’的花器官发育、挥发物质合成与抗病免疫反应，分别挑选了不平衡等位基因AP2、MBY4、DSC1进行分子标记开发。在183份月季材料中的分子标记结果显示，蛋白功能不完整的Hap2型AP2在现代栽培月季中被强选择，使月季具有重瓣性状；表达量低的Hap2型MBY4被多数现代月季选择，可能导致栽培月季品种酚类物质合成减少；针对DSC1，现代月季品种广泛携带了表达量低且蛋白功能受影响的Hap1型，可能使现代月季抗病性减弱。

关键词：月季等位基因不平衡等位基因蛋白功能差异等位基因差异表达分子标记

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