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芯片瞬间等速电泳-筛分电泳偶联分析精确计算DNA长度

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分析化学 2010年第1期38卷 15-20页

作者：刘大渔梁广铁莫建坤周小棉广州医学院附属市一人民医院检验科临床化学技术研究室广东省第二人民医院检验科

建立了基于相对迁移时间比例的方法,依据待侧DNA片段相对于上位及下位内标的迁移时间比例进行长度预测。实验结果显示,DNA片段的相对迁移时间比例在不同分析条件下具有良好的重现性。通过建立相对迁移时间比例相对于DNA片段长度的对应... 详细信息

建立了基于相对迁移时间比例的方法,依据待侧DNA片段相对于上位及下位内标的迁移时间比例进行长度预测。实验结果显示,DNA片段的相对迁移时间比例在不同分析条件下具有良好的重现性。通过建立相对迁移时间比例相对于DNA片段长度的对应关系公式,实现了芯片瞬间等速电泳条件下DNA片段长度的准确预测。实际样品分析证实这种基于相对迁移时间比例的计算方法简单可靠,适合于芯片tITP-CGE分析中DNA长度的精确判定。

关键词：芯片电泳瞬间等速电泳 DNA长度计算迁移时间样品盐浓度

基于微流控技术在流体动力载荷下分离循环肿瘤细胞(英文)

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力学进展 2014年第1期44卷 447-494页

作者：赵聪李贻昆徐睿梁纯刘大渔马薇 PIYAWATTANAMETHA Wibool ZOHAR Yitshak 香港科技大学生物医学工程学部香港科技大学机械及航空航天工程系香港科技大学生命科学部广州市第一人民医院广州510180 Department of Electronics King Mongkut's Instutute of Technology Faculty of Medicine Chulalongkorn University Department of Aerospace and Mechanical Engineering University of Arizona

在世界范围内,癌症的死亡率仍在逐年上升.循环肿瘤细胞(circulating tumor cells,CTCs)是指从原发肿瘤脱落并进入血液循环系统的细胞,可能引发肿瘤转移并入侵其他正常组织和器官.因此,CTCs的检测结果可以作为癌症病人疗效和预后的评价指... 详细信息

在世界范围内,癌症的死亡率仍在逐年上升.循环肿瘤细胞(circulating tumor cells,CTCs)是指从原发肿瘤脱落并进入血液循环系统的细胞,可能引发肿瘤转移并入侵其他正常组织和器官.因此,CTCs的检测结果可以作为癌症病人疗效和预后的评价指标.但是CTCs的数量及其稀少,使得CTCs的检测尤为困难.在癌症转移的病人中,每毫升血液约含有10～100个CTCs.利用经生物活性材料表面修饰的微流控器件,可以从血液中分离出CTCs.这是一项跨学科的挑战,需要来自不同学科背景的专家们共同参与,如细胞生物学、表面化学、流体力学及微纳加工技术等.该文首先介绍了CTCs的细胞生物学基础,然后总结了当前分离CTCs的主要微流控技术,包括基于细胞-配体作用、磁力作用和过滤等,最后综述了基于微流控技术的CTC检测和计数、在体CTC成像等最新研究进展.

关键词：循环肿瘤细胞(CTC) 微流控癌症微系统微机电系统上皮间质转化肿瘤转移

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乳腺癌细胞促血管生成能力及MMP-9表达与其淋巴道转移的关系

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肿瘤防治研究 2005年第1期32卷 15-17,F002页

作者：王丽辉刘大渔吕申辽宁大连医科大学病理教研室 116027 中国科学院大连化学物理研究所1807组

目的本研究旨在通过检测血管内皮细胞生长因子(VEGF),基质金属蛋白酶9(MMP9)在乳腺癌细胞中的表达情况及计数微血管密度(Microvasculardensity,MVD)值来探讨它们与乳腺癌浸润和转移的关系。方法采用免疫组织化学SP法检测75例乳腺浸润癌... 详细信息

目的本研究旨在通过检测血管内皮细胞生长因子(VEGF),基质金属蛋白酶9(MMP9)在乳腺癌细胞中的表达情况及计数微血管密度(Microvasculardensity,MVD)值来探讨它们与乳腺癌浸润和转移的关系。方法采用免疫组织化学SP法检测75例乳腺浸润癌(有淋巴结转移者39例,无淋巴结转移者36例)中VEGF、MMP9、CD34的表达,并用多因素COX比例风险模型分析患者的预后。结果VEGF、MMP9和MVD在淋巴结转移组与无转移组的表达均具有显著性差异(P<0.05),与乳腺癌淋巴结转移呈正相关。MVD值高者生存时间短。结论乳腺癌淋巴道转移与VEGF、MMP9表达及MVD值有关,检测这几种蛋白表达将有助于判断乳腺癌的转移潜能及预后。

