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Effects of Ti-based additives on Mg_2FeH_6 dehydrogenation properties

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Transactions of Nonferrous Metals Society of China 2016年第3期26卷 791-798页

作者：徐晨晨肖学章邵杰刘朗夏秦腾陈立新浙江大学材料科学与工程学院硅材料国家重点实验室浙江省电池新材料与应用技术研究重点实验室杭州310027

Mg2FeH6 doped with and without Ti and its alloys (TiMn2, TiAl) were prepared combing ball milling and heat treatment. The effects of these additives on the dehydrogenation performance of Mg2FeH6 were studied systematically. The results show that all additives have favor influence on improving the hydrogen desorption property of Mg2FeH6. Especially, TiMn2 exhibits prominent effect on enhancing the dehydrogenation kinetics of Mg2FeH6. Moreover, the activation energy of TiMn2-doped Mg2FeH6 calculated by Kissinger equation is 94.87 kJ/mol, which is 28 kJ/mol lower than that of the undoped Mg2FeH6. The cycling tests suggest that the improved dehydrogenation kinetics of Mg2FeH6 doped by TiMn2 can maintain in the second cycle.

关键词： Mg_2FeH_6 Ti-based additives dehydrogenation properties kinetics

GSK3β及其显性负突变体的原核表达与纯化

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南京医科大学学报（自然科学版） 2011年第11期31卷 1556-1560,1565页

作者：王建瑛高玲梅刘小会高学娟刘朗夏暨南大学生命科学技术学院/生命与健康工程研究院广东广州510632

目的:构建原核表达GST-GSK3β1、GST-GSK3β2及其显性负突变体(dominant-negative mutant)GST-GSK3β1 K85M的重组质粒,并进行融合蛋白的表达、纯化及鉴定。方法:利用PCR扩增和基因重组技术,以含有人源目的片段的质粒Flag-GSK3β1、YFP-... 详细信息

目的:构建原核表达GST-GSK3β1、GST-GSK3β2及其显性负突变体(dominant-negative mutant)GST-GSK3β1 K85M的重组质粒,并进行融合蛋白的表达、纯化及鉴定。方法:利用PCR扩增和基因重组技术,以含有人源目的片段的质粒Flag-GSK3β1、YFP-GSK3β2及Flag-GSK3β1 K85M为模板,扩增出相应的目的基因片段,并将其插入具有GST标签的原核表达载体pGEX-6P-1中,构建GST融合蛋白表达质粒。通过对GST-GSK3β1、GST-GSK3β2和GST-GSK3β1 K85M融合蛋白进行诱导表达、温和法裂解以及纯化实验,确立有效的表达和纯化方法。最后应用Western blot方法鉴定纯化的融合蛋白。结果:成功构建GST-GSK3β及其显性负突变体质粒,并通过诱导表达和纯化得到目的蛋白。结论:GST-GSK3β1、GST-GSK3β2及GST-GSK3β1K85M显性负突变体质粒的成功构建及目的蛋白的表达与纯化,为更深入地研究GSK3β蛋白的生物学功能奠定基础。

关键词： GST-GSK3β GST-GSK3β1K85M 融合蛋白表达纯化

Raf-1蛋白突变体的原核表达、纯化及活性鉴定

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实用医学杂志 2012年第10期28卷 1599-1602页

作者：刘小会高学娟刘朗夏暨南大学生命与健康工程研究院广州市510632

目的:将Raf-1蛋白259位丝氨酸(Ser,S)突变成天冬氨酸(Asp,D),构建突变型GST-Raf-1220-268S259D原核表达载体,表达和纯化融合蛋白及鉴定其生物学活性。方法:以pGEX-4T-1-Raf-1220-268为模板,运用PCR定点突变技术扩增出Raf-1220-268S259D基因序列,插入原核表达载体pGEX-6P-1,表达和纯化重组蛋白,GST沉降实验鉴定蛋白的生物学活性。结果:重组质粒测序结果正确,获得模拟磷酸化GST-Raf-1220-268蛋白。GST沉降实验检测到目的蛋白和14-3-3蛋白具有体外特异性结合活性。结论:成功构建GST-Raf-1220-268S259D原核表达载体,并表达及纯化了有生物学活性的融合蛋白,为进一步针对Raf-1的研究提供实验依据。

关键词： Raf-1蛋白突变体原核表达纯化

刚地弓形虫His-TgPP2C融合蛋白的表达与纯化

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广东医学 2012年第2期33卷 177-179页

作者：朱森高学娟刘小会陈妙娟刘丽杰刘朗夏暨南大学生命与健康工程研究院广州510632

目的构建His-TgPP2C重组质粒,在大肠杆菌*** BL21(DE3)中进行融合蛋白的表达、纯化及鉴定。方法利用PCR扩增及基因重组技术,以pcDNA3-TgPP2C为模板,扩增出全长的TgPP2C基因,将所得的PCR产物插入带有His标签的原核表达载体pBAD-His中,得... 详细信息

