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毒害艾美球虫cDNA文库的构建和基因筛选

毒害艾美球虫cDNA文库的构建和基因筛选

作者：卞庆松中国农业科学院

学位级别：硕士

鸡球虫属于顶复器门(Apicomplexa)、孢子虫纲(Sporozoa)、球虫亚纲(Coccidiasina)、真球虫目(Eucoccidiorida)的寄生原虫,頂复器门包含了一些重要的兽医寄生虫和医学寄生虫(如艾美球虫、疟原虫、巴贝斯虫、弓形虫、隐孢子虫、住肉孢子虫... 详细信息

鸡球虫属于顶复器门(Apicomplexa)、孢子虫纲(Sporozoa)、球虫亚纲(Coccidiasina)、真球虫目(Eucoccidiorida)的寄生原虫,頂复器门包含了一些重要的兽医寄生虫和医学寄生虫(如艾美球虫、疟原虫、巴贝斯虫、弓形虫、隐孢子虫、住肉孢子虫等)。在这些寄生虫中,寄生在肠道上皮细胞的艾美球虫(Eimeria)主要破坏家禽肠道上皮细胞,从而威胁家禽健康和导致全球范围内养禽业的严重经济损失。长期以来球虫病的防治以药物为主,但是由于球虫抗药性的普遍存在,新药研制费用昂贵,加之药物或抗生素在家禽产品中的残留问题越来越受到消费者的关注,迫使人们寻求防治的新途径。在众多控制球虫病的方法中,基因疫苗防治前景诱人,而要研制高效的基因工程疫苗关键在于寻找最佳的虫体抗原基因。本研究以毒害艾美球虫(E. necatrix)为研究对象,从其普通生物学和分子生物两方面鉴定其为纯种,后用其孢子化卵囊构建了cDNA表达文库,从中筛选免疫抗原基因,获得了以下结果。1.按照传统生物学鉴定方法选取潜在期、寄生部位、最短孢子化时间、卵囊形状、卵囊大小及孢子囊大小等指标对毒害艾美球虫(广东株)进行了鉴定。获取了毒害艾美球虫的一系列生物学特性,从而初步验证了该单卵囊分离株是纯种。为了进一步验证该虫株是纯种,分别利用柔嫩艾美球虫(E. tenella)、巨型艾美球虫(E. maxima)和堆形艾美球虫(E. acervulina)的特异性引物,对纯化的卵囊DNA进行PCR扩增,结果扩增不出来这些引物相应的目的片段,从分子生物学角度验证了该虫株是纯种。2.用纯化的毒害艾美球虫孢子化卵囊口服接种感染雏鸡,制备鸡抗毒害艾美球虫阳性血清;用纯化的毒害艾美球虫孢子化卵囊超声裂解后的可溶性蛋白作为抗原加佐剂乳化后免疫家兔,制备兔抗毒害艾美球虫阳性血清。经ELISA检测,结果表明仅兔抗毒害艾美球虫阳性血清可用于毒害艾美球虫cDNA表达文库的免疫学筛选。3.以毒害艾美球虫孢子化卵囊为材料,利用SMARTTM cDNA文库构建试剂盒成功构建了毒害艾美球虫孢子化卵囊cDNA表达文库。原始文库滴度为4.72×106 pfu/mL,扩增后的文库滴度为2.62×1010 pfu/mL,文库重组率为97.5%,插入片段集中在500～1 100 bp之间。4.利用兔抗毒害艾美球虫阳性血清对毒害艾美球虫孢子化卵囊cDNA表达文库进行免疫学筛选,共获得3个阳性克隆。经鉴定,3个阳性克隆基因序列一致,基因的阅读框为344 bp,共编码133个氨基酸。登录GenBank进行同源性比较,结果该基因与已发表的毒害艾美球虫核糖体小亚基RNA基因、柔嫩艾美耳球虫核糖体小亚基RNA基因有很高的同源性,分别为98%和97%,说明该基因为毒害艾美球虫核糖体小亚基RNA基因。同时,用文库整体转化质粒方法对文库进行测序,获得了一致的EST序列,经过GenBank比对发现和柔嫩艾美球虫核糖体小亚基RNA基因的同源性为97%。

关键词：鸡球虫毒害艾耳球虫 cDNA文库免疫筛选

Ni/Co/Fe基非贵金属催化剂用作尿素电氧化协同水分解制氢研究

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Ni/Co/Fe基非贵金属催化剂用作尿素电氧化协同水分解制氢研究

