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结缔组织生长因子和基质金属蛋白酶组织抑制因子-1shRNA表达质粒对肝星状细胞细胞因子表达及细胞外基质分泌的影响

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中华肝脏病杂志 2012年第8期20卷 576-580页

作者：蒋玉凤孙华丽张建军黄飞刘加群泸州医学院附属医院感染病科四川泸州646000 山东省菏泽市立医院广元市第一人民医院湖北省荆州市中心医院感染科河北省秦皇岛市第三人民医院

目的研究结缔组织生长因子（CTGF）和基质金属蛋白酶组织抑制因子-1（TIMP-1）的短发夹RNA（shRNA）表达质粒分别及共转染肝星状细胞（Hsc）对CTGF、TIMP-1、I型前胶原（PCI）mRNA表达及细胞外基质（ECM）分泌的影响。方法筛选并成功构... 详细信息

目的研究结缔组织生长因子（CTGF）和基质金属蛋白酶组织抑制因子-1（TIMP-1）的短发夹RNA（shRNA）表达质粒分别及共转染肝星状细胞（Hsc）对CTGF、TIMP-1、I型前胶原（PCI）mRNA表达及细胞外基质（ECM）分泌的影响。方法筛选并成功构建靶向大鼠CTGF和T1MP-1有效RNA干扰靶位的shRNA表达质粒，分别及共转染转化生长因子B1刺激活化的大鼠HSC-T6细胞，荧光定量PCR检测各组细胞中CTGF、TIMP-1、PCImRNA的表达；放射免疫法分析细胞上清液中Ⅲ型前胶原（PCⅢ）、透明质酸（HA）和层黏连蛋白（LN）的含量。组间比较采取方差分析；多组间两两比较采用SNK-q检验。结果CTGFshRNA转染和双质粒共转染HSC-T6的CTGFmRNA相对表达量分别为0．59±0．03、0．62±0．01，与空白对照组、CTGFshRNA转染组的1和1．00±0．07比较，CTGFmRNA表达量均明显下降，F=66．515，P值均〈0．05，差异有统计学意义；而TIMP-1shRNA组和双质粒共转染组的TIMP-1mRNA相对表达量分别为0．66±0．04、0．68±0．03，与空白对照组、CTGFshRNA转染组的1和1．05±0．03比较，TIMP-1mRNA表达量均明显下降，F=83．835，P值均〈0．05，差异有统计学意义;CTGF shRNA转染、TIMP-1shRNA转染和共转染组的PCImRNA相对表达量分别为0．55±0．02、0．57±0．02和0．41±0．01与空白对照组的1比较，PCI mRNA表达量均明显下降，F=709．905，P值均〈0．05，差异有统计学意义,双质粒联合转染对CTGF、TIMP-1、PCI的mRNA表达量抑制作用优于单质粒转染。CTGFshRNA转染、CTGFshRNA转染和双质粒共转染组的PCⅢ含量分别为（78．02±6．50）ng／ml、（79．03±5．47）ng／ml、（53．91±4．01）ng／ml，与空白对照组的（113．79±15．88）比较，PCⅢ含量均明显下降，P值均〈0．05，差异有统计学意义；CTGFshRNA转染、CTGFshRNA转染和双质粒共转染组的HA含量分别为（127．36±8．33）ng／ml、（116．55±3．37）ng／ml、（82．84±9．03）ng／ml，与空白对照组的（163．10±7．01）ng／ml比较，HA含量均明显下降，p值均〈0．05，差异有统计学意义CTGFshRNA转染、CTGFshRNA转染和双质粒共转染组的LN含量分别为（55．41±9．37）ng／ml、（49．77±6．70）ng／ml、（30．72±1．22）ng／ml，与空白对照组的（83．99±4．67）ng／ml比较，LN含量均明显下降，P值均〈0．05，差异有统计学意义。CTGF shRNA与TIMP-1shRNA双质粒联合转染对PCⅢ、HA、HA分泌的抑制作用优于单质粒转染。结论CTGFshRNA、TIMP-1 shRNA可明显抑制HSC的CTGF、TIMP-1、PCI基因表达及ECM的分泌，且shRNA联合干扰效果更显著，有望成为抗肝纤维化基因治疗的有效方法。

关键词：肝硬化转染短发夹RNA 基质金属蛋白酶组织抑制因子一1 结缔组织生长因子

复方甘草酸单铵和异甘草酸镁对化学损伤人肝细胞的保护作用

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世界华人消化杂志 2009年第29期17卷 3019-3022页

作者：张群刘加群孙华丽陈鹏张建军东南大学附属中大医院感染病科江苏省南京市210009 河北秦皇岛市第三医院肝病科河北省秦皇岛市066001 泸州医学院附属医院感染病科四川省泸州市646000

