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肝细胞生长因子诱导细胞增殖和迁移的机制研究

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肝细胞生长因子诱导细胞增殖和迁移的机制研究

作者：卢翠玲中国人民解放军军事医学科学院

学位级别：硕士

肝细胞生长因子是一种作用广泛的细胞因子，对多种组织细胞具有重要的调控作用，包括刺激细胞增殖，促进细胞迁移及抑制细胞凋亡等。HGF的生物学效应通过不同的信号途径介导。鞘氨醇-1-磷酸盐(S1P)是质膜鞘磷脂的代谢产物，也是重要的... 详细信息

肝细胞生长因子是一种作用广泛的细胞因子，对多种组织细胞具有重要的调控作用，包括刺激细胞增殖，促进细胞迁移及抑制细胞凋亡等。HGF的生物学效应通过不同的信号途径介导。鞘氨醇-1-磷酸盐(S1P)是质膜鞘磷脂的代谢产物，也是重要的生物活性物质，可调节细胞的增殖、迁移、分化、死亡等。鞘氨醇激酶(SK)是S1P合成的关键酶，目前被证明是一重要的信号分子。但是，SK是否参与HGF的信号转导及介导HGF的生物学效应并不清楚。本研究利用肝癌细胞系HepG2及SMMC-7721为模型，观察了HGF与SK信号之间的关系。我们采用RT-PCR和免疫组化的方法，从基因和蛋白水平分析了HGF受体c-Met、SK及S1P受体EDG-1、EDG-3、EDG-5在HepG2和SMMC-7721细胞的表达情况。这两个细胞系高表达上述分子，因此是研究HGF和SK通路的理想靶细胞。我们利用MTT法和细胞迁移测试法观察到重组HGF对肝癌细胞只有轻度的刺激增殖作用，但却有很强的促迁移作用。我们建立了[γsup>32P]ATP掺入检测细胞内SK活性的方法。HGF作用于SMMC-7721细胞后能明显增强细胞内SK的活性。已知HGF／c-Met可以激活PI-3K、Rho和MAPK信号通路。PI-3K和MAPK的特异性阻断剂Ly294002、PD98059可以阻断HGF对SK的激活作用，表明HGF／c-Met通过MAPK、PI-3K途径来激活SK，SK是MAPK、PI-3K的下游分子。为探讨SK是否介导HGF的生物学效应，我们采用二甲基鞘氨醇(DMS)阻断SK通路，结果发现抑制SK酶的活性可以明显阻断HGF对细胞的刺激增殖与迁移作用。另外，PI-3K抑制剂Ly294002，MAPK信号通路阻断剂PD98059具有和DMS类似的效果，而Rho信号通路抑制剂Y27632则对细胞的增殖和迁移无影响。这些结果表明HGF／c-Met通过PI-3K和MAPK激活SK，SK参与HGF诱导的促肝癌细胞增殖和迁移作用。在上述信号通路研究基础上，我们建立了不依赖于配体的化学激活c-Met受体的模型，从人骨髓间充质干细胞中克隆了c-met基因的胞内区，经测序鉴定正确后，构建与FKBP相连的融合基因表达载体。分别通过脂质体和磷酸钙的方法转染硕士学位论文:摘要 Mo7e、SMMC一7721细胞，利用RpPCR和W七stern Blot的方法检测到细胞株稳定表达该基因。用FKBP的结合药物APZO 1 87刺激稳定表达融合基因的 SMMC一7721细胞系，发现AP加1 87能够激活胞内SK活性，和HGF的激活作用类似，说明AP20187可以激活c一Mct信号通路。该模型为深入研究细胞信号途径，阐明c一met在肿瘤发生和发展过程中的作用及在诱导多能干细胞向肝细胞分化中的作用提供了实验基础，为研究孤儿受体的功能提供了技术平台。

