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作者：刘安倩江南大学

学位级别：硕士

L-丝氨酸可用于改善神经功能及治疗脑损伤,是一种极为重要的氨基酸类药物。微生物发酵法生产L-丝氨酸因环境友好成为研究热点,然而微生物发酵法生产L-丝氨酸尚未实现工业化。谷氨酸棒杆菌是FDA认可的生产食品和药品的安全菌株,本实验室... 详细信息

L-丝氨酸可用于改善神经功能及治疗脑损伤,是一种极为重要的氨基酸类药物。微生物发酵法生产L-丝氨酸因环境友好成为研究热点,然而微生物发酵法生产L-丝氨酸尚未实现工业化。谷氨酸棒杆菌是FDA认可的生产食品和药品的安全菌株,本实验室前期构建了一株高产L-丝氨酸的重组谷氨酸棒杆菌A36,但菌株仍然存在生长缓慢以及L-丝氨酸产量不高等问题。基于上述问题,本论文以谷氨酸棒杆菌A36为出发菌株,采用组合调控L-丝氨酸合成途径关键酶与耦合外源基因相结合的方法,即先采用强启动子调控L-丝氨酸合成途径的三个关键酶PGDH(ser A编码)、PSAT(ser C编码)和PSP(ser B编码),随后通过耦合异源丝氨酸合成途径关键酶PGDH使合成L-丝氨酸的反应更易于进行,进一步组合以上两种策略,获得L-丝氨酸高产菌株,并对高产菌株进行发酵优化,提高了L-丝氨酸产量。主要研究结果如下:(1)L-丝氨酸合成途径关键酶的组合调控:首先采用探针质粒评价谷氨酸棒杆菌A36中L-丝氨酸合成途径关键酶PGDH(ser A编码)、PSAT(ser C编码)和PSP(ser B编码)原始启动子的强度,结果发现三个关键酶的原始启动子强度较低,可调控区间较大。随即采用强启动子dap-e11分别替换ser A、ser C和ser B的原始启动子,得到重组菌株A36-A、A36-C和A36-B,重组菌株L-丝氨酸产量分别为35.83 g/L、33.29 g/L和34.09g/L,较出发菌株A36(30.57 g/L)分别提高了17.21%、8.90%和11.51%。进一步采用强启动子dap-e11组合替换L-丝氨酸合成途径三个关键酶的启动子,得到重组菌株A36-AC、A36-AB、A36-BC和A36-ACB,重组菌株L-丝氨酸产量分别为45.15 g/L、43.89g/L、38.22 g/L和45.83 g/L,较出发菌株A36分别提高了47.69%、43.57%、25.02%和49.92%,同时菌株最大生物量OD分别为44.76、48.05、48.34和46.56,较出发菌株A36(55.10)均有所下降。以上研究表明,L-丝氨酸合成途径关键酶PGDH(ser A编码)替换强启动子对菌株产L-丝氨酸影响最大。(2)耦合大肠杆菌来源的L-丝氨酸合成酶:文献报道耦合大肠杆菌来源的丝氨酸合成途径关键酶(PGDH),可以降低L-丝氨酸合成的热力学自由能,使合成L-丝氨酸的反应更易于进行;据此对菌株A36中L-丝氨酸合成关键酶PGDH进行进一步研究。利用谷氨酸棒杆菌-大肠杆菌穿梭质粒p DXW-10(p D),表达大肠杆菌来源的丝氨酸合成关键酶PGDH,构建重组菌株A36-PGDH;结果发现虽然120 h重组菌株L-丝氨酸产量为29.65 g/L,与出发菌株A36相比变化不显著,但是在菌株生长期(即0-60 h)重组菌株生长速度明显高于出发菌株A36,最大生物量OD达到63.08,较出发菌株提高了14.48%。同时PGDH酶活力测定结果表明,重组菌株A36-PGDH的比酶活为(3.42 U/g)较出发菌株A36(2.42 U/g)提高了41.32%;说明异源表达PGDH有效地提高了L-丝氨酸合成关键酶的酶活力,同时对菌株生长也有一定的改善作用。(3)组合强化L-丝氨酸合成途径:进一步组合上述两种策略,即在组合调控L-丝氨酸合成途径关键酶的菌株中表达大肠杆菌来源的PGDH,成功构建重组菌株A36-ACP、A36-ABP、A36-BCP和A36-ACBP。四株重组菌株最大生物量OD分别为62.73、51.71、57.74和57.37,与出发菌株A36相比,A36-ACP生物量提高了最为显著,提高了13.85%。四株重组菌株L-丝氨酸产量分别为38.24 g/L、37.15 g/L、39.23 g/L和43.64 g/L,与出发菌株A36相比,菌株A36-ACBP的L-丝氨酸产量提高了最为显著,提高了42.76%,同时与未耦合PGDH的菌株A36-ACB相比,菌株A36-ACBP的L-丝氨酸产量变化虽不显著,但菌株最大生物量OD提高了23.23%。(4)重组菌株的发酵优化:选择生长和生产均有一定优势的重组菌株A36-ACBP进行发酵优化,采用正交设计方法优化了蔗糖、(NH)SO、生物素和2-KG的浓度,获得优化培养基。在优化培养基中菌株最大生物量OD为64.20,较出发菌株A36提高了16.52%,L-丝氨酸的产量为53.13 g/L,较出发菌株A36提高了73.80%。最终在5 L发酵罐中对A36-ACBP进行流加补料发酵,L-丝氨酸产量达到62.23 g/L,是目前报道的谷氨酸棒杆菌发酵产L-丝氨酸的最高产量,为实现微生物发酵法工业化生产L-丝氨酸奠定了基础。