作者：卞庆楠曲阜师范大学

学位级别：硕士

Bigels双凝胶制备的影响因素及其在食品中的应用

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食品科学 2024年第1期45卷 281-288页

作者：程传森刘艳庆卞苗苗刘军涂亦娴敬思群新疆大学生命科学与技术学院新疆乌鲁木齐830017 新疆大学生命科学与技术学院新疆生物资源基因工程重点实验室新疆乌鲁木齐830017 韶关学院食品学院广东韶关512005

Bigels双凝胶是由水凝胶和有机(油)凝胶结合而产生的一种新型双相体系,兼具水相和有机相的特点,表现出比单一凝胶更好的性能,具有既能递送亲水性物质又能递送疏水性物质、易于制备、良好的铺展性、良好的物理稳定性、较长的保质期等优... 详细信息

Bigels双凝胶是由水凝胶和有机(油)凝胶结合而产生的一种新型双相体系,兼具水相和有机相的特点,表现出比单一凝胶更好的性能,具有既能递送亲水性物质又能递送疏水性物质、易于制备、良好的铺展性、良好的物理稳定性、较长的保质期等优点。近些年,Bigels双凝胶得到了广泛关注,越来越多的研究表明Bigels在食品领域具有广泛的应用前景。本文简要概括了Bigels的结构,以及Bigels双凝胶制备过程中凝胶剂种类及浓度、水相和有机相比例、均质条件等几种主要因素对双凝胶理化性质的影响,并探讨了食品领域中Bigels在生物活性物质的递送、3D食品打印、脂肪替代等方面的应用,有助于双凝胶Bigels在食品行业中的深入研究与应用。

关键词： Bigels双凝胶水凝胶油凝胶生物活性物质的递送 3D食品打印脂肪替代

基于GA-VMD与CNN-BiLSTM-Attention模型的区域碳排放交易价格预测研究

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运筹与管理 2024年

作者：吴丽丽邰庆瑞卞洋李言辉中国石油大学(北京)经济管理学院南京大学计算机科学与技术系对外经济贸易大学金融学院

准确的碳价预测可为碳排放权交易市场监管者和投资者提供决策依据与参考。本文提出了基于GA-VMD降噪分解及CNN-BiLSTM-Attention混合模型的碳价预测方法，并选取湖北碳市场2014年4月2日到2022年6月15日1857个交易日的数据进行分析：首... 详细信息

准确的碳价预测可为碳排放权交易市场监管者和投资者提供决策依据与参考。本文提出了基于GA-VMD降噪分解及CNN-BiLSTM-Attention混合模型的碳价预测方法，并选取湖北碳市场2014年4月2日到2022年6月15日1857个交易日的数据进行分析：首先通过遗传算法改进变分模态分解（GA-VMD）将原始碳价序列分解为平稳的本征模态函数（IMF）分量，降低数据噪音；随后构建CNN-BiLSTM-Attention混合模型对各IMF分量进行预测。其中，卷积神经网络（CNN）可提取影响碳价多个特征，双向长短期记忆网络（BiLSTM）可实现时间序列信息提取，注意力机制（Attention）可突出某个关键输入对输出的影响。本文将预测出的各IMF分量集合成碳价序列，并提出12个模型，分为3个组进行剥离分析，结果显示GA-VMD-CNN-BiLSTM-Attention的预测结果最好。另外，为给市场参与者提供更多信息，本文在确定性预测的基础上加入区间预测，以便提前测量碳市场的波动性。

关键词：碳价预测深度学习变分模态分解 BiLSTM 注意力机制

基于Notch信号通路探讨牡荆素对哮喘模型小鼠的改善作用

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中国药房 2024年第15期35卷 1849-1854页

作者：费园园葛明坤卞庆平东南大学附属中大医院江北院区感染科南京210044 东南大学附属中大医院江北院区呼吸科南京210044

目的基于Notch信号通路探究牡荆素对哮喘模型小鼠的改善作用及机制。方法采用卵清蛋白与氢氧化铝混悬液腹腔注射和卵清蛋白雾化激发的方法构建哮喘小鼠模型。将哮喘小鼠随机分为模型组、牡荆素组(40 mg/kg)、Notch激活剂组(1 mg/kg Jagg... 详细信息

