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非洲爪蟾卵母细胞表达系统中N-型电压门控钙离子通道新药筛选模型的建立与优化

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药学学报 2024年第7期 2002-2011页

作者：秦源崔城朱晓鹏长孙东亭于津鹏罗素兰广西大学医学院广西特色生物医药重点实验室

N-型电压门控钙离子(Ca2+)通道（N-type voltage-gated calcium channel, N-type VGCC, CaV2.2）在突触前末端响应动作电位介导Ca2+内流,并在突触发生、神经递质释放和伤害性信号传递中发挥重要作用,是神经痛（慢性痛）等重大疾病治疗... 详细信息

N-型电压门控钙离子(Ca2+)通道（N-type voltage-gated calcium channel, N-type VGCC, CaV2.2）在突触前末端响应动作电位介导Ca2+内流,并在突触发生、神经递质释放和伤害性信号传递中发挥重要作用,是神经痛（慢性痛）等重大疾病治疗药物研发的关键靶点。由于钙离子通道体外表达困难,通道电流检测技术复杂,其新药筛选模型极其缺乏。因此,本研究利用非洲爪蟾卵母细胞表达系统,进行CaV2.2体外重组表达,建立电生理学技术药物筛选模型,并对该表达技术体系进行了优化（本研究获得广西大学伦理委员会审查批准,批准号:GXU-2023-0249）。首先,以大鼠CaV2.2的主亚基α1B及其辅助亚基α2δ1和β3的cDNA基因为模板,分别在体外进行转录,人工合成了CaV2.2 3个亚基的mRNA （cRNA）,按照2∶1∶1的质量比混合,将3种cRNA注射到非洲爪蟾卵母细胞中进行表达。随后使用双电极电压钳技术检测CaV2.2离子通道是否产生细胞膜内向电流,同时对各个表达条件进行了优化,从通道的激活、失活等方面表征了其门控功能。结果显示,在cRNA显微注射后的第3～5天,使用四乙基氢氧化铵（TEAOH）和1,2-双（2-氨基苯氧基）乙烷-N,N,N',N'-四乙酸四酯（BAPTA-AM）处理,可分别消除内源性钾离子通道和Ca2+激活的氯离子通道干扰,成功检测到稳定的CaV2.2介导的钡离子电流。CaV2.2的最大激活膜电位为0 mV,当膜电位大于+50 mV时会出现电流方向反转。通过拟合稳态激活和失活曲线获知CaV2.2的半激活电位和半失活电位分别为-15.9和-60.2 mV。本研究基于非洲爪蟾卵母细胞,通过条件优化,建立了稳定的CaV2.2表达系统。该体外表达系统可以为靶向CaV2.2活性化合物或先导药物的筛选提供新的途径。

关键词：电压门控钙离子通道双电极电压钳非洲爪蟾卵母细胞电生理门控特性

秋水仙碱通过激活AMPK减轻小鼠心肌缺血再灌注损伤

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南方医科大学学报 2024年第2期44卷 226-235页

作者：陈国栋罗素新重庆医科大学附属第一医院心血管内科重庆400016

目的探究秋水仙碱(CCC)对心肌缺血再灌注损伤(I/R)的影响与相关机制。方法采用缺氧复氧(H/R)的方式在H9C2细胞上模拟缺血再灌注损伤,使用3 nmol/L秋水仙碱对行H/R处理的细胞进行干预;采用手术的方式在雄性C57/BL6小鼠上建立心肌缺血再... 详细信息

