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流体剪切力介导Piezo1离子通道对MLO-Y4骨细胞凋亡及RANKL/OPG影响的机制研究

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流体剪切力介导Piezo1离子通道对MLO-Y4骨细胞凋亡及RANKL/OPG影...

作者：刘众成兰州大学

学位级别：硕士

目的:骨质疏松是一种全身骨骼的慢性退行性疾病。目前关于骨质疏松的发生、发展以及转归机制相对不明确。Piezo1通道蛋白是一种于2010年发现的机械敏感性阳离子通道蛋白,已被证实在维持骨稳态、平衡骨形成与骨重塑过程中发挥作用。骨细... 详细信息

目的:骨质疏松是一种全身骨骼的慢性退行性疾病。目前关于骨质疏松的发生、发展以及转归机制相对不明确。Piezo1通道蛋白是一种于2010年发现的机械敏感性阳离子通道蛋白,已被证实在维持骨稳态、平衡骨形成与骨重塑过程中发挥作用。骨细胞作为哺乳动物骨骼系统中含量最丰富的细胞之一,其凋亡相关表型与骨骼健康的关系不容忽视。RANKL/OPG作为调控破骨细胞分化及形成的关键分子,由骨细胞分泌并发挥重要作用。因此,对机械应力介导下Piezo1通道蛋白如何调控骨细胞凋亡以及RANKL/OPG分泌进行研究,可能对治疗骨质疏松提供新的治疗思路。方法:使用流体剪切应力(Fluid shear stress,FSS)加载装置对小鼠MLO-Y4骨样细胞进行干预,通过免疫荧光染色和Western blot探究FSS在MLO-Y4细胞中对Piezo1的调控作用及最佳条件。分别使用Piezo1激活剂Yoda1、阻滞剂Gs MTx4、FSS、siRNA-NOTCH3单独或双相对MLO-Y4细胞进行干预,应用Western blot及qRT-PCR检测NOTCH3、RANKL、OPG的表达情况;应用Western blot、Hoechnst-33258染色及流式细胞检测凋亡情况以及相关分子(Bcl-2、Cleaved Caspase-3以及Bax)的表达情况。结果:使用本课题组自行研发的FSS加载装置对MLO-Y4细胞进行干预后Piezo1蛋白表达呈现先上升后下降的单峰趋势,在9 dyne/cm下30分钟对Piezo1表达量的上调作用最佳(p<0.05)。Piezo1激活剂Yoda1在10μmol/L浓度作用2小时可以下调NOTCH3(p<0.0001)、RANKL(p<0.01),上调OPG(p<0.05)并抑制凋亡;阻滞剂Gs MTx4在4μmol/L浓度作用30分钟可以上调NOTCH3(p<0.05)、RANKL(p<0.05),下调OPG(p<0.05)并促进凋亡。FSS可以通过上调Piezo1的表达量逆转或部分逆转Gs MTx4对NOTCH3(p<0.05)、RANKL(p<0.05)、OPG(p<0.05)以及凋亡的作用。使用siRNA-NOTCH3对NOTCH3进行沉默后,Piezo1对RANKL/OPG的影响减弱。结论:1).FSS在9 dyne/cm强度下加载30分钟时上调MLO-Y4细胞的Piezo1表达。2).FSS介导Piezo1离子通道通过NOTCH3信号转导调控MLO-Y4细胞RANKL/OPG的表达。3).FSS通过Piezo1离子通道抑制MLO-Y4细胞凋亡。

关键词：流体剪切应力骨质疏松 Piezo1 凋亡 RANKL OPG NOTCH3

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内衬式地下洞室群氢能存储隆起破坏机制分析

岩石力学与工程学报 2024年第2期43卷 468-480页

作者：邱凯李树忱刘日成刘众众王宗昊中国矿业大学深部岩土力学与地下工程国家重点实验室江苏徐州221116 中国矿业大学力学与土木工程学院江苏徐州221116 山东大学齐鲁交通学院山东济南250002

内衬式地下洞室群的隆起破坏机制分析对于提高氢气存储容量和储库安全性具有重要意义。基于HoekBrown强度准则和极限分析上限方法,推导分层岩体中内衬式地下洞室群的隆起破坏线函数,建立极限内压(Pu)的表达式,将理论分析结果与有限元软... 详细信息

内衬式地下洞室群的隆起破坏机制分析对于提高氢气存储容量和储库安全性具有重要意义。基于HoekBrown强度准则和极限分析上限方法,推导分层岩体中内衬式地下洞室群的隆起破坏线函数,建立极限内压(Pu)的表达式,将理论分析结果与有限元软件计算结果进行对比分析,并在此基础上探讨洞室群形状/布局参数对Pu和隆起破坏线的影响规律。结果表明:Pu理论解与数值解的误差范围处于1.57%~2.20%范围,且隆起破坏范围基本一致;Pu与附加荷载和洞室间距成正比,与洞室半径成反比,且对附加荷载的敏感性最高,半径次之,对洞室间距的敏感性最低;分层界面处各隆起破坏线间的水平距离与盖层厚度成正比;地面处水平隆起破坏范围间的差距与盖层厚度成正比;在内衬式洞室群库址选择时,可将土体黏聚力和内摩擦力作为安全储备,并综合考虑洞室半径对Pu和氢气容量的影响,同时根据隆起破坏范围规避地质构造缺陷区域。研究成果对于分层岩体中内衬式地下洞室群氢能存储库址选择、洞形设计具有指导意义。

