结缔组织生长因子和金属蛋白酶组织抑制因子-1 RNA干扰靶位的筛选

作     者：蒋玉凤 黄飞 张建军 刘加群 孙华丽 

作者机构：泸州医学院附属医院感染病科四川省泸州市646000 湖北省荆州市中心医院感染病科 河北省秦皇岛市第三人民医院 山东省菏泽市立医院 

出 版 物：《实用肝脏病杂志》 (Journal of Practical Hepatology)

年 卷 期：2011年第14卷第4期

页      面：246-248,252页

学科分类：1002[医学-临床医学] 100201[医学-内科学(含：心血管病、血液病、呼吸系病、消化系病、内分泌与代谢病、肾病、风湿病、传染病)] 10[医学] 

基　　金：四川省卫生厅科技项目(编号:09097) 四川省重点学科资助项目(SZD0421) 

主　　题：肝纤维化 结缔组织生长因子 金属蛋白酶组织抑制因子-1 肝星状细胞 RNA干扰 

摘      要：目的筛选能有效抑制肝纤维化形成的结缔组织生长因子(CTGF)和金属蛋白酶组织抑制因子-1(TIMP-1)的RNA干扰靶位。方法根据大鼠CTGF和TIMP-1基因序列,分别设计3个RNA干扰候选靶位,化学合成双链RNA(dsRNA),各自转染或不同组合后转染经TGF-β1刺激活化的大鼠肝星状细胞(HSC),48h后抽提RNA并逆转录成cDNA,采用荧光定量PCR法测定并计算CTGF和TIMP-1、Ⅰ型前胶原(procol-α1)mRNA的相对表达量与抑制率,采用RIA法检测HSC培养上清液肝纤维化指标。结果在进行单独针对CTGF基因干扰时,CTGF-3组对CTGF mRNA及其下游产物Procol-α1 mRNA的转录抑制作用最佳(抑制率分别达68.09%与65.03%),在单独针对TIMP-1基因干扰时,TIMP-1-3组对TIMP-1 mRNA及其下游产物Procol-α1 mRNA的转录抑制作用最佳(抑制率分别达68.55%与62.84%);在联合干扰时,CTGF-3/TIMP-1-3组联合对CTGF mRNA和TIMP-1 mRNA的抑制最强(抑制率分别达76.60%与79.03%),而以CTGF-2/TIMP-1-3组联合对Procol-α1 mRNA的抑制作用最强(抑制率达85.79%)。结论成功筛选出针对CTGF和TIMP-1最有效的RNA干扰靶位,联合干扰较单独干扰效果更强。