目的构建His-TgPP2C重组质粒,在大肠杆菌*** BL21(DE3)中进行融合蛋白的表达、纯化及鉴定。方法利用PCR扩增及基因重组技术,以pcDNA3-TgPP2C为模板,扩增出全长的TgPP2C基因,将所得的PCR产物插入带有His标签的原核表达载体pBAD-His中,得到重组质粒。经XhoⅠ、HindⅢ双酶切及测序鉴定正确后,转化至大肠杆菌*** BL21,通过异丙基-β-硫代半乳糖苷诱导表达His-TgPP2C融合蛋白,最后经Ni-NTA柱亲和层析纯化融合蛋白以及Western blot方法鉴定纯化的融合蛋白。结果得到构建好的His-PP2C质粒及纯化的目的融合蛋白His-TgPP2C。结论成功构建pBAD-His-TgPP2C原核表达载体,表达及纯化了His-PP2C融合蛋白,为深入研究TgPP2C蛋白在刚地弓形虫疾病发生发展过程中的作用奠定基础。

关键词： His-PP2C 融合蛋白表达纯化刚地弓形虫

FlightlessⅠ与核质转运蛋白Importin β及核孔蛋白Nup88的相互作用

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生物工程学报 2015年第8期31卷 1247-1254页

作者：廖声友王翠华汤冬娥魏金梅贺玉娇熊海庭徐凤梅高学娟刘小会刘朗夏广东省高校功能蛋白质研究重点实验室暨南大学生命与健康工程研究院广东广州510632

Fightless I(FLII)是一个在肿瘤中高表达的蛋白,前期研究提示FLII可能参与核质转运过程,为鉴定FLII是否与核膜结合蛋白相互作用,构建GST-FLII、GST-LRR融合蛋白重组质粒并转化至大肠杆菌Rosetta进行诱导表达,使用GST琼脂糖珠进行融合蛋... 详细信息

Fightless I(FLII)是一个在肿瘤中高表达的蛋白,前期研究提示FLII可能参与核质转运过程,为鉴定FLII是否与核膜结合蛋白相互作用,构建GST-FLII、GST-LRR融合蛋白重组质粒并转化至大肠杆菌Rosetta进行诱导表达,使用GST琼脂糖珠进行融合蛋白的纯化。通过SDS-PAGE对纯化蛋白进行验证之后,利用GST-pull down及免疫共沉淀技术证明了FLII与Importinβ、Nup88蛋白的相互作用,并鉴定FLII上的LRR结构域为相互作用区域。研究结果提示FLII可能参与了Importinβ的部分生物学作用,为进一步分析FLII与Importinβ、Nup88的生物学功能奠定了基础。

关键词：分子生物学 RNA转运 GST-pull down 免疫共沉淀 Flightless Ⅰ Importin β Nup88

PCNA蛋白突变体的真核表达载体构建及鉴定

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重庆医学 2012年第12期41卷 1194-1196页

作者：刘小会淡松松秦焕焕高学娟刘朗夏暨南大学生命与健康工程研究院广州510632

目的构建带FLAG标签的细胞增殖核抗原(PCNA)蛋白Y211A、Y211D突变型重组质粒,真核表达及鉴定。方法以FLAG-PCNA野生型基因为模板,运用PCR定点突变技术扩增出带突变位点的基因序列,将其插入真核表达载体pCMV-N-FLAG,进行双酶切实验和测... 详细信息

目的构建带FLAG标签的细胞增殖核抗原(PCNA)蛋白Y211A、Y211D突变型重组质粒,真核表达及鉴定。方法以FLAG-PCNA野生型基因为模板,运用PCR定点突变技术扩增出带突变位点的基因序列,将其插入真核表达载体pCMV-N-FLAG,进行双酶切实验和测序验证。然后,利用脂质体将重组质粒转染至293T细胞,Western blotting鉴定融合蛋白的表达。结果 FLAG-PCNA(Y211A)、FLAG-PCNA(Y211D)重组质粒测序结果正确,获得PCNA蛋白突变体。结论成功构建了带FLAG标签的PCNA蛋白Y211A、Y211D真核表达载体,验证了突变型PCNA融合蛋白的表达,为PCNA蛋白功能的深入研究奠定了基础。

关键词： PCNA蛋白突变体真核表达

hnRNPK与Nef相互作用并有利于细胞表面CD4的表达

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中国生物工程杂志 2015年第4期35卷 17-22页

作者：魏金梅范小琴熊海庭高学娟刘小会刘朗夏广东省高校功能蛋白质研究重点实验室暨南大学生命与健康工程研究院广州510632

目的:前期不同的研究分别证明HIV蛋白Nef下调宿主细胞表面受体CD4的表达,以及Nef与宿主细胞蛋白heterogeneous nuclear ribonucleoprotein K(hnRNPK)存在相互作用。因此提出了两个值得研究探讨的重要问题:(1)hnRNPK是否参与调节细胞表面... 详细信息