目的基于Notch信号通路探究牡荆素对哮喘模型小鼠的改善作用及机制。方法采用卵清蛋白与氢氧化铝混悬液腹腔注射和卵清蛋白雾化激发的方法构建哮喘小鼠模型。将哮喘小鼠随机分为模型组、牡荆素组(40 mg/kg)、Notch激活剂组(1 mg/kg Jagged1)、牡荆素+Notch激活剂组(40 mg/kg牡荆素+1 mg/kg Jagged1),每组12只;另取12只小鼠设为对照组。各组小鼠灌胃/腹腔注射相应药物或生理盐水,每天1次,连续14 d。末次给药后,检测小鼠静息每分钟通气量(VE)、呼气峰流速(PEF),观察肺组织病理形态并检测纤维化变性情况,测定外周血中辅助性T细胞17(Th17)、调节性T细胞(Treg)比例并计算Th17/Treg值,测定血清中白细胞介素18(IL-18)、IL-6、IL-17、IL-10水平,检测肺组织中Notch1、Delta样配体4(DLL4)、发状分裂相关增强子1(Hes1)蛋白表达。结果与对照组比较,模型组小鼠肺组织发生严重病理损伤及炎症细胞浸润;VE、PEF、外周血中Treg细胞比例、血清中IL-10水平均显著降低(P<0.05);肺组织中胶原容积分数(CVF),外周血中Th17细胞比例、Th17/Treg值,血清中IL-18、IL-6、IL-17水平,肺组织中Notch1、DLL4、Hes1蛋白表达水平均显著升高(P<0.05)。与模型组比较,牡荆素组小鼠肺组织病理损伤明显改善,上述指标变化趋势被显著逆转(P<0.05),且Notch激活剂Jagged1可显著逆转牡荆素对哮喘小鼠的上述药理功效(P<0.05)。结论牡荆素可通过抑制Notch信号通路,改善哮喘小鼠肺功能、Th17/Treg免疫失衡及炎症反应,减轻肺组织病理损伤及纤维化。

关键词：牡荆素 Notch信号通路哮喘肺纤维化 Th17/Treg免疫失衡炎症

基于Proteus仿真软件的双电压源电路分析研究

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家电维修 2024年第7期 56-58页

作者：卞云松江海职业技术学院江苏省扬州市225101

电工电子技术是一门专业基础课,由于该课程理论性过强,对职业技术学院的学生,学习有困难。要怎样破解难题,提高学习效率呢?本文用学生身边常见的双电压源为例,通过Proteus电路仿真软件,以不同的方法进行仿真分析,加强知识理解,让学生从... 详细信息

电工电子技术是一门专业基础课,由于该课程理论性过强,对职业技术学院的学生,学习有困难。要怎样破解难题,提高学习效率呢?本文用学生身边常见的双电压源为例,通过Proteus电路仿真软件,以不同的方法进行仿真分析,加强知识理解,让学生从做中学、学中做。

关键词： Proteus仿真软件电路分析双电压源电路

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清水混凝土关键施工技术及质量控制要点

上海建设科技 2024年第2期 95-98页

作者：卞松浩上海建工七建集团有限公司上海200050

以西湖大学建设工程三期教工之家清水混凝土施工为例,结合单体结构的特点,介绍了清水混凝土单体关键施工技术及质量控制要点。从施工策划、模板体系的选择、原材料及混凝土的生产过程和浇筑、振捣、养护等等方面深入剖析,大幅提升了清... 详细信息

以西湖大学建设工程三期教工之家清水混凝土施工为例,结合单体结构的特点,介绍了清水混凝土单体关键施工技术及质量控制要点。从施工策划、模板体系的选择、原材料及混凝土的生产过程和浇筑、振捣、养护等等方面深入剖析,大幅提升了清水混凝土工程的施工质量,在提高施工效率的同时保证了清水混凝土工程中结构、门窗、安装及泛光照明等多专业配合的施工质量,为类似清水混凝土工程施工提供了施工策划和质量控制方面的经验。

关键词：清水混凝土施工策划质量控制

GIS三工位开关典型机械缺陷的特征量差异分析及辨识方法

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高电压技术 2024年第6期50卷 2567-2579页

作者：郝建刘清松彭华东钟尧甲宗庆宋其宝输变电装备技术全国重点实验室(重庆大学电气工程学院) 重庆400044 国网重庆市电力公司电力科学研究院重庆401120 贵州电网有限责任公司电力科学研究院贵阳550002 山东泰开高压开关有限公司泰安271000

近年来气体绝缘金属封闭开关(gas insulated switchgear,GIS)三工位开关行程不到位机械缺陷导致的设备运行故障案例频发,为提升GIS三工位开关行程不到位机械缺陷检测及运维水平,首先采用126kV全真型三工位开关试验平台设置机构卡涩、传... 详细信息