关键词：肝细胞生长因子增殖与迁移鞘氨醇激酶

广西地区帕金森病PINK1基因突变与多态性的研究

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广西地区帕金森病PINK1基因突变与多态性的研究

作者：卢翠玲广西医科大学

学位级别：硕士

目的:探讨广西地区帕金森病(Parkinson Disease,PD)患者PINK1｛Pho- snhatase and tensinhomologue (PTEN)-induced kinase 1｝基因1-8号外显子点突变、缺失突变和多态性分布特点,及其与帕金森病的关系。方法:采用聚合酶链反应(polymerase chain reaction, PCR)扩增50例帕金森病组(其中早发性帕金森病28例、晚发性帕金森病22例)和55例相匹配的对照组(其中青年对照组17例、老年对照组38例)的PINK1基因1-8号外显子;用琼脂糖凝胶电泳(agarose gel electrophoresis,AGE)检测PCR产物是否为特异性扩增和PINK1基因1-8号外显子的大片段缺失突变;单链构象多态性分析(single strand conformation polymer phi- sm,SSCP)检测PINK1基因1-8号外显子的点突变,并对SSCP出现异常泳带的相应片断进行DNA直接测序,如果发现多态性位点,采用斑点杂交法进行检测进一步明确其基因型,并计算多态性位点的基因型频率和等位基因频率,所有实验结果采用卡方检验进行统计分析。结果:未发现帕金森病组和对照组出现PINK1基因外显子的大片段的缺失突变;在早发性PD组中有1例出现5号外显子杂合型突变(G12169A),导致第341位氨基酸的甲硫氨酸被异亮氨酸所替换(M341I);并发现广西地区存在PINK1基因5号外显子G12164A、内含子上游调控区IVS5-5G-A(即G12101A)连锁多态。此多态位点为已知的单核苷酸多态,但未见报道它们呈连锁状态。G12164A多态有G/G和G/A两种基因型,无A/A基因型,而IVS5-5G-A(G12101A)多态有G/A和A/A两种基因型,无G/G基因型。G12164A多态导致第340位氨基酸上的丙氨酸被苏氨酸所替(A340T),其生物学意义还不清楚。生物信息学分析发现内含子上游调控区ⅣS5-5G-A(G12101A)多态位点位于第五外显子mRNA剪接受点区域内,极可能破坏基因表达的正常调控,从而影响PINK1蛋白的翻译导致PINK1蛋白功能的异常或丧失。帕金森病组的PINK1基因5号外显子G12164A、内含子上游调控区IVS5-5G-A(G12101A)连锁多态在G/A、A/A基因型频率(42%)与对照组(23.6%)相比有升高趋势(X2=4.034,P=0.045),在晚发性PD组中G/A、A/A基因型频率(45.5%)与老年对照组(21.1%)相比有升高趋势(X2=3.951,P=0.047),以上差异均有统计学意义,余各组之间的等位基因频率比较差异均无统计学意义(P>0.05)。结论:PINK1基因可能不是广西地区PD患者致病基因的突变热点;G121- 64A、IVS5-5G-A(G12101A)连锁多态可能是广西地区晚发性PD患者的易感因素。

关键词：帕金森病 PINK1基因突变多态性

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伊河流域中下游地区土壤质量特征及评价

伊河流域中下游地区土壤质量特征及评价

作者：卢翠玲河南大学

学位级别：硕士

伊河流域位于我国生态过渡带和生态环境脆弱带,土地利用类型、耕作方式、施肥灌溉等因素影响着土壤性质和土壤质量的变化。迄今在伊河流域地区对土壤属性和质量评价方面所作的工作甚少。本研究以伊河流域中下游地区为研究对象,采用资料... 详细信息