目的:前期不同的研究分别证明HIV蛋白Nef下调宿主细胞表面受体CD4的表达,以及Nef与宿主细胞蛋白heterogeneous nuclear ribonucleoprotein K(hnRNPK)存在相互作用。因此提出了两个值得研究探讨的重要问题:(1)hnRNPK是否参与调节细胞表面CD4的表达?(2)Nef是否通过hnRNPK调节细胞表面CD4的表达?方法:利用半体外GST-pulldown技术验证Nef与hnRNPK存在相互作用。通过瞬时转染的方式将HIV-1Nef表达在He La-CD4细胞里,同时利用siRNA干扰技术敲低hnRNPK,最后运用流式细胞技术检测细胞表面CD4的表达水平。结果:(1)GST-pulldown结果验证了Nef与hnRNPK存在相互作用;(2)Nef的表达使细胞表面CD4水平下降约75%;(3)不管是否有Nef,hnRNPK的敲低都使细胞表面CD4表达水平明显下降(50%);同样的,Nef下调CD4的作用也不受hnRNPK敲低的影响。结论:(1)hnRNPK与Nef相互作用;(2)hnRNPK有利于细胞表面CD4的表达,其与Nef的下调作用的关系尚不明确,Nef对CD4的下调作用可能涉及有其他因素参与的复杂调控。

关键词：分子生物学 Nef CD4 hnRNPK 流式细胞术

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GST-HRB融合蛋白的表达与纯化

生物技术通报 2011年第11期27卷 172-176页

作者：刘丽杰高学娟刘小会陈妙娟朱森刘朗夏暨南大学生命科学技术学院广州510632

构建GST-HRB重组质粒,进行融合蛋白的表达、纯化及鉴定。利用PCR扩增及基因重组技术,以pcDNA-3.1-HRB为模板扩增出HRB全基因序列,并将其插入带有GST(谷胱甘肽巯基转移酶)标签的原核表达载体pGEX-6P-1中,构建GST-HRB融合蛋白表达质粒。然... 详细信息

构建GST-HRB重组质粒,进行融合蛋白的表达、纯化及鉴定。利用PCR扩增及基因重组技术,以pcDNA-3.1-HRB为模板扩增出HRB全基因序列,并将其插入带有GST(谷胱甘肽巯基转移酶)标签的原核表达载体pGEX-6P-1中,构建GST-HRB融合蛋白表达质粒。然后,将重组质粒GST-HRB转化至大肠杆菌Rosseta进行融合蛋白的表达。利用GST琼脂糖珠进行融合蛋白的纯化,最后应用SDS-PAGE电泳和Western blotting鉴定纯化的融合蛋白。结果表明,成功构建pGEX-6P-1-HRB原核表达载体,表达及纯化了GST-HRB融合蛋白。

关键词： GST-HRB 构建融合蛋白表达纯化

UV照射和MMS诱导下PCNA表达的变化及相关研究

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激光生物学报 2014年第2期23卷 110-115页

作者：谢颖颖汤冬娥刘小会高学娟刘朗夏暨南大学功能蛋白质研究广东普通高校重点实验室生命与健康工程研究院广东广州510632

目的:建立DNA损伤的模型,在蛋白水平和mRNA水平研究PCNA的表达变化情况。方法:UV照射和MMS处理细胞后利用Western blot和实时荧光定量PCR检测PCNA蛋白表达水平和mRNA水平的变化,以及利用倒置荧光显微镜观察细胞的形态变化。运用ShRNA干... 详细信息

目的:建立DNA损伤的模型,在蛋白水平和mRNA水平研究PCNA的表达变化情况。方法:UV照射和MMS处理细胞后利用Western blot和实时荧光定量PCR检测PCNA蛋白表达水平和mRNA水平的变化,以及利用倒置荧光显微镜观察细胞的形态变化。运用ShRNA干扰技术降低泛素E3连接酶RAD18和CUL4A的表达,检测内源PCNA蛋白表达水平的变化。结果与结论:UV照射和MMS处理细胞后,细胞形态发生变化,随着时间的延长,大部分细胞趋于死亡。实时荧光定量PCR的结果发现PCNA的mRNA水平下降,但是PCNA蛋白水平的表达无明显变化,说明DNA损伤时PCNA蛋白的稳定性增加,暗示细胞中存在着一定的机制,维持PCNA蛋白表达量的稳定。干扰E3连接酶CUL4A和RAD18的表达时,PCNA蛋白水平有所升高,提示二者参与了PCNA的降解过程。

关键词： PCNA 表达 DNA损伤 UV MMS