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苹果中正己醇降解酶的提取

食品与发酵工业 2011年第3期37卷 191-196页

作者：朱静师俊玲刘延琳西北农林科技大学食品科学与工程学院西北农林科技大学葡萄酒学院陕西杨凌712100

采用不同方法从苹果中提取正己醇降解酶，优选最适的提酶方式，并在该提取方式下研究酶的初步分离纯化。结果显示：采用丙酮粉法提酶较适合，且SDS—PAGE电泳结果表明不同方法提取粗酶液和经硫酸盐处理后的蛋白在条带数量和分布上都有... 详细信息

采用不同方法从苹果中提取正己醇降解酶，优选最适的提酶方式，并在该提取方式下研究酶的初步分离纯化。结果显示：采用丙酮粉法提酶较适合，且SDS—PAGE电泳结果表明不同方法提取粗酶液和经硫酸盐处理后的蛋白在条带数量和分布上都有所变化。30％-70％为适宜的（NH4）2SO4盐析浓度，然后对酶液进行梯度盐析，初步纯化后正己醇降解率为88．56％±0．9847％。

关键词：苹果正己醇降解酶提取纯化

DNA分子标记技术在酿酒酵母菌株遗传多样性分析中的应用

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中国农业科学 2010年第5期43卷 1023-1030页

作者：裴颖芳刘延琳西北农林科技大学葡萄酒学院/陕西省葡萄-葡萄酒工程中心

本文介绍了RAPD、mtDNA-RFLP、微卫星DNA(microsatellite)、Interdelta指纹图谱以及线粒体DNACOX1基因指纹图谱等5种DNA分子标记技术的方法和原理及其优缺点,同时探讨了DNA分子标记技术在国内外酿酒酵母菌株区分中的应用状况与前景。

关键词：酿酒酵母菌株 RAPD mtDNA-RFLP interdelta指纹图谱 COX1基因微卫星DNA

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RAPD在酵母分类鉴定与育种研究中的应用

食品科学 2012年第9期33卷 267-270页

作者：冯敏刘延琳西北农林科技大学葡萄酒学院陕西杨凌712100

随机扩增多态性DNA(RAPD)因其简便、快速、灵敏等优点在酵母的分类鉴定,种属间亲缘关系确定及育种等方面有广阔的应用前景。本文综述近年来RAPD技术在酵母相关研究中的应用,并简单讨论该技术目前的研究热点。

关键词： RAPD 酵母属分类鉴定育种

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葡萄酒生产中常用的瓶塞/盖:类型及使用

食品与发酵工业 2009年第7期35卷 123-127页

作者：党国芳刘延琳西北农林科技大学陕西杨凌712100 上海新天阳光葡萄酒业有限公司上海201314 陕西省葡萄与葡萄酒工程技术研究中心陕西杨凌712100

用于葡萄酒封瓶的瓶塞/盖主要有3种类型:软木塞、高分子塞、螺旋盖。它们具有不同的材质特点,不同的历史起源,在生产过程中的使用需要注意不同细节。软木塞是一种自然产品,来自于栓皮栎的树皮;高分子塞和螺旋盖作为新兴的瓶塞,其材料来... 详细信息

用于葡萄酒封瓶的瓶塞/盖主要有3种类型:软木塞、高分子塞、螺旋盖。它们具有不同的材质特点,不同的历史起源,在生产过程中的使用需要注意不同细节。软木塞是一种自然产品,来自于栓皮栎的树皮;高分子塞和螺旋盖作为新兴的瓶塞,其材料来源于塑料高分子材料和铝,可以进行大规模工业生产,具有质量均一的特点。正确选择使用瓶塞/盖,可以在葡萄酒装瓶后更好地发挥酒的内在潜质。

关键词：葡萄酒软木塞高分子塞螺旋盖

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赭曲霉毒素产生菌筛选方法的对比与优选

西北农林科技大学学报（自然科学版） 2012年第3期40卷 169-174页

作者：蒋春美师俊玲刘延琳西北农林科技大学食品科学与工程学院陕西杨凌712100 西北农林科技大学葡萄酒学院陕西杨凌712100

【目的】探求一种能够快速、准确地筛选出赭曲霉毒素产生菌的分析方法,为赭曲霉毒素的检测与防治奠定基础。【方法】分别采用紫外荧光法、胶体金免疫试纸条法和高效液相色谱(HPLC)法,对分离自葡萄表面的189株霉菌产生赭曲霉毒素A(OTA)... 详细信息