伊河流域位于我国生态过渡带和生态环境脆弱带,土地利用类型、耕作方式、施肥灌溉等因素影响着土壤性质和土壤质量的变化。迄今在伊河流域地区对土壤属性和质量评价方面所作的工作甚少。本研究以伊河流域中下游地区为研究对象,采用资料收集与野外调查,野外试验与室内分析相结合的方法,系统测定了土壤质量物理和化学指标,分析了它们的统计和空间分布特征;建立了研究区土壤质量的评价指标体系及评价模型,并采用模糊数学综合评价法分析了土壤质量整体状况;进而预测了土壤质量空间分布,并对土壤质量空间分异规律进行了探讨,为伊河流域农业可持续发展提供了重要的指导思想和科学依据。获得的主要研究结论如下:1.土壤质量物理指标特征:研究区土壤粒径主要分布在0.01.05 mm范围,以粗粉粒为主,各粒径的含量均值表现为:粗粉粒>粗粘粒>细粉粒>细砂粒>粗砂粒>细粘粒;00 cm和200 cm土层的土壤粒径组成和含量变化不大;从空间变化来看,中游和下游的土壤均属于壤土,从中游到下游粒径总体趋势由细变粗,粘粒含量减少,粉粒、砂粒含量增大。由各粒级的变异系数可知,在空间上粗粉粒的含量趋于稳定,细粘粒和粗砂粒具有强变异性。土壤容重均值介于1.23.43 ***之间。从土壤紧实度来看,中游00 cm土层的土壤处于适合松紧状态,中游200 cm土层和下游两个土层的土壤均处于紧实状态;在不同区域、不同土层的土壤容重变异系数都在10%左右,说明研究区内土壤容重相对稳定。土壤含水量的均值在水平(中游和下游)和垂直(00 cm和200 cm)方向上变化都不明显,均在20%左右,说明土壤水分处于较适宜水平。总的来说研究区土壤的物理性质适宜农作物的生长。2.土壤质量化学指标特征:研究区土壤中有机质含量处于中上水平,全氮含量极缺乏,无机氮含量缺乏,全磷和速效磷含量丰富,全钾含量极丰富;微量元素铁、锰、锌含量的均值均未超过国家规定的标准,硼、铜含量属于富集状态。00 cm和200cm土层土壤各化学指标含量相比较可知,除了无机氮、硼和pH值表现为深层高于表层,其余指标都是表层高于深层。在00 cm土层上,中游的有机质、活性有机质、全氮、无机氮和微量元素含量均值均高于下游;在200 cm土层上,大部分化学指标在中游和下游的含量均值变化不大。研究区速效磷表现为强变异性,pH值表现为弱变异性,其它指标在两个土层上均表现为中等程度的变异,相比较来说碳氮磷这些大量元素的变异程度要大于硼铜铁锰锌这些微量元素。总的来说,研究区碳、磷和钾较适宜作物的生长,氮素比较亏缺,从00 cm和200 cm土层上土壤质量各指标在区域上的分布特征来看,空间变异复杂,表层养分含量高于深层,大部分中游养分含量高于下游。3.综合土壤物理和化学指标对土壤质量进行评价,首先确定评价的最小数据集(MSD),00 cm土层的MSD为:粘粒含量、容重、含水量、总有机质、全氮、无机氮、全磷、速效磷、全钾、铁;200 cm土层的MSD为:粘粒含量、容重、含水量、总有机质、活性有机质、全氮、全磷、速效磷、pH值、铜、铁。确定各指标隶属度函数:有机质、活性有机质、全氮、无机氮、全磷、速效磷和全钾7个评价指标的隶属度函数采用S型隶属度函数;粘粒含量、容重、含水量、pH值、硼、铜、铁、锰、锌这几个评价指标采用抛物线型函数,进而计算各指标隶属度值。运用主成分分析法确定各参评指标权重,最后采用模糊数学法综合量化后的土壤单因素理化指标,得出土壤质量综合指数(IFI)。通过对研究区土壤质量综合指数分析可知,00 cm土层的IFI大部分处于中等和偏高水平,只有极少数的IFI处于偏低和高质量水平;200 cm土层的IFI一般处于中等水平,三分之一处于偏低水平,极少数属于低水平和偏高水平。中游的土壤质量高于下游,且IFI在中游的变异程度低于下游。4.通过分析研究区IFI的全局趋势效应可知,IFI在两个土层上的趋势效应均为二阶;从半方差函数的拟合结果来看,IFI在00 cm土层上符合线性模型,在200 cm土层上符合高斯模型。IFI在空间上的变异规律为:块金系数00 cm土层(60.82%)>200 cm土层(39.84%),两个土层的IFI都具有中等程度的空间相关性,且表层IFI受随机因素的影响强于深层。由插值图可知,IFI在00 cm土层上整体呈西南、中部和东侧北边高的分布趋势,200 cm的整体分布特点与00 cm相似。土壤质量在地形、植被和人类耕作方式与施肥的综合作用下呈现出有规律的空间变异性。