目的探究秋水仙碱(CCC)对心肌缺血再灌注损伤(I/R)的影响与相关机制。方法采用缺氧复氧(H/R)的方式在H9C2细胞上模拟缺血再灌注损伤,使用3 nmol/L秋水仙碱对行H/R处理的细胞进行干预;采用手术的方式在雄性C57/BL6小鼠上建立心肌缺血再灌注模型,将32只小鼠随机分为:假手术(SO)组,I/R组、I/R+CCC组和I/R+CCC+Dorsomorphin(DSMP)组,每组8只。使用CCK-8检测细胞活力,使用Western blot检测AMPK及其磷酸化水平、氧化应激指标(NOX4、NRF2、SOD2)和凋亡指标(BAX、Bcl-2、cleaved caspase-3),使用商用试剂盒检测心肌组织ATP含量,使用免疫荧光染色检测心肌组织8-OHdG和cleaved caspase-3阳性率,分离心肌线粒体和胞浆后分别检测线粒体BAX(Mito-BAX)和胞浆细胞色素C(Cyt-Cyto C),使用心脏超声评估心脏功能,使用2,3,5-氯化三苯基四氮唑(TTC)溶液染色评估梗死面积,使用商用试剂盒检测血清乳酸脱氢酶(LDH)和心肌肌钙蛋白T(cTnT)含量,为明确AMPK在其中的作用,使用DSMP抑制小鼠体内AMPK活性。结果体外实验中,H/R可以导致AMPK磷酸化水平、NRF2、SOD2和Bcl-2表达水平和细胞活力显著降低(P<0.05),并提高NOX4、BAX、cleaved caspase-3表达水平(P<0.05);秋水仙碱处理可以减轻H/R的损伤效应(P<0.05)。体内实验中,与SO组相比,I/R组AMPK磷酸化水平、ATP含量、NRF2、SOD2和Bcl-2表达水平、心脏功能均显著降低(P<0.05),NOX4、Mito-BAX、Cyt-Cyto C、BAX、cleaved caspase-3表达水平,心肌切片8-OHdG和cleaved caspase-3阳性染色率,心肌梗死面积,血清LDH和cTnT含量显著升高(P<0.05),秋水仙碱治疗可以逆转I/R带来的损伤效应(P<0.05),但DSMP可以抵消秋水仙碱的保护作用(P<0.05)。结论秋水仙碱可以通过激活AMPK减轻氧化应激和凋亡来减轻小鼠心肌缺血再灌注损伤,保护心功能。

关键词：秋水仙碱心肌缺血再灌注损伤 AMPK 氧化应激凋亡

α7烟碱型乙酰胆碱受体分子伴侣Tmem35a的克隆及其功能研究

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药学学报 2024年第7期 1993-2001页

作者：王紫涵于津鹏长孙东亭朱晓鹏罗素兰广西大学医学院广西特色生物医药重点实验室

烟碱型乙酰胆碱受体（nicotinic acetylcholine receptors, nAChRs）属于配体门控离子通道受体,其中α7nAChR亚型广泛分布于大脑皮层、丘脑和海马体等区域。此外,在小胶质细胞、巨噬细胞、骨髓细胞等也有分布,研究发现其与胆碱能抗炎通... 详细信息

烟碱型乙酰胆碱受体（nicotinic acetylcholine receptors, nAChRs）属于配体门控离子通道受体,其中α7nAChR亚型广泛分布于大脑皮层、丘脑和海马体等区域。此外,在小胶质细胞、巨噬细胞、骨髓细胞等也有分布,研究发现其与胆碱能抗炎通路的功能密切相关,是阿尔茨海默症和精神分裂症药物开发的重要靶标。建立稳定的体外药物筛选体系,对于靶向α7 nAChR新药的高效筛选至关重要。在非洲爪蟾卵母细胞膜上,重组表达nAChRs的不同亚型,并通过电生理技术进行电流检测,是一种先进而复杂的新药筛选模型。分子伴侣可以协助部分nAChRs亚基组装形成功能性受体,为靶向该受体的化合物筛选提供稳定表达的模型。为此,本研究从大鼠体内分离克隆了α7 nAChR的一个分子伴侣基因,其名称为Tmem35a （transmembrane protein 35A）,进一步构建了该基因的重组表达载体,再利用体外转录技术获得了该基因的cRNA,将之与α7 nAChR的cRNA混合后同时注射到非洲爪蟾卵母细胞中进行表达。然后,利用双电极电压钳检测该分子伴侣对α7 nAChR电流表达和通道药理活性的影响。结果显示,TMEM35A （也被称为novel acetylcholine receptor chaperone, NACHO）可有效提高α7 nAChR蛋白在卵母细胞膜上的表达,受体蛋白表达量提高了约1倍;其配体乙酰胆碱（acetylcholine, ACh）刺激诱发的峰值电流提高了约10倍。注入Tmem35a cRNA后的卵母细胞,其表达的α7 nAChR对激动剂ACh的半数效应浓度为228.5μmol·L-1,和本体223.3μmol·L-1基本一致,维持了α7受体正常功能特性。研究结果表明,分子伴侣NACHO有效协助了α7 nAChR在非洲爪蟾卵母细胞的异源表达,稳定表达的α7 nAChR可以为靶向该受体的先导化合物活性筛选提供模型。本研究所有动物实验过程经广西大学伦理委员会审查批准（批准号:GXU-2023-0249）。