关键词：乳腺肿瘤淋巴道转移血管内皮细胞生长因子基质金属蛋白酶-9 微血管密度

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胶束电动力学毛细管色谱中峰的定性方法

分析化学 2002年第6期30卷 645-649页

作者：郑育芳刘大渔熊建辉张普敦张朝许国旺中国科学院大连化学物理研究所国家色谱研究分析中心中国科学院大连化学物理研究所国家色谱研究分析中心大连116011 大连医科大学病理系

从理论上探讨了在胶束电动力学毛细管色谱中采用迁移时间来定性的不足 ,提出将相对有效淌度用于该体系下尿中核苷组分的定性。结果表明 :使用相对有效淌度作定性指标 ,其平均相对标准偏差为1 5 4 % ,明显优于用迁移时间进行定性所得的... 详细信息

从理论上探讨了在胶束电动力学毛细管色谱中采用迁移时间来定性的不足 ,提出将相对有效淌度用于该体系下尿中核苷组分的定性。结果表明 :使用相对有效淌度作定性指标 ,其平均相对标准偏差为1 5 4 % ,明显优于用迁移时间进行定性所得的平均相对标准偏差 7.9%。提出用识别系数评价定性的可靠性。当使用相对有效淌度作定性指标时 ,75 %以上的分析物都达到了可靠识别。识别可靠性与采用迁移时间相比最高可提高 16倍

关键词：有效淌度迁移指数识别系数定性胶束电动力学毛细管色谱

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开放式微流控芯片上的肿瘤组织微阵列构建

分析化学 2018年第1期46卷 113-120页

作者：林冬果林锦琼李佩文杨娜徐邦牢刘大渔华南理工大学附属第二医院检验医学研究室广州医科大学附属广州市第一人民医院检验科广东省临床分子医学及分子诊断重点实验室

构建了一种具有自动形成细胞培养阵列和多步骤灵活操作特点的开放式微流控芯片。此芯片具有3层复合式结构:底层为微通道贯穿的细胞培养池阵列,顶层是开放式培养池,二者之间为一层纳米孔薄膜。纳米孔薄膜具有"透气阻水"的特性,既起到止... 详细信息

构建了一种具有自动形成细胞培养阵列和多步骤灵活操作特点的开放式微流控芯片。此芯片具有3层复合式结构:底层为微通道贯穿的细胞培养池阵列,顶层是开放式培养池,二者之间为一层纳米孔薄膜。纳米孔薄膜具有"透气阻水"的特性,既起到止流阀作用实现液体自动分配,又允许跨膜扩散,模拟血管内皮层扩散屏障结构。结合移液工作站,开放式微流控芯片可以完成细胞换液、药物处理和细胞活力测试等一系列分析步骤。本研究以乳腺癌细胞为模型,在芯片上90 s内可构建包含三维细胞培养和仿真血管内皮的10×10肿瘤组织微阵列。形态学和免疫组织化学检测证实了芯片肿瘤组织的仿真效果。抗肿瘤药物测试结果表明,这种开放式微流控组织阵列芯片允许在仿真条件下进行包含复杂操作步骤的细胞实验,是细胞研究的有利工具。

关键词：开放式微流控芯片纳米孔薄膜三维细胞培养组织微阵列抗肿瘤药物测试

基于毛细管液滴技术的血液乙型肝炎病毒DNA提取

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分析化学 2011年第5期39卷 670-674页

作者：梁广铁王秋平王维刘大渔周小棉广州医学院附属广州市第一人民医院检验科临床化学技术研究室

基于毛细管液滴技术,建立了提取血液中乙型肝炎病毒(HBV)DNA的方法。方法的基本原理是向聚四氟乙烯毛细管中连续引入油相和水相溶液时,由于表面张力作用,可以形成稳定的油包水型液滴。依次引入含有不同试样的液滴,在毛细管中完成进样、... 详细信息

基于毛细管液滴技术,建立了提取血液中乙型肝炎病毒(HBV)DNA的方法。方法的基本原理是向聚四氟乙烯毛细管中连续引入油相和水相溶液时,由于表面张力作用,可以形成稳定的油包水型液滴。依次引入含有不同试样的液滴,在毛细管中完成进样、DNA结合、洗涤以及洗脱等过程。实验表明,采用蛋白酶K裂解和提高洗脱温度有利于提高DNA回收率。优化后的血清HBV DNA提取操作在25 min内完成,回收率大于60%。本方法的DNA提取量与常规方法相当,而相对标准偏差较大(23.3%vs 12.9%)。本方法具有简单、快速和低成本的优势,有望成为一种微全核酸分析系统样品前处理的有效解决方案。