关键词： L-丝氨酸谷氨酸棒杆菌合成途径组合调控启动子

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氨基脱氧分支酸合成酶对谷氨酸棒杆菌生长和产L-丝氨酸的影响

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食品与发酵工业 2023年第19期49卷 15-21页

作者：刘安倩颜文斌肖文翰张晓梅史劲松许正宏江南大学生命科学与健康工程学院江苏无锡214112 宜兴市食品与生物技术研究院江苏无锡214122 江南大学生物工程学院江苏无锡214112 江南大学粮食发酵工艺与技术国家工程实验室江苏无锡214122

L-丝氨酸是化学和材料领域中最为重要的30个骨架化合物之一,但至今尚未实现微生物发酵法工业化生产L-丝氨酸。氨基脱氧分支酸合成酶(aminodeoxychorismate synthase,ADC synthase)是L-丝氨酸分解代谢相关的关键酶,研究前期发现,与出发菌... 详细信息

L-丝氨酸是化学和材料领域中最为重要的30个骨架化合物之一,但至今尚未实现微生物发酵法工业化生产L-丝氨酸。氨基脱氧分支酸合成酶(aminodeoxychorismate synthase,ADC synthase)是L-丝氨酸分解代谢相关的关键酶,研究前期发现,与出发菌株SSAAI相比,通过ARTP诱变获得的高产L-丝氨酸突变株A36中氨基脱氧分支酸合成酶编码基因pabAB 426位发生点突变(T426I),而氨基脱氧分支酸合成酶基因突变对酶活力、菌株生长及产L-丝氨酸的影响尚未见报道。该文采用pK18 mobsacB质粒在出发菌株SSAAI上对pabAB进行426位定点突变(T426I)研究,结果发现,pabAB定点突变株的生物量比出发菌株SSAAI下降29.3%,L-丝氨酸产量提高15.9%。同时对氨基脱氧分支酸合成酶酶活力进行测定,发现氨基脱氧分支酸合成酶编码基因pabAB 426位的T426I突变导致酶的比活力下降。进一步采用不同强度的启动子调控高产菌株A36中氨基脱氧分支酸合成酶的活力,构建重组菌株A36-Pkan和A36-Dap-e;与出发菌株A36相比,重组菌氨基脱氧分支酸合成酶的比酶活力均有提高,发酵120 h时,生物量分别提高8.3%和16%,而L-丝氨酸产量分别下降18.2%和22.6%,说明提高氨基脱氧分支酸合成酶酶活力有利于谷氨酸棒杆菌生长却不利于产L-丝氨酸。