关键词： α7烟碱型乙酰胆碱受体分子伴侣NACHO 基因克隆双电极电压钳药物筛选模型

论“受过行政处罚”单独作为入罪定量因素的正当性及其限制

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湖南社会科学 2024年第1期 120-127页

作者：赖早兴罗素敏对外经济贸易大学法学院

“受过行政处罚”单独作为入罪定量因素已成为“受过行政处罚”影响犯罪成立的主要方式之一。相较于与数额等其他因素共同作为入罪定量因素，“受过行政处罚”单独作为入罪定量因素更难得到刑法理论上的认同，论证其在犯罪理论体系上的... 详细信息

“受过行政处罚”单独作为入罪定量因素已成为“受过行政处罚”影响犯罪成立的主要方式之一。相较于与数额等其他因素共同作为入罪定量因素，“受过行政处罚”单独作为入罪定量因素更难得到刑法理论上的认同，论证其在犯罪理论体系上的正当性对其合理存续与发展至为重要。从规范类型的形成与发展过程来看，“受过行政处罚”单独作为入罪定量因素这一入罪类型所涉罪名基本为法定犯，主要规制对集体法益造成潜在风险的行为，是规范制定者为应对风险社会而采取的一种新的犯罪构造设置尝试。其与以真实的累积侵害效应为归责基础、旨在管控巨型风险的累积犯理论在很大程度上存在契合。阶层犯罪论体系下，结合累积犯理论，单独作为入罪定量因素的“受过行政处罚”与某一个人的人身危险性关联并不大，更宜被视为一种行为风险衡量标准。其意味着当确定相关累积危险行为所形成的风险已不能为行政性手段所管控，便应以刑法规制之。故“受过行政处罚”是对行为客观不法程度的征表，当属构成要件要素。累积犯视域之下，“受过行政处罚”单独作为入罪定量因素应只能适用于保护适格集体法益的罪名，只能规制普遍发生且可能造成累积性侵害的行为，且应具备明确的时间与次数限制。

关键词：受过行政处罚入罪定量因素集体法益累积犯累积危险行为

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论逃税行为“不予追究刑事责任”的前置条件

中国人民公安大学学报（社会科学版） 2024年第1期40卷 45-53页

作者：赖早兴罗素敏对外经济贸易大学北京100029

《刑法》第201条第4款规定“补缴应纳税款,缴纳滞纳金,已受行政处罚的”这一前置条件实现对逃税行为人“不予追究刑事责任”。“已受行政处罚”要求客观上完成罚款的缴纳,但不妨碍行为人行使提起行政复议或行政诉讼的权利,也与行为人内... 详细信息

《刑法》第201条第4款规定“补缴应纳税款,缴纳滞纳金,已受行政处罚的”这一前置条件实现对逃税行为人“不予追究刑事责任”。“已受行政处罚”要求客观上完成罚款的缴纳,但不妨碍行为人行使提起行政复议或行政诉讼的权利,也与行为人内心是否主动悔罪无关。逃税罪立法中该前置条件的限制适用情形与禁止重复评价原则并不冲突,其中规定的“五年内”的起算时间点应考虑所受处罚的种类及其具体执行情况。这一前置条件以行政处置手段影响对逃税行为法益侵害的终局评价,故在逃税案初犯处理过程中,行政处理程序应前置于刑事追诉程序。

关键词：逃税罪不予追究刑事责任行政处理前置

基于2D+t势流方法的滑行艇静水姿态预报研究

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华中科技大学学报（自然科学版） 2024年第4期52卷 71-75页

作者：邵文勃马山张益凡哈尔滨工程大学船舶工程学院黑龙江哈尔滨150001

为了预报滑行艇在静水中的运动姿态及垂向力分布情况,采用2D+t势流方法,将滑行艇直航问题转化为二维剖面入水砰击问题,建立滑行艇静水运动姿态的时域预报模型.对滑行艇剖面入水砰击载荷采用MLM(改进Logvinovich模型)砰击模型进行计算,... 详细信息

为了预报滑行艇在静水中的运动姿态及垂向力分布情况,采用2D+t势流方法,将滑行艇直航问题转化为二维剖面入水砰击问题,建立滑行艇静水运动姿态的时域预报模型.对滑行艇剖面入水砰击载荷采用MLM(改进Logvinovich模型)砰击模型进行计算,并针对2D+t理论对滑行艇静压力及首尾部水动力三维效应预报的不足之处进行了改进.针对滑行艇约束模,改进2D+t方法得到的垂向力沿船长方向分布情况能够与三维黏流CFD(计算流体力学)结果符合较好;针对自由模,改进2D+t方法得到的运动姿态能够与模型试验结果符合较好,证明了改进2D+t方法对滑行艇在静水中的水动力问题具有较好的预报精度.

