检索结果-南通市图书馆

圈养狐貉源犬瘟热病毒地方分离株H基因的遗传变异分析

同方学位论文库评论

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

兽类学报 2008年第2期28卷 217-220页

作者：曾祥伟刘澜澜华育平东北林业大学野生动物资源学院哈尔滨150040

本研究于2004～2006年从人工饲养的发病狐貉中分离到6个CDV分离株，用RT—PCR方法扩增了其H蛋白基因片段，并对其进行了克隆和测序。测序结果表明，6个CDV分离株H基因阅读框全长均为1824bp，编码607个氨基酸，未发现碱基的插入和缺失。... 详细信息

本研究于2004～2006年从人工饲养的发病狐貉中分离到6个CDV分离株，用RT—PCR方法扩增了其H蛋白基因片段，并对其进行了克隆和测序。测序结果表明，6个CDV分离株H基因阅读框全长均为1824bp，编码607个氨基酸，未发现碱基的插入和缺失。与Genbank中的34株CDV参考毒株的H基因序列进行比较和分析，现有的CDV毒株可以分为Asia-1、Asia-2、America-1、America-2、Europe和Arctic6个基因型，本实验中的分离株HL为Arctic基因型，与来自意大利的194／97株、丹麦的Green株同分在一组，其余5株分离株与来自日本的HAMA、UENO、Tanu96等毒株以及来自中国的TN株、GP株（大熊猫株）分在一组同属Asia-1型，表现出一定的地理位置相关性；6个分离株均与Onderstepoor、Convac等疫苗株差异较大、关系较远，提示病毒变异可能是造成目前已免疫动物仍然发生犬瘟热流行的原因之一。

关键词：犬瘟热病毒血凝素蛋白基因遗传变异

3种受体抑制剂对鸡传染性支气管炎病毒感染鸡胚肾细胞的影响

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

畜牧兽医学报 2011年第5期42卷 704-710页

作者：尹鑫张颖刘澜澜魏萍东北农业大学动物医学学院哈尔滨150030

本研究旨在阐明鸡氨肽酶N(chAPN)、唾液酸以及硫酸乙酰肝素在传染性支气管炎病毒(IBV)M41株感染宿主细胞中的作用以及3种受体特异抑制剂对IBV M41株在自然宿主CEK细胞内增殖能力的影响。作者选择苯丁抑制素(Bestatin)、神经氨酸酶(NA)... 详细信息

本研究旨在阐明鸡氨肽酶N(chAPN)、唾液酸以及硫酸乙酰肝素在传染性支气管炎病毒(IBV)M41株感染宿主细胞中的作用以及3种受体特异抑制剂对IBV M41株在自然宿主CEK细胞内增殖能力的影响。作者选择苯丁抑制素(Bestatin)、神经氨酸酶(NA)和肝素酶Ⅲ分别作为APN、唾液酸以及硫酸乙酰肝素的抑制剂,在不同条件下,单独或共同预处理CEK细胞,而后接入IBV M41株病毒感染细胞,应用荧光定量PCR方法定量检测IBVM41株在CEK细胞中的增殖变化,应用鸡胚半数感染剂量法(EID50)测定病毒感染鸡胚能力的变化。结果表明,经Bestatin和NA处理的CEK细胞获得了抵抗IBV M41株感染的能力,与未经处理的(对照组)细胞相比,Besta-tin和NA能显著降低IBV M41株在CEK细胞内的增殖及对鸡胚的感染能力(P<0.01),且Bestatin处理后CEK细胞内的病毒增殖量显著低于NA处理后CEK细胞内的病毒增殖量,两者病毒液的EID50滴定值差异显著(P<0.01);肝素酶Ⅲ的处理则对病毒增殖无显著影响;3种受体抑制剂共同处理CEK细胞后,病毒增殖量显著下降(P<0.01),但仍有病毒增殖,病毒液的EID50滴定值为102.12±0.***.0.1mL-1。结果提示,chAPN在IBV感染宿主细胞的过程中发挥特异性受体作用,而唾液酸在IBV感染宿主细胞中发挥辅助受体作用,硫酸乙酰肝素不是IBV在自然感染中的必需因素,同时提示,可能存在其他未知受体因子参与IBV感染宿主细胞的过程。