目的:研究2类甘草甜素药物对半乳糖胺(D-GalN)和四氯化碳(CCl4)损伤培养人肝细胞(L-02)的保护作用及差异.方法:培养L-02,用复方甘草酸单铵(compound ammonium glycyrrhizin,CAG)和异甘草酸镁(magnesium isoglycyrrhizinate,MI)分别进行保护后,再经D-GalN或CCl4处理.观察肝细胞生长状态、测定AST、LDH酶活力、及细胞内谷胱甘肽(GSH)含量.从而评价CAG和MI对D-GalN和CCl4损伤L-02的保护作用差异.结果:浓度为1g/L的CAG和MI均能提高细胞的存活率,显著抑制D-GalN和CCl4所致的AST及LDH释放.CAG抑制D-GalN和CCl4所致的AST与LDH效果显著好于MI(均P<0.05);浓度为1g/L的CAG和MI均能显著抑制2种化学损伤细胞内的GSH降低(CCl4损伤:7.59±1.27,5.23±0.70vs3.33±0.40;D-GalN损伤:7.93±0.36,5.40±0.52vs3.77±0.45,P<0.01或0.05),CAG效果明显好于MI.结论:1g/L的CAG和MI2种药物对D-GalN和CCl4致人肝细胞损伤均有保护作用,其机制与抑制GSH降低相关.2种甘草甜素药物相比较,CAG保护肝细胞效果好于MI.

关键词：半乳糖胺四氯化碳甘草甜素肝细胞药物作用

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细胞因子与肝纤维化的基因治疗

临床荟萃 2009年第7期24卷 631-633页

作者：刘加群张建军泸州医学院附属医院感染病科四川泸州646000

肝纤维化(hepatic fibrosis)是各种原因(如病毒、乙醇、寄生虫、铜铁沉积等)引起的慢性肝损伤所共有的病理改变,其特征是以胶原为主的细胞外基质(ECM)各成分因合成增多、降解相对不足而在肝内过量沉积.

关键词：肝硬化基因疗法细胞因子类

两种不同肝纤维化相关细胞因子shRNA重组质粒的构建

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重庆医学 2011年第23期40卷 2341-2342,2345,I0002页

作者：蒋玉凤刘加群张建军孙华丽黄飞泸州医学院附属医院感染病科四川泸州646000 河北省秦皇岛市第三人民医院肝病科 066000 山东省菏泽市市立医院传染科 274031 湖北省荆州市中心医院感染科 434000

目的构建以大鼠结缔组织生长因子(CTGF)和金属蛋白酶组织抑制因子1(TIMP-1)基因为靶点的短发夹RNA(shRNA)表达质粒。方法根据前期筛选出的对CTGF和TIMP-1基因最有效的RNA干扰靶位,各设计一对有短发夹结构的RNA干扰(RNAi)靶点序列,退火... 详细信息

目的构建以大鼠结缔组织生长因子(CTGF)和金属蛋白酶组织抑制因子1(TIMP-1)基因为靶点的短发夹RNA(shRNA)表达质粒。方法根据前期筛选出的对CTGF和TIMP-1基因最有效的RNA干扰靶位,各设计一对有短发夹结构的RNA干扰(RNAi)靶点序列,退火形成双链DNA,克隆到质粒载体psiRNA-h7SKGFPzeo;构建重组质粒载体psiRNA-GFP-CTGF和psiRNA-GFP-TIMP-1,并进行酶切与测序鉴定。结果酶切与序列测定均提示重组质粒psiRNA-GFP-CTGF和psiRNA-GFP-TIMP-1构建成功。结论成功构建靶向大鼠CTGF和TIMP-1最有效的RNAi靶位的shRNA表达质粒,为进一步探索肝纤维化基因治疗的新途径打下了实验基础。

关键词：金属蛋白酶类 RNA干扰质粒肝纤维化生长因子

中药灌肠联合门冬氨酸鸟氨酸治疗肝性脑病的疗效观察

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中医药导报 2015年第24期21卷 77-79页

作者：赵志军温井奎王守云焦秀娟齐丽韫刘加群秦皇岛市第三医院河北秦皇岛066000

目的:探讨中药灌肠联合门冬氨酸鸟氨酸治疗肝性脑病的临床疗效。方法:将符合纳入标准的74例肝性脑病患者随机分为治疗组和对照组,每组37例,对照组在西医常规治疗基础上结合门冬氨酸鸟氨酸治疗,治疗组在对照组基础上予以中药灌肠治疗,治... 详细信息