【目的】探求一种能够快速、准确地筛选出赭曲霉毒素产生菌的分析方法,为赭曲霉毒素的检测与防治奠定基础。【方法】分别采用紫外荧光法、胶体金免疫试纸条法和高效液相色谱(HPLC)法,对分离自葡萄表面的189株霉菌产生赭曲霉毒素A(OTA)的能力进行分析,并对3种方法的鉴定结果进行比较。其中在紫外荧光法中,黑曲霉接种至可可浆培养基(CCA)培养,其他霉菌接种至察氏培养基(CA)培养,培养后能够产生荧光的菌株被认为是OTA产生菌。同时分别用高效液相色谱法(HPLC)和OTA胶体金试纸条对所有菌株培养物中的OTA进行检测。【结果】以HPLC检测结果为标准,用紫外荧光法对OTA产生菌初筛的假阳性率较高,假阴性率为0;胶体金免疫试纸条法用于筛选OTA产生菌的假阴性率为47.4%,假阳性率为0,适合于产毒量高的菌种筛选。【结论】用紫外荧光法作为OTA产生菌的初筛方法可以排除大部分非OTA产生菌,漏检率低,从而大大降低HPLC检测的工作强度和检测成本;将紫外荧光法和HPLC定量分析结合使用,可以快速、准确地分离到OTA产生菌;将紫外荧光法和胶体金免疫试纸条相结合,可以快速筛选OTA产量高的菌株,且该方法较为经济,对环境和人体的污染较小。

关键词：赭曲霉毒素A 紫外荧光法 OTA胶体金试纸条产生菌筛选

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降解柠檬酸酵母菌的筛选及其发酵性能研究

中国食品学报 2018年第11期18卷 72-80页

作者：郝爱玲冯莉秦义宋育阳刘延琳西北农林科技大学葡萄酒学院陕西杨凌712100 陕西省葡萄与葡萄酒工程技术研究中心陕西杨凌712100

为获得降解柠檬酸并应用于含酸量较高的猕猴桃果酒发酵的优良菌株,以实验室保藏的来自中国宁夏、新疆、陕西和甘肃地区,经26S r DNA D1/D2区序列分析法鉴定的84株非酿酒酵母为材料,分别采用柠檬酸培养基、YPD-柠檬酸培养基和Triple M模... 详细信息

为获得降解柠檬酸并应用于含酸量较高的猕猴桃果酒发酵的优良菌株,以实验室保藏的来自中国宁夏、新疆、陕西和甘肃地区,经26S r DNA D1/D2区序列分析法鉴定的84株非酿酒酵母为材料,分别采用柠檬酸培养基、YPD-柠檬酸培养基和Triple M模拟汁进行降酸能力和发酵性能筛选,并通过猕猴桃果酒发酵,对优良降酸菌株进行综合分析。结果显示:共有5株非酿酒酵母在前期筛选过程中表现出优良降酸能力和发酵性能,分别为东方伊萨酵母M100、M130、B6-1、B4-19和克鲁维毕赤酵母GS1-1。其中,菌株M130在猕猴桃发酵试验中综合评价最优,能够将猕猴桃13.12 g/L的柠檬酸降到10.74 g/L,降酸率达18.12%,显著高于其它菌株,且发酵结束后酒体澄清、透明,香气浓郁。本研究中所获菌株M130为果酒降酸技术研究提供了重要材料。

关键词：柠檬酸非酿酒酵母筛选发酵猕猴桃

过量表达NADH氧化酶降低酿酒酵母乙醇合成的研究

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中国食品学报 2018年第4期18卷 23-29页

作者：王雅楠宋育阳刘延琳秦义西北农林科技大学葡萄酒学院陕西杨凌712100 西北农林科技大学合阳葡萄试验示范站陕西合阳715300

目的:为了降低在葡萄酒酿造过程中酿酒酵母的乙醇产量。方法:将编码NADH氧化酶的Spnox基因过量表达于酿酒酵母T73中,构建胞内异源NADH氧化途径。结果:与出发菌株酿酒酵母T73/p Y26相比较,重组菌株酿酒酵母T73/p Y26-Spnox胞内总NADH氧... 详细信息