关键词：微全核酸分析系统 DNA提取液滴毛细管乙型肝炎病毒

来源：博看期刊

自由溶液和筛分介质条件下芯片DNA瞬间等速电泳预浓缩的比较

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分析化学 2010年第8期38卷 1100-1104页

作者：刘大渔梁广铁雷秀霞周小棉广州医学院附属市一人民医院检验科临床化学技术研究室

利用芯片电泳方法考察瞬间等速电泳-筛分电泳偶联分析的结果,比较了自由溶液和筛分介质中DNA瞬间等速电泳的预浓缩效果。结果显示,相比较于筛分介质条件,自由溶液瞬间等速电泳有利于改善预浓缩和后续筛分电泳分离效果。对此结果的解释是... 详细信息

利用芯片电泳方法考察瞬间等速电泳-筛分电泳偶联分析的结果,比较了自由溶液和筛分介质中DNA瞬间等速电泳的预浓缩效果。结果显示,相比较于筛分介质条件,自由溶液瞬间等速电泳有利于改善预浓缩和后续筛分电泳分离效果。对此结果的解释是:自由溶液条件下DNA迁移速度的提高可以延长瞬间等速电泳持续时间,有利于提高预浓缩效率。此外,样品压缩区带在自由溶液-筛分介质界面的二次富集也是预浓缩效果得到改善的原因之一。

关键词：芯片电泳等速电泳预浓缩脱氧核糖核酸

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胶束电动力学毛细管色谱法测定尿中核苷

高等学校化学学报 2001年第6期22卷 912-915页

作者：郑育芳张云刘大渔郭小亮梅素容熊建辉孔宏伟张朝许国旺中国科学院大连化学物理研究所国家色谱研究分析中心大连116011 大连医科大学病理系大连116011

用胶束电动力学毛细管色谱法测定尿中核苷 .通过苯基硼酸亲和色谱柱对尿中核苷进行纯化 ,以十二烷基磺酸钠 ( SDS) -十水合四硼酸钠 -磷酸二氢钠为缓冲液 ( p H=6.96) ,在未涂层石英毛细管上 ,于 7k V恒压 ,2 9℃下进行电泳分离 ,检测... 详细信息

用胶束电动力学毛细管色谱法测定尿中核苷 .通过苯基硼酸亲和色谱柱对尿中核苷进行纯化 ,以十二烷基磺酸钠 ( SDS) -十水合四硼酸钠 -磷酸二氢钠为缓冲液 ( p H=6.96) ,在未涂层石英毛细管上 ,于 7k V恒压 ,2 9℃下进行电泳分离 ,检测波长为 2 54nm.此方法用于 2 8个正常人尿中 1 4种核苷的测定 ,确定了正常成年人 (汉族 )尿中核苷的排放范围 .

关键词：胶束电动力学毛细管色谱法核苷尿修饰核苷肿瘤诊断标记物排放范围测定临床分析

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微流控芯片上的肿瘤组织微阵列构建

分析化学 2015年第5期43卷 637-642页

作者：王伟鑫刘未平吴斌梁广铁刘大渔广州医科大学附属广州市第一人民医院检验医学研究室广州医科大学广东省临床分子医学及分子诊断重点实验室

研发了一种多层复合微流控芯片,包含64细胞培养微孔阵列,该微阵列集成了细胞进样、水凝胶三维支架形成和持续灌流培养的过程。以MCF-7乳腺癌细胞为模型,连续培养中监测细胞存活率、细胞密度、增殖率和细胞内p H值,并同时进行冰冻切片后... 详细信息

研发了一种多层复合微流控芯片,包含64细胞培养微孔阵列,该微阵列集成了细胞进样、水凝胶三维支架形成和持续灌流培养的过程。以MCF-7乳腺癌细胞为模型,连续培养中监测细胞存活率、细胞密度、增殖率和细胞内p H值,并同时进行冰冻切片后免疫组化染色。实验结果显示,乳腺癌细胞在水凝胶微球中增殖形成了类组织结构。E-cadherin及Vinculin在细胞内、细胞间隙均出现较强表达,提示水凝胶微球中细胞建立了细胞-细胞、细胞-间质连接。芯片上连续培养15天内细胞存活率保持在85%以上,细胞增殖率随时间延长而递减。细胞内p H值检测显示芯片3D培养细胞内部呈现明显的酸化,其程度随着细胞密度增大而增加。这种芯片肿瘤组织微阵列构建方法简单高效,有望发展成为肿瘤研究的有力工具。

关键词：微流控芯片肿瘤组织微阵列微环境三维细胞培养