近年来气体绝缘金属封闭开关(gas insulated switchgear,GIS)三工位开关行程不到位机械缺陷导致的设备运行故障案例频发,为提升GIS三工位开关行程不到位机械缺陷检测及运维水平,首先采用126kV全真型三工位开关试验平台设置机构卡涩、传动失耦和电机堵转三种典型机械缺陷,试验获得正常状态和3种典型机械缺陷情况下三工位开关分合闸动作过程中的电机电流、角位移行程和振动信号;然后,开展3种典型缺陷情况下“电流-机械”特征参量的提取及差异分析;最后,采用随机森林算法研究构建GIS三工位开关典型机械缺陷诊断模型,并验证其有效性。结果表明:单一的电机电流、角位移行程或振动信号图谱特性无法有效区分不同类型的机械缺陷,而采用“电流-机械”融合特征参量对3种典型机械缺陷的区分效果显著,基于“电流-机械”融合特征参量构建的GIS三工位开关机械缺陷随机森林诊断模型实现了对机构卡涩、传动失耦和电机堵转3种机械缺陷可靠诊断,为工程实际提升GIS三工位开关安全运行水平提供了技术参考。

关键词： GIS三工位开关机械缺陷电机电流角位移行程振动信号

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鄱阳湖白鹤在越冬期不同阶段的食物组成

生态学报 2024年

作者：丁慧芳卞庆嘉陈青王亚芳徐志文余定坤王文娟北京林业大学东亚-澳大利西亚候鸟迁徙研究中心南昌大学鄱阳湖环境与资源利用教育部重点实验室江西鄱阳湖湿地保护与恢复国家长期科研基地江西鄱阳湖湿地生态系统国家定位观测研究站江西鄱阳湖国家级自然保护区管理局北京林业大学生态与自然保护学院南昌大学生命科学学院

鄱阳湖是IUCN极危鸟类白鹤（Leucogeranus leucogeranus）极为重要的越冬地。以前白鹤在鄱阳湖主要以沉水植物苦草（Vallisneriaspp．）冬芽为食。课题组前期研究表明，近年来鄱阳湖苦草冬芽锐减导致白鹤的食物组成发生了变化，稻谷（Or... 详细信息

鄱阳湖是IUCN极危鸟类白鹤（Leucogeranus leucogeranus）极为重要的越冬地。以前白鹤在鄱阳湖主要以沉水植物苦草（Vallisneriaspp．）冬芽为食。课题组前期研究表明，近年来鄱阳湖苦草冬芽锐减导致白鹤的食物组成发生了变化，稻谷（Oryza sativa）、莲藕（Nelumbo nucifera）、蓼子草（Persicaria criopolitana）等已成为白鹤的主要食物。由于鄱阳湖食物资源丰富度存在较大的年内波动，白鹤的食物组成也可能随之变化，目前对于白鹤的食物组成随越冬期的变化情况尚不清楚。为此，基于2020/2021和2021/2022年越冬季采集的45份白鹤粪便样品，采用DNA宏条形码方法，对越冬期不同阶段白鹤的食物组成进行了分析，并对白鹤的生境利用情况进行了调查。结果表明，越冬期不同阶段白鹤的食物组成存在较大差异，在越冬前期（10月—11月），白鹤主要以莲藕（（47.93±45.15）%SD）和蓼属（Persicaria;(47.63±43.43)%）为食；在越冬中期（12月—翌年1月），白鹤主要以蓼属（（49.22±33.83）%）、莲藕（（26.20±32.58）%）和水稻（（19.08±35.18）%）为食；在越冬后期（翌年2月—3月），白鹤主要以蓼子草（（23.94±16.75）%）、水稻（（20.82±17.09）%）、莲藕（（19.08±37.42）%）和禾本科（（13.07±15.18）%）为食。NMDS和ANOSIM分析结果表明越冬期不同阶段的食物组成存在显著差异。白鹤的食性生态位宽度在越冬后期最宽（4.72±0.78），在越冬前期最窄（1.18±0.04）。白鹤食物组成的变化与生境利用的变化趋势基本一致。白鹤在越冬前期主要利用藕塘，在越冬中期主要利用稻田和藕塘，在越冬后期对自然湿地的利用程度增加。越冬期不同阶段食物资源丰富度的变化可能导致了白鹤食物组成的变化。本研究有助于深入解析白鹤的食物组成及其影响因素，为白鹤保护政策的制定提供科学依据。

关键词：白鹤 DNA宏条形码农业用地鄱阳湖食性