目的:为了降低在葡萄酒酿造过程中酿酒酵母的乙醇产量。方法:将编码NADH氧化酶的Spnox基因过量表达于酿酒酵母T73中,构建胞内异源NADH氧化途径。结果:与出发菌株酿酒酵母T73/p Y26相比较,重组菌株酿酒酵母T73/p Y26-Spnox胞内总NADH氧化酶活性提高49%,胞内NADH/NAD+比率降低了9%;酿酒酵母T73/p Y26-Spnox发酵模拟葡萄汁所获得的乙醇产量及醇类物质总量分别降低了7%和13%,挥发酸增加了4.5%,挥发性物质种类和含量略有增加。结论:过量表达NADH氧化酶可使葡萄酒在发酵条件下,酿酒酵母合成乙醇或其它醇类物质的能力降低,为进一步优化葡萄酒发酵条件生产降醇葡萄酒打下基础。

关键词： Spnox NADH氧化酶 NADH/NAD+ 乙醇

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产白藜芦醇葡萄内生菌的分离与鉴定

食品科学 2012年第13期33卷 167-170页

作者：曾芹师俊玲刘延琳西北农林科技大学食品科学与工程学院陕西杨凌712100 西北农林科技大学葡萄酒学院陕西杨凌712100

从酿酒葡萄梅洛特的葡萄皮、葡萄穗轴及梗中分离出30株葡萄内生菌,经过摇瓶液体发酵后检测发酵液提取物,发现有7株内生真菌具有产白藜芦醇的能力。其中菌株MG1发酵产白藜芦醇的能力稳定、产量高,达97μg/L,其他几株菌株白藜芦醇产量较... 详细信息

从酿酒葡萄梅洛特的葡萄皮、葡萄穗轴及梗中分离出30株葡萄内生菌,经过摇瓶液体发酵后检测发酵液提取物,发现有7株内生真菌具有产白藜芦醇的能力。其中菌株MG1发酵产白藜芦醇的能力稳定、产量高,达97μg/L,其他几株菌株白藜芦醇产量较低且不稳定。对菌株MG1的分类鉴定进行重点研究,结合形态学特征及分子生物检测结果,鉴定其为链格孢属菌。

关键词：梅洛特葡萄内生菌白藜芦醇链格孢属

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mleA基因在酿酒酵母中的整合型表达

中国农业科学 2009年第4期42卷 1372-1377页

作者：刘延琳李华西北农林科技大学葡萄酒学院/陕西省葡萄-葡萄酒工程中心

【目的】进行中国自行筛选的专利菌种酒酒球菌SD-2a(Oenococcus oeni SD-2a)的苹果酸-乳酸酶基因在酿酒酵母中的整合型表达,使葡萄酒生产过程中的酒精发酵和苹果酸-乳酸发酵(malolactic fermentation,MLF)同时进行。【方法】克隆Oenococ... 详细信息

【目的】进行中国自行筛选的专利菌种酒酒球菌SD-2a(Oenococcus oeni SD-2a)的苹果酸-乳酸酶基因在酿酒酵母中的整合型表达,使葡萄酒生产过程中的酒精发酵和苹果酸-乳酸发酵(malolactic fermentation,MLF)同时进行。【方法】克隆Oenococcus oeni SD-2a的苹果酸-乳酸酶基因mleA,以PGK1强启动子和ADH1终止子为调控元件,以酵母整合型质粒YIp5为载体,构建重组表达质粒pYILmleA,并转化酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)YS59,经筛选鉴定获得酵母转化子YS59/pYILmleA。进行转化子的营养缺陷型和交配型鉴定、菌落PCR鉴定、SDS-PAGE检测及斑点杂交检测,并对酵母转化子培养上清液进行L-苹果酸及L-乳酸含量的HPLC分析,检测目的基因的功能性表达。【结果】转化子的营养缺陷型和交配型鉴定、菌落PCR鉴定表明获得了阳性转化子;SDS-PAGE检测表明获得的转化子表达了目标蛋白,斑点杂交检测表明目的基因整合到受体菌中。模拟发酵表明mleA基因整合到受体菌中后进行了功能性表达,将培养基中的L-苹果酸转化成L-乳酸,使得培养液中的L-苹果酸含量极显著降低。转化子YS59/pYILmleA在添加5648mg·L-1L-苹果酸和10%葡萄糖的SD/-Ura培养基中培养4d,培养液上清中L-苹果酸的剩余含量与空载体转化子YS59/YIp5(对照)差异极显著,苹果酸的相对降低率为20.18%～20.85%。供试的转化子L-乳酸生成量为1278～1312mg·L-1,对照未检出乳酸的生成。【结论】中国自主筛选的专利菌种O.oeni SD-2a的mleA基因的整合型表达质粒构建成功并在酿酒酵母中进行了功能性表达。

关键词：酒酒球菌苹果酸-乳酸酶基因整合重组表达酿酒酵母