关键词： L-丝氨酸谷氨酸棒杆菌 pabAB 氨基脱氧分支酸合成酶定点突变基因敲除

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毕节市税务局多元化培训人才

毕节市税务局多元化培训人才

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劳动时报

作者：刘安倩何博刘贵生

“在新闻写作培训课上，我感受最深刻的是要有‘正思维’这个观点，要盯住事情的正能量面，立足自身岗位，用新闻写作发出好声音，帮助自己更全面地认识主责主业是非常重要的。”大方县税务局新进公务员韦容梅说。近日，为树牢“文经我... 详细信息

“在新闻写作培训课上，我感受最深刻的是要有‘正思维’这个观点，要盯住事情的正能量面，立足自身岗位，用新闻写作发出好声音，帮助自己更全面地认识主责主业是非常重要的。”大方县税务局新进公务员韦容梅说。近日，为树牢“文经我手无差错，事交我办请放心”的工作理念......

关键词：税务局新闻写作毕节市多元化培训

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泡菜中高耐镉乳酸菌的选育及吸附特性

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食品与发酵工业 2019年第14期45卷 27-33页

作者：陈宇凌陈银元刘安倩李文李同祥王陶江苏省食品资源开发与质量安全重点建设实验室(徐州工程学院)

以筛选耐镉乳酸菌并研究其吸附特性为目的,利用高镉MRS培养基从泡菜中初筛出乳酸菌,并通过提高镉浓度对菌株进行驯化、复筛,以提高其耐镉能力,最终筛选出1株高耐镉乳酸菌ZY-6,固体最高耐镉质量浓度为10 000 mg/L,液体最高为900 mg/L,且p... 详细信息

以筛选耐镉乳酸菌并研究其吸附特性为目的,利用高镉MRS培养基从泡菜中初筛出乳酸菌,并通过提高镉浓度对菌株进行驯化、复筛,以提高其耐镉能力,最终筛选出1株高耐镉乳酸菌ZY-6,固体最高耐镉质量浓度为10 000 mg/L,液体最高为900 mg/L,且pH值为7、NaCl质量浓度为10 g/L、温度为37℃时菌株生长情况最好。经形态学观察、生理生化实验及分子生物学鉴定,该菌株为绿色魏斯菌(Weissella viridescens),在含50 mg/L的镉溶液中吸附率为61.78%,对其他重金属如铅、铜和锰也显示出一定的吸附能力,研究结果为乳酸菌作为潜在的食品级重金属吸附剂提供了一定依据。

关键词：泡菜高耐镉乳酸菌选育吸附特性

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热解预处理对昭通褐煤润湿性的影响机制

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煤炭转化 2024年第1期47卷 10-18页

作者：王成勇安倩王市委张谌虎杨建发六盘水师范学院矿业与机械工程学院贵州六盘水553004 中国矿业大学国家煤加工与洁净化工程技术研究中心江苏徐州221116

褐煤的强亲水性为其加工和利用造成了许多不利影响,热解预处理是调控褐煤润湿性的有效方法之一。采用工业分析、傅立叶变换红外光谱(FTIR)、X射线衍射(XRD)和接触角测量探究了热解预处理对褐煤润湿性的影响机制。热解预处理的温度分别为... 详细信息