关键词：伊河流域土壤质量指标土壤质量评价空间分布

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基于FKBP的细胞受体信号化学激活技术

军事医学科学院院刊 2003年第3期27卷 220-222页

作者：卢翠玲王立生军事医学科学院放射医学研究所北京100850

受体二聚化、寡聚化可以启动受体介导的细胞信号转导通路。构建细胞受体或信号传递蛋白与他克莫司(tacrolimus,FK5 0 6 )结合蛋白 (FKBP)的融合蛋白 ,利用FK5 0 6衍生物等诱导FKBP的二聚化或寡聚化 ,继而导致受体或信号传递蛋白的二聚... 详细信息

受体二聚化、寡聚化可以启动受体介导的细胞信号转导通路。构建细胞受体或信号传递蛋白与他克莫司(tacrolimus,FK5 0 6 )结合蛋白 (FKBP)的融合蛋白 ,利用FK5 0 6衍生物等诱导FKBP的二聚化或寡聚化 ,继而导致受体或信号传递蛋白的二聚化、寡聚化 ,从而激活特定的细胞受体信号转导通路。该技术为信号转导、细胞治疗。

关键词：信号传递受体内源性物质化学诱导

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颗粒细胞的增殖分化及其在卵泡发育中的作用

科学通报 2005年第21期50卷 2341-2347页

作者：卢翠玲杨巍胡召元刘以训中国科学院动物研究所生殖生物学国家重点实验室北京100080

颗粒细胞(GC)是卵巢中十分重要的细胞.从原始卵泡生长启动、增殖、分化、闭锁/排卵到黄体形成,GC在形态、功能等方面都发生各种变化.卵母细胞(OC)指导了GC的增殖、分化;同时GC也影响OC的成熟.有众多因子参与这个调节过程,牵涉到复杂的... 详细信息

颗粒细胞(GC)是卵巢中十分重要的细胞.从原始卵泡生长启动、增殖、分化、闭锁/排卵到黄体形成,GC在形态、功能等方面都发生各种变化.卵母细胞(OC)指导了GC的增殖、分化;同时GC也影响OC的成熟.有众多因子参与这个调节过程,牵涉到复杂的分子作用机制和信号转导通路,如p38MAPK通路可选择性调控FSH对GC的甾体生成;而转录因子LRH-1和DAX-1在该过程中可能发挥重要作用;FSH通过促进PCNA和StAR表达及甾体生成,诱导GC的增殖和分化;而ERK1/2通路的激活也可能参与FSH对GC增殖分化的诱导作用.因此,GC是一个用以研究细胞增殖、分化和细胞相互作用及其信号转导通路和分子机制的十分理想的细胞模型.本文评述了近几年国内外研究的最新进展.

关键词：颗粒细胞卵母细胞增殖分化凋亡调控

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清丰县孕产妇贫血情况调查分析

中国妇幼保健 2007年第33期22卷 4784-4785页

作者：卢翠玲李淑丽河南省清丰县人民医院 457300 河南省清丰县妇幼保健院

目的:了解清丰县孕产妇贫血患病的基本情况,为实现《妇女儿童发展纲要》提出的关于降低孕产妇缺铁性贫血患病率提供依据。方法:采用统一检测方法,对清丰县县城和17个乡镇399名孕产妇指尖血进行血红蛋白检测。结果:妊娠期贫血发生率14.9... 详细信息