关键词：滑行艇 2D+t方法 MLM砰击模型静水姿态势流理论

氧化石墨烯改性纤维增强水泥基材料的拉伸性能

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建筑材料学报 2024年第5期27卷 400-407页

作者：罗素蓉姚佳敏周恩泉王世杰福州大学土木工程学院福建福州350116 福建省建筑设计研究院有限公司福建福州350001

为了提高聚乙烯醇(PVA)纤维增强水泥基材料的力学性能,将氧化石墨烯(GO)引入PVA纤维增强水泥基材料中,探究GO掺量在0%~0.05%范围内对材料单轴拉伸性能的影响.结果表明:掺入适量的GO能够有效提高材料的单轴拉伸性能,当GO掺量为0.01%时,2... 详细信息

为了提高聚乙烯醇(PVA)纤维增强水泥基材料的力学性能,将氧化石墨烯(GO)引入PVA纤维增强水泥基材料中,探究GO掺量在0%~0.05%范围内对材料单轴拉伸性能的影响.结果表明:掺入适量的GO能够有效提高材料的单轴拉伸性能,当GO掺量为0.01%时,28 d时材料的初裂拉伸强度、极限拉伸强度和极限拉伸应变均达到最大值,与未掺GO的对照组相比分别提高了26.97%、31.28%、23.25%;适量的GO可以优化孔隙结构,减少材料内部缺陷,促进水化产物的生成,使微观结构致密化,增强纤维和基体间的界面结合力,从而改善PVA纤维增强水泥基材料的宏观性能.

关键词：氧化石墨烯水泥基材料单轴拉伸性能微观性能聚乙烯醇(PVA)纤维

航空发动机电感电容式复合滑油磨粒传感器结构优化

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仪表技术与传感器 2024年第6期 8-12+25页

作者：何永勃杨树中国民航大学电子信息与自动化学院

异常磨损产生的大磨粒蕴含航空发动机的健康状态信息。为了克服单一电感式或电容式传感器对磨粒种类区分的局限，提出了一种以三线圈电感与管道内置叉指式电容为基础的复合传感器。传感器通过分割灵敏场，利用差分结构，提高测量灵敏度... 详细信息

异常磨损产生的大磨粒蕴含航空发动机的健康状态信息。为了克服单一电感式或电容式传感器对磨粒种类区分的局限，提出了一种以三线圈电感与管道内置叉指式电容为基础的复合传感器。传感器通过分割灵敏场，利用差分结构，提高测量灵敏度和抗干扰能力。基于多物理场仿真软件，运用控制变量法对传感器结构参数进行优化设计。通过对输出特性分析表明：在内方外圆的管道中(内边长6 mm,外径10 mm),传感器可检测60μm铁磁性金属磨粒、222μm非铁磁性金属磨粒和268μm非金属磨粒，并能有效区分滑油磨粒大小和材质。

关键词：滑油磨粒种类区分复合传感器多物理场仿真控制变量法

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爱国主义教育的法治保障

中国高等教育 2024年第2期 41-44页

作者：李红勃中国政法大学教育法研究中心

在全面依法治国的新时代,爱国主义教育需要在法治的轨道上运行。《中华人民共和国爱国主义教育法》明确了爱国主义教育的主要内涵,构建了分工协作的工作格局,规定了主要的实施措施,提供了支持和保障机制,为推进爱国主义教育的规范化、... 详细信息

在全面依法治国的新时代,爱国主义教育需要在法治的轨道上运行。《中华人民共和国爱国主义教育法》明确了爱国主义教育的主要内涵,构建了分工协作的工作格局,规定了主要的实施措施,提供了支持和保障机制,为推进爱国主义教育的规范化、高质量发展提供了有力的制度保障。

关键词：爱国主义教育《中华人民共和国爱国主义教育法》爱国主义教育基地