褐煤的强亲水性为其加工和利用造成了许多不利影响,热解预处理是调控褐煤润湿性的有效方法之一。采用工业分析、傅立叶变换红外光谱(FTIR)、X射线衍射(XRD)和接触角测量探究了热解预处理对褐煤润湿性的影响机制。热解预处理的温度分别为200℃,300℃,400℃和500℃,时间分别为30 min,60 min,90 min和120 min。结果表明:热解预处理改变了褐煤的化学结构和组成,显著影响了褐煤的润湿性。褐煤的羧基在200℃时开始裂解逸出,并在300℃时基本消失;褐煤的酯基在300℃时开始裂解逸出,并在400℃时基本消失;而褐煤的C—O(醚键、酚和醇)的热稳定性较好,热解预处理后其相对含量略微增加;褐煤的芳碳率随着热解温度和时间的增加而增大,且芳香核尺寸在300℃时开始增大。如果使用热解预处理来减弱褐煤的亲水性,则应确保在较低温度下有足够的热解时间来去除褐煤的含氧官能团,而在较高温度下应使用较短的时间来防止褐煤的有机质过度损失。在300℃(120 min)或400℃(30 min)热解条件下,褐煤的亲水性含氧官能团(羧基或酯基)裂解逸出,且疏水性芳香核尺寸增大,从而使其亲水性显著减弱,接触角由原煤的44.00°分别增大为87.50°和85.75°。然而,在400℃(热解时间大于30 min)和500℃条件下,褐煤的有机质过度损失,导致矿物质或无机质的相对含量增加,使其亲水性仍然较强。

关键词：褐煤润湿性热解预处理化学结构含氧官能团

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腕关节镜下保留旋前方肌1 cm小切口微创入路治疗桡骨远端关节内骨折的可行性及疗效观察

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中华手外科杂志 2024年第2期40卷 115-120页

作者：盛伟刘安湖北理工学院附属黄石爱康医院骨科黄石435000

目的探讨腕关节镜下保留旋前方肌1 cm小切口微创入路治疗桡骨远端关节内骨折的可行性及临床疗效。方法我科自2021年9月至2023年2月收治63例桡骨远端关节内骨折患者,采用保留旋前方肌1 cm小切口微创入路手术28例,术中使用腕关节镜辅助;... 详细信息

目的探讨腕关节镜下保留旋前方肌1 cm小切口微创入路治疗桡骨远端关节内骨折的可行性及临床疗效。方法我科自2021年9月至2023年2月收治63例桡骨远端关节内骨折患者,采用保留旋前方肌1 cm小切口微创入路手术28例,术中使用腕关节镜辅助;采用传统Henry入路手术35例。比较两组患者的围手术期指标及随访资料。结果63例患者均顺利进行手术。两组患者的一般资料、住院时间、切口愈合等级差异均无统计学意义(P>0.05)。微创组的手术时间(90.0±7.2)min,较传统组(55.0±5.7)min有所增长(P0.05)。术后1周时微创组屈伸、旋转活动度明显优于传统组[(90.0±13.8)°vs(81.0±7.6)°,P=0.017;(79.6±9.2)°vs(61.1±15.6)°,P<0.001];术后3个月时Mayo腕关节功能评分,微创组优良率为25/3(89.2%),传统组为29/6(82.85%),差异具有统计学意义(P=0.039)。结论保留旋前方肌1 cm小切口微创入路治疗桡骨远端关节内骨折具有良好的可操作性与可靠性,同时具备创伤小、恢复快、疼痛期短等优点,且改善了术后的关节功能,值得临床推广应用。

关键词：桡骨骨折治疗结果微创入路旋前方肌腕关节镜

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建筑工程造价管理中概预算编制的探讨

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门窗 2024年第7期 127-129页

作者：安倩倩山西四建集团有限公司

本文旨在探讨建筑工程造价管理中概预算编制的重要性及其关键要素。通过对建筑工程造价概预算的概述、概预算编制工作要点的分析,提出了建筑工程概预算编制的措施,以供相关人士参考、交流。

关键词：建筑工程造价管理概预算编制

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近代教会学校教育性质变迁——以山西铭贤学校为例

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世界宗教文化 2024年第2期 127-135页

作者：刘安荣中共山西省委党校

本文认为近代教会教育经过了传教教育、基督教教育、国民政府私立教育的变迁,主要体现在办学目的、课程设置、师资力量、学生来源与信仰状况、毕业生走向等方面的发展、变化。然而这些教会学校在政府登记后,教育权并没有完全被收回,其... 详细信息