目的:了解清丰县孕产妇贫血患病的基本情况,为实现《妇女儿童发展纲要》提出的关于降低孕产妇缺铁性贫血患病率提供依据。方法:采用统一检测方法,对清丰县县城和17个乡镇399名孕产妇指尖血进行血红蛋白检测。结果:妊娠期贫血发生率14.96%,产褥期贫血发生率23.52%。在农村更为明显。农村孕产妇贫血发生率21.96%,高于县城(7.63%)。贫血的发生率与孕产妇的年龄、胎次、妊娠月份有显著关系(P<0.005)。随着妊娠期月份的增加贫血发生率增高。结论:应加强高龄孕产妇,多胎孕产妇,晚期妊娠和产褥期的孕产妇监护,重点是农村孕产妇孕产期保健的系统管理。

关键词：妊娠期产褥期贫血

指向语言实践的精读引领课教学策略——以统编教材语文三年级上册第七单元《带刺的朋友》为例

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广西教育 2019年第28期 44-46页

作者：卢翠玲南宁市桂雅路小学

《义务教育语文课程标准(2011年版)》指出,语文课程“是一门学习语言文字运用的综合性实践性课程”。因此,在语文教学中要加强语言文字训练,既要得意,又要得言。精读引领课教学应回归语文教学本真,围绕“语用”这一课程本质,挖掘文本中... 详细信息

《义务教育语文课程标准(2011年版)》指出,语文课程“是一门学习语言文字运用的综合性实践性课程”。因此,在语文教学中要加强语言文字训练,既要得意,又要得言。精读引领课教学应回归语文教学本真,围绕“语用”这一课程本质,挖掘文本中的语言训练元素,引导学生在理解、积累和运用语言中发展语用能力,提高语文素养。在教学统编教材语文三年级上册第七单元《带刺的朋友》一课中,笔者以复述的形式进行语用训练,让学生学会运用语言文字,提高语用能力。

关键词：语文课程标准三年级上册教学策略统编教材语言实践朋友精读语言文字训练

基于学校文化的校本课程体系化构建——以南宁市桂雅路小学博雅课程体系构建为例

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广西教育 2020年第44期 41-45页

作者：卢翠玲南宁市桂雅路小学

2013年起,我校以博雅文化建设为背景,以校本课程体系化构建为目标,在博雅课程理念、博雅课程体系建设和博雅课程评价体系建设等方面做出了扎实的探索。一、探索校本课程开发的实践意义我国新一轮基础教育课程改革始于2001年,当年6月,教... 详细信息

2013年起,我校以博雅文化建设为背景,以校本课程体系化构建为目标,在博雅课程理念、博雅课程体系建设和博雅课程评价体系建设等方面做出了扎实的探索。一、探索校本课程开发的实践意义我国新一轮基础教育课程改革始于2001年,当年6月,教育部印发了《基础教育课程改革纲要(试行)》,明确指出:"改变课程管理过于集中的状况,实行国家、地方、学校三级课程管理政策,增强对地方、学校及学生的适应性。"校本课程的开发从此进入了我国中小学校管理者及教育研究者的视野。

关键词：校本课程课程管理课程体系构建中小学校体系化构建教育研究者评价体系建设基础教育课程改革

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全球金融监管变革迈出重要一步

经济导报 2009年第14期 32-33页

作者：卢翠玲

举世瞩目的G20峰会成功举行．参会的20国集团领导人就国际货币基金组织增资和加强金融监管等全球携手应对金融经济危机议题达成多项共识。尤其是在加强金融监管方面，与会领导人一致认为，金融业的重大衰退，以及金融监管措施的重大失... 详细信息

举世瞩目的G20峰会成功举行．参会的20国集团领导人就国际货币基金组织增资和加强金融监管等全球携手应对金融经济危机议题达成多项共识。尤其是在加强金融监管方面，与会领导人一致认为，金融业的重大衰退，以及金融监管措施的重大失误，是导致当前危机的根本原因。并承诺将采取行动为未来的国际金融业建立更加强有力的、更加具有全球一致性的监管框架。

关键词：金融监管国际货币基金组织国际金融业变革 20国集团经济危机监管措施监管框架