关键词： IBV Bestatin 神经氨酸酶肝素酶Ⅲ 受体

腺胃型鸡传染性支气管炎病毒的初步分离与鉴定

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

黑龙江畜牧兽医 2010年第4期 122-124页

作者：刘澜澜张颖尹鑫曾祥伟魏萍东北农业大学动物医学学院黑龙江哈尔滨150030 东北林业大学野生动物资源学院黑龙江哈尔滨150040

为了获得更多的腺胃型鸡传染性支气管炎病毒分离株并研究其生物学特性,试验从黑龙江省某鸡场发生的以腺胃肿大为特征的病死鸡中分离到1株具有冠状病毒特性的病毒,通过鸡胚传代、血凝性测定、电镜观察、RT-PCR检测和动物回归试验对其进... 详细信息

为了获得更多的腺胃型鸡传染性支气管炎病毒分离株并研究其生物学特性,试验从黑龙江省某鸡场发生的以腺胃肿大为特征的病死鸡中分离到1株具有冠状病毒特性的病毒,通过鸡胚传代、血凝性测定、电镜观察、RT-PCR检测和动物回归试验对其进行了初步鉴定。结果表明:该病毒分离株在SPF鸡胚上传至第5代开始出现死亡或典型的侏儒胚;病毒不能直接凝集鸡红细胞,经1%胰酶处理后表现出血凝活性,血凝效价达28;透射电镜下可见有囊膜和纤突,直径为80～120nm的病毒粒子,具有冠状病毒的典型形态特点;分离株病毒第5代尿囊液经N基因特异性RT-PCR获得大小约438bp的目的片段;分离株病毒第5代尿囊液接种于14日龄SPF雏鸡,复制出与临床中相似的病理变化,同时从肿大的腺胃中能重新分离到该病毒。初步确定所分离病毒为腺胃型鸡传染性支气管炎病毒。

关键词：鸡传染性支气管炎病毒腺胃型分离与鉴定

鸡氨肽酶N基因转染BHK-21细胞后IBV感染情况的改变

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

中国兽医学报 2010年第6期30卷 793-797,861页

作者：明晓波张颖刘澜澜魏萍东北农业大学动物医学院黑龙江哈尔滨150030

构建了带绿色荧光蛋白基因及鸡氨肽酶N全长基因的真核表达重组载体,重组载体转染BHK-21细胞后12h开始可见绿色荧光,36h荧光最强,试验中转染24h后感染IBV鸡胚肾细胞适应毒,72h收获病毒接下一次转染的BHK-21细胞,如此在转染细胞上连续传5... 详细信息

构建了带绿色荧光蛋白基因及鸡氨肽酶N全长基因的真核表达重组载体,重组载体转染BHK-21细胞后12h开始可见绿色荧光,36h荧光最强,试验中转染24h后感染IBV鸡胚肾细胞适应毒,72h收获病毒接下一次转染的BHK-21细胞,如此在转染细胞上连续传5代,用间接免疫荧光检测各代次病毒感染转染BHK-21细胞,可见随着代次增加,感染程度增加;病毒毒力EID50逐渐增加,第5代时原病毒毒力基本恢复,半定量RT-PCR检测各代次病毒也可见病毒含量逐渐增加。结果表明,鸡氨肽酶N转染至IBV非易感的BHK-21细胞系后,BHK-21细胞变得对IBV敏感,鸡氨肽酶N可能用作IBV感染的细胞受体。

关键词：氨肽酶N 基因克隆真核转染 RT-PCR 间接免疫荧光绿色荧光蛋白红色荧光标记二抗 BHK-21

狐貉源犬瘟热病毒核蛋白基因的克隆及序列比较分析

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

东北林业大学学报 2007年第9期35卷 61-63页

作者：刘澜澜华育平曾祥伟张莉东北林业大学哈尔滨150040 东北林业大学野生动物资源学院

参照已发表的犬瘟热病毒(CDV)核蛋白基因(N)序列设计合成了1对引物,用RT-PCR方法对从发病狐、貉中分离的MS01、SC01、ZD01三株CDV的N基因进行扩增,并分别将其PCR产物进行克隆和测序。测序结果表明:3病毒分离株N基因阅读框架全长均为1572... 详细信息

参照已发表的犬瘟热病毒(CDV)核蛋白基因(N)序列设计合成了1对引物,用RT-PCR方法对从发病狐、貉中分离的MS01、SC01、ZD01三株CDV的N基因进行扩增,并分别将其PCR产物进行克隆和测序。测序结果表明:3病毒分离株N基因阅读框架全长均为1572bp,编码523个氨基酸。利用DNAstar的MegAlign生物软件,将3病毒分离株与Genbank数据库中现有的CDV毒株的N基因序列及推导出的氨基酸序列进行了同源性比较和系统进化树分析,结果发现:3病毒分离株与强毒参考株A75/17等野毒株高度同源,核苷酸同源为96.2%～99.1%,氨基酸同源为96.0%～99.8%,而与疫苗株Onderstepoor相对较远,核苷酸同源为93.6%～94.0%。N基因的系统进化关系分析显示:3病毒分离株均归为强毒株,并且与中国新疆的TN株、中国台湾的Kaohsiung株基因型最近,表现出一定的地理位置相关性。