本文认为近代教会教育经过了传教教育、基督教教育、国民政府私立教育的变迁,主要体现在办学目的、课程设置、师资力量、学生来源与信仰状况、毕业生走向等方面的发展、变化。然而这些教会学校在政府登记后,教育权并没有完全被收回,其办学性质没有完全改变。

关键词：教会学校铭贤学校教育性质变迁

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水利工程对尾闾荒漠河岸林草植被生长的影响

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水上安全 2024年第16期 104-106页

作者：安倩北京市劳保所科技发展有限责任公司北京100054

卡拉贝利水利枢纽工程能够有效控制克孜河洪水灾害,是促进流域农业增产增收、农民脱贫致富的民生工程。为研究荒漠区水利工程在建设与运行期间对尾闾重点保护植被的影响,本文以荒漠河岸林草植被为研究对象,通过一元线性回归、曼-肯德尔(... 详细信息

卡拉贝利水利枢纽工程能够有效控制克孜河洪水灾害,是促进流域农业增产增收、农民脱贫致富的民生工程。为研究荒漠区水利工程在建设与运行期间对尾闾重点保护植被的影响,本文以荒漠河岸林草植被为研究对象,通过一元线性回归、曼-肯德尔(Mann-Kendall)趋势分析、滑动T检验,分析2000—2022年夏季植被归一化植被指数(NDVI)与总初级生产力(GPP)均值的变化。研究发现,该工程采取了有效水利调度运行方案,保障下游生态用水,在施工与运行初期并未对植被造成显著影响。

关键词：水利工程 NDVI GPP

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抵押期间抵押物转让规则研究

抵押期间抵押物转让规则研究

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作者：刘安山东师范大学

学位级别：硕士

《中华人民共和国民法典》(以下简称《民法典》)的颁布使得抵押物转让规则发生根本性变化,第406条的规定扭转了在此之前的限制转让模式,从立法的层面肯定了抵押物的自由流转。而抵押物的转让涉及多方利益,如何在新规则下实现各方主体的... 详细信息

《中华人民共和国民法典》(以下简称《民法典》)的颁布使得抵押物转让规则发生根本性变化,第406条的规定扭转了在此之前的限制转让模式,从立法的层面肯定了抵押物的自由流转。而抵押物的转让涉及多方利益,如何在新规则下实现各方主体的利益平衡是本文关注的主要问题。基于此本文分四个部分展开研究:第一部分是对我国抵押物转让规则立法演变的梳理,并由此引出本文的具体研究进路,包括平衡抵押人、抵押权人、受让人三方利益,以及区分不动产抵押与动产抵押。第二部分在明确抵押权的设立本身对抵押人行使处分权不造成影响的前提下,说明允许以约定的形式对处分权进行禁止或限制有其存在的必要性。此外,重点对禁止或限制转让特约进行效力分析,提出不动产抵押中该约定不具有登记能力,仅能够在当事人之间发生债权效力;而动产抵押中该约定经登记或有证据证明受让人明知的,抵押权人可以据此请求转让不发生物权效力。第三部分首先对抵押权追及效力的概念及国内外立法规定进行梳理,并提出我国立法目前存在的问题。其次重点分析抵押权追及效力及其阻断情形的相关规则,得出不动产抵押权原则上具有追及效力,但以受让人属于商品房消费者为例外;动产抵押权追及效力的判断优先适用《民法典》第403、404条的结论。最后通过解释《民法典》第406条第2款所规定的抵押人的通知义务和可能损害抵押权的认定标准,为追及不能的抵押权人提供物上代位救济。第四部分首先分析我国现有规则体系对抵押物受让人利益保护的不足,尤其当抵押物价值小于债权总额之时更加捉襟见肘。其次厘清代为清偿制度与域外立法中涤除制度的主要区别,明确涤除制度属于我国立法规定的空白,进而探讨《民法典》背景下涤除制度引入的必要性和可行性。最后尝试从涤除权的行使主体与时间、涤除金额的确定、涤除权行使的具体程序、涤除的法律效果四个方面对该制度进行构建。

关键词：抵押期间抵押物转让抵押人处分权抵押权追及效力涤除权

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