目的:探讨中药灌肠联合门冬氨酸鸟氨酸治疗肝性脑病的临床疗效。方法:将符合纳入标准的74例肝性脑病患者随机分为治疗组和对照组,每组37例,对照组在西医常规治疗基础上结合门冬氨酸鸟氨酸治疗,治疗组在对照组基础上予以中药灌肠治疗,治疗7 d为1个疗程,连续治疗2个疗程后观察两组患者临床疗效、血氨、肝功能改善情况(ALT、ALB、TBIL)及患者苏醒时间、数字连接实验(NCT)等指标的变化。结果:治疗结束后,治疗组总有效率(91.9%)明显高于对照组(73.0%),差异有统计学意义(P<0.05);两组患者肝功能均较治疗前改善,治疗组改善更显著,且治疗组患者完全苏醒时间及NCT所用时间均较对照组短,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:中药灌肠联合门冬氨酸鸟氨酸治疗肝性脑病的临床疗效确切,可缩短患者完全苏醒时间,降低血氨浓度,有利于肝功能的恢复。

关键词：肝性脑病中药灌肠门冬氨酸鸟氨酸 NCT 肝功能

肝脏瞬时弹性成像对代偿期肝硬化患者恩替卡韦治疗前后肝纤维化程度的评价

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山东医药 2017年第41期57卷 47-49页

作者：刘加群王守云曹立华王玉华焦秀娟齐丽韫赵志军赵培利温井奎房雷秦皇岛市第三医院河北秦皇岛066000

目的探讨肝脏瞬时弹性成像对代偿期肝硬化患者恩替卡韦治疗前后肝纤维化程度的评价作用。方法选取156例代偿期肝硬化患者,随机分为观察组和对照组各78例。两组均采取保肝抗病毒基础治疗,同时观察组给予恩替卡韦0.5 mg,1次/d,疗程48周。... 详细信息

目的探讨肝脏瞬时弹性成像对代偿期肝硬化患者恩替卡韦治疗前后肝纤维化程度的评价作用。方法选取156例代偿期肝硬化患者,随机分为观察组和对照组各78例。两组均采取保肝抗病毒基础治疗,同时观察组给予恩替卡韦0.5 mg,1次/d,疗程48周。两组治疗前后采用放射免疫法检测血清肝纤维化指标:透明质酸(HA)、层黏连蛋白(LN)、Ⅲ型前胶原(PCⅢ)、Ⅳ型胶原(Ⅳ-C),肝脏穿刺检查病理分期,肝脏瞬时弹性成像检测肝脏硬度值(LSM),分析肝脏瞬时弹性成像与肝脏穿刺检查及血清肝纤维化指标的相关性。结果治疗48周,观察组血清HA、LN、PCⅢ、Ⅳ-C水平及LSM均低于对照组(P均<0.05),LSM与血清HA、PCⅢ、LN、Ⅳ-C水平呈正相关(r分别为0.49、0.38、0.28、0.54,P均<0.05)。肝脏瞬时弹性成像检查对有无肝纤维化程度的判定与肝组织活检病理结果的一致性较好。结论肝脏瞬时弹性成像能准确评价代偿期肝硬化患者恩替卡韦治疗前后肝纤维化变化程度。

关键词：肝纤维化肝硬化肝脏瞬时弹性成像恩替卡韦

替诺福韦酯治疗妊娠慢性乙肝患者的疗效及母婴阻断的有效性研究

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中国医药导刊 2017年第2期19卷 176-177页

作者：齐丽韫赵志军刘加群秦皇岛市第三医院肝病科秦皇岛066000

目的:探索慢性乙型肝炎(乙肝)患者妊娠期服用替诺福韦酯的疗效及对母婴阻断的有效性。方法:86例早期妊娠合并HBsAg、HbeAg阳性孕妇按照用药与否分为治疗组(54例)及对照组(32例)。结果:孕早期治疗组患者ALT复常率及HBV DNA转阴率分别为... 详细信息

目的:探索慢性乙型肝炎(乙肝)患者妊娠期服用替诺福韦酯的疗效及对母婴阻断的有效性。方法:86例早期妊娠合并HBsAg、HbeAg阳性孕妇按照用药与否分为治疗组(54例)及对照组(32例)。结果:孕早期治疗组患者ALT复常率及HBV DNA转阴率分别为无显著差异(P>0.05),在孕早期治疗组患者的ALT复常率及HBVDNA转阴率为15例(27.7%)、5例(9.25%),对照组为8例(25.0%)、0,组间比较无显著性差异(P>0.05);孕中期治疗组ALT复常率及HBVDNA转阴率为37例(68.5%)、32例(59.3%)对照组为13例(40.6%)、1例(3.1%)(P<0.05);孕晚期治疗组ALT复常率及HBVDNA转阴率为48例(88.9%)、47例(87.0%)对照组为18例(56.3%)、3例(9.3%)(P<0.05)。结论:替诺福韦不仅可治疗孕妇慢性乙肝,并可有效阻断母婴HBV垂直传播,对母婴的安全性高,副作用少。