关键词：犬瘟热病毒核蛋白基因序列分析

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

狐貉源犬瘟热病毒融合蛋白基因的同源性分析

东北林业大学学报 2008年第3期36卷 70-72,77页

作者：张莉华育平曾祥伟刘澜澜东北林业大学哈尔滨150040

2004—2006年,从黑龙江省和内蒙等地发病饲养狐、貉中分离获得6株犬瘟热病毒(CDV),分别命名为MS01、SC01、ZD01、GN01、HL01、NM01分离株。根据Genbank上发表的的CDV F基因序列设计了1对特异性引物,应用RT-PCR方法分别对6个分离株F基因... 详细信息

2004—2006年,从黑龙江省和内蒙等地发病饲养狐、貉中分离获得6株犬瘟热病毒(CDV),分别命名为MS01、SC01、ZD01、GN01、HL01、NM01分离株。根据Genbank上发表的的CDV F基因序列设计了1对特异性引物,应用RT-PCR方法分别对6个分离株F基因进行克隆、测序,并推导其氨基酸序列,绘制出F基因的遗传进化树。结果表明:6个CDV分离株F基因的开放阅读框架(ORF)均为1 989 bp,编码663个氨基酸,蛋白结构中的13个Cys残基位点和4个潜在的糖基化位点均高度保守,其裂解位点的氨基酸序列为220R-R-Q-R-224R。遗传进化分析表明:6个分离株与CDV代表强毒株A75/17属于同一谱系,均为强毒株。其中,HL01株与海豹瘟热病毒2型(PDV-2)亲缘关系较近,与其它5个分离株关系相对较远。

关键词：犬瘟热病毒 F基因基因克隆同源性分析

近年来黑龙江省毛皮动物犬瘟热的流行特点分析

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

黑龙江畜牧兽医 2010年第4期 126-127页

作者：韩丹丹曾祥伟刘澜澜华育平黑龙江民族职业学院黑龙江哈尔滨150081 东北林业大学野生动物资源学院黑龙江哈尔滨150040 东北农业大学动物医学学院黑龙江哈尔滨150030

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

河北:强化旅游景区餐饮服务食品安全监管

中国食品 2018年第10期 52-53页

作者：刘澜澜

记者从河北省食品药品监督管理局获悉,日前省食品药品监督管理局、省旅游发展委员会联合发布了《关于进一步加强旅游旺季景区餐饮服务食品安全监管工作的通知》（以下简称《通知》）,进一步加强对河北省旅游景区食品安全监管力度。

关键词：食品安全监管旅游景区餐饮服务河北省食品药品监督管理局强化安全监管工作旅游发展

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

绿头鸭IFN-α的可溶性表达及其活性分析

生物技术通报 2014年第11期30卷 142-146页

作者：刘澜澜庄艳娜于晓红曾祥伟黑龙江中医药大学基础医学院哈尔滨150040 东北林业大学野生动物资源学院哈尔滨150040

为了利用原核表达系统研制有生物活性的鸭IFN-α。以pMD18T-Ma IFN-α为模板扩增绿头鸭IFN-α成熟肽基因,将其克隆至原核表达载体pET-32 a中,在大肠杆菌BL21中进行变温诱导表达。SDS-PAGE分析表达结果,并用Western blotting进行验证。N... 详细信息

为了利用原核表达系统研制有生物活性的鸭IFN-α。以pMD18T-Ma IFN-α为模板扩增绿头鸭IFN-α成熟肽基因,将其克隆至原核表达载体pET-32 a中,在大肠杆菌BL21中进行变温诱导表达。SDS-PAGE分析表达结果,并用Western blotting进行验证。Ni2+树脂柱纯化目的蛋白后,测定其生物活性。结果表明,重组pET-32a(+)-Ma IFN-α在大肠杆菌BL21成功表达,主要以可溶性形式存在,Western blotting分析显示目的蛋白具有良好的抗原性。细胞病变抑制法测定重组鸭IFN-α的抗病毒活性约为8×104U/m L;荧光定量PCR方法检测显示表达的重组鸭IFN-α使NDV在DEF上的复制受到了明显的抑制,48 h时间点相对抑制率高达91%。这些都表明表达的重组鸭IFN-α具有良好抗病毒活性。

关键词：绿头鸭 IFN-α 可溶性表达活性分析