关键词：替诺福韦慢性乙型肝炎母婴传播妊娠

结缔组织生长因子和金属蛋白酶组织抑制因子-1 RNA干扰靶位的筛选

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实用肝脏病杂志 2011年第4期14卷 246-248,252页

作者：蒋玉凤黄飞张建军刘加群孙华丽泸州医学院附属医院感染病科四川省泸州市646000 湖北省荆州市中心医院感染病科河北省秦皇岛市第三人民医院山东省菏泽市立医院

目的筛选能有效抑制肝纤维化形成的结缔组织生长因子(CTGF)和金属蛋白酶组织抑制因子-1(TIMP-1)的RNA干扰靶位。方法根据大鼠CTGF和TIMP-1基因序列,分别设计3个RNA干扰候选靶位,化学合成双链RNA(dsRNA),各自转染或不同组合后转染经TGF-... 详细信息

目的筛选能有效抑制肝纤维化形成的结缔组织生长因子(CTGF)和金属蛋白酶组织抑制因子-1(TIMP-1)的RNA干扰靶位。方法根据大鼠CTGF和TIMP-1基因序列,分别设计3个RNA干扰候选靶位,化学合成双链RNA(dsRNA),各自转染或不同组合后转染经TGF-β1刺激活化的大鼠肝星状细胞(HSC),48h后抽提RNA并逆转录成cDNA,采用荧光定量PCR法测定并计算CTGF和TIMP-1、Ⅰ型前胶原(procol-α1)mRNA的相对表达量与抑制率,采用RIA法检测HSC培养上清液肝纤维化指标。结果在进行单独针对CTGF基因干扰时,CTGF-3组对CTGF mRNA及其下游产物Procol-α1 mRNA的转录抑制作用最佳(抑制率分别达68.09%与65.03%),在单独针对TIMP-1基因干扰时,TIMP-1-3组对TIMP-1 mRNA及其下游产物Procol-α1 mRNA的转录抑制作用最佳(抑制率分别达68.55%与62.84%);在联合干扰时,CTGF-3/TIMP-1-3组联合对CTGF mRNA和TIMP-1 mRNA的抑制最强(抑制率分别达76.60%与79.03%),而以CTGF-2/TIMP-1-3组联合对Procol-α1 mRNA的抑制作用最强(抑制率达85.79%)。结论成功筛选出针对CTGF和TIMP-1最有效的RNA干扰靶位,联合干扰较单独干扰效果更强。

关键词：肝纤维化结缔组织生长因子金属蛋白酶组织抑制因子-1 肝星状细胞 RNA干扰

核苷（酸）类似物治疗的慢性乙型肝炎患者HBVRT区突变序列分析

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中华实验和临床病毒学杂志 2012年第6期26卷 453-455页

作者：焦秀娟彭勋焦秀敏王晋生孙谢文赵培丽王守云刘加群李彤杨静娴秦皇岛市第三医院 066000 北京军区总医院北京大学医学部病原生物学系

目的分析使用过核苷（酸）类似物（NA）治疗的慢性乙型肝炎患者体内HBVRT区基因耐药特点。方法收集229例接受过核苷类似物治疗的慢性乙型肝炎患者的血清，应用snPCR法扩增HBV全长RT区，纯化snPCR产物直接测序后分析11个经典耐药位点的... 详细信息

目的分析使用过核苷（酸）类似物（NA）治疗的慢性乙型肝炎患者体内HBVRT区基因耐药特点。方法收集229例接受过核苷类似物治疗的慢性乙型肝炎患者的血清，应用snPCR法扩增HBV全长RT区，纯化snPCR产物直接测序后分析11个经典耐药位点的氨基酸变异情况。结果229例患者中基因B和C型各占14．41％（33／229）和85．59％（196／229）。且c型患者较B型更易发生耐药变异（X2=2．95，P〈0．05）。共有63例检出HBV耐药变异，在rtll69、rtTl84、rtAl94和rtS202位点上均未检出耐药变异。在63个耐药变异株中rtM204V／l变异株检出率最高（40／63，63．49％），共有11种耐药突变模式。其中rtM204I以与rtL80I／V或rtLl80M联合变异为主，而rtM204V变异常伴有rtLl80M变异。结论使用过核苷（酸）类似物（NA）治疗的慢性乙型肝炎患者体内HBVRT区基因耐药呈现出复杂的变异类型，rtM204V／I突变最为常见。

关键词：肝炎病毒,乙型基因型药物耐受性苷类