关键词：地下工程氢能存储内衬式地下洞室群隆起破坏 Hoek-Brown强度准则极限分析

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TUG1在骨肉瘤发病中的作用的研究进展

中国矫形外科杂志 2022年第9期30卷 806-809页

作者：移穷刘众成路凡夏亚一兰州大学第二医院骨科甘肃兰州730030

牛磺酸上调基因1(taurine upregulated 1,TUG1)是一种长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA),其通过复杂的分子机制参与骨肉瘤的发生发展。TUG1通过抑制多种miroRNA(miRNA)和调节相关信号通路,促进骨肉瘤细胞的增殖、侵袭和转移,... 详细信息

牛磺酸上调基因1(taurine upregulated 1,TUG1)是一种长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA),其通过复杂的分子机制参与骨肉瘤的发生发展。TUG1通过抑制多种miroRNA(miRNA)和调节相关信号通路,促进骨肉瘤细胞的增殖、侵袭和转移,抑制骨肉瘤细胞的凋亡。此外,TUC1的表达水平与骨肉瘤患者的预后相关,是一种判断预后的潜在生物标志物。本文旨在总结近年来的相关研究,对TUG1参与骨肉瘤细胞增殖、凋亡、侵袭和转移的相关分子机制以及TUGI在骨肉瘤中的临床意义的研究进展做--综述。

关键词：骨肉瘤牛磺酸上调基因1 分子机制生物标志物

流体剪切力通过下调p21促进MC3T3-E1成骨细胞增殖

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医用生物力学 2023年第4期38卷 663-669,682页

作者：移穷刘众成刘雪宁张坤王力夫耿彬夏亚一兰州大学第二医院骨科、甘肃省骨科临床医学研究中心、甘肃省骨关节疾病研究重点实验室兰州730030

目的探讨流体剪切力(fluid shear stress,FSS)对成骨细胞p21表达的影响,并明确p21在FSS诱导的成骨细胞增殖过程中的作用。方法对成骨细胞加载不同时间(0、15、30、45、60 min)、1.2 Pa FSS。用CCK-8实验、EdU实验检测成骨细胞增殖活性。... 详细信息

目的探讨流体剪切力(fluid shear stress,FSS)对成骨细胞p21表达的影响,并明确p21在FSS诱导的成骨细胞增殖过程中的作用。方法对成骨细胞加载不同时间(0、15、30、45、60 min)、1.2 Pa FSS。用CCK-8实验、EdU实验检测成骨细胞增殖活性。用siRNA p21或pcDNA p21转染成骨细胞,并用Western blotting检测转染效果。Western blotting检测不同干预条件下p21、cyclin D1、CDK4的表达变化。结果加载1.2 Pa FSS后,p21表达显著下调,且加载45 min后表达水平最低。加载FSS和下调p21表达都显著增强成骨细胞增殖,并增加cyclin D1、CDK4表达。而上调p21表达后,加载FSS不再具有增强成骨细胞增殖和增加cyclin D1、CDK4表达的作用。结论1.2 Pa FSS能够下调成骨细胞p21表达,在加载45 min时下调最为明显。p21下调对成骨细胞增殖具有促进作用,且FSS通过下调p21促进成骨细胞增殖。

关键词：流体剪切力成骨细胞细胞增殖

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ESG评级与公司债信用利差

ESG评级与公司债信用利差

作者：刘众一山东财经大学

学位级别：硕士

债券市场作为企业主要的直接融资场所之一,企业通过发行债券能够在一定程度上缓解自身资金压力。但要如何降低债券融资成本,解决融资贵的问题,依然是实务界和学术界关心的话题。随着可持续发展理念逐渐深入人心,公众对于企业投资价值的... 详细信息

债券市场作为企业主要的直接融资场所之一,企业通过发行债券能够在一定程度上缓解自身资金压力。但要如何降低债券融资成本,解决融资贵的问题,依然是实务界和学术界关心的话题。随着可持续发展理念逐渐深入人心,公众对于企业投资价值的评判不再局限于企业的财务绩效,企业在非财务领域方面的表现逐渐被投资者重视并被投资者纳入决策考虑范围。近几年,ESG理念在全球各国蓬勃发展,ESG基于企业在环境(Environmental)、社会(Social)和公司治理(Governance)方面的表现对企业进行全面评估,向社会提供新的视角以衡量企业的可持续发展能力和市场投资价值。因此,企业发行债券时,其在环境、社会责任以及公司治理上的优秀表现,对企业盈利能力、抗风险能力以及资金安全性具有积极的信号作用,有助于增强债券投资者对企业可持发展能力及偿债能力的信心。当债券投资者对企业的风险感知下降,在投资决策时要求发债企业支付的风险溢价也会下降,企业的债券融资成本会相应得到降低。本文将ESG评级与公司债融资成本相结合,选取2016-2022年发行公司债的沪深A股上市公司作为研究对象,以债券信用利差衡量债券融资成本,探讨企业ESG评级对公司债信用利差的影响。并进一步考虑在不同股权性质、不同污染程度、不同分析师关注度及媒体监督压力程度的影响下,ESG评级对公司债信用利差的影响差异。此外,本文还进一步使用财务绩效、融资约束以及债券信用评级作为中介变量,分析ESG评级对公司债信用利差影响的作用机制,最后,利用内生性检验、稳健性检验方法验证主要假设的可靠性。本文的研究意义在于:一方面补充了学术界关于ESG评级与信用利差的研究,丰富了有关ESG评级具有风险缓释效应结论支撑;另一方面则是通过实证结果明确了ESG评级具有降低公司债融资成本的现实意义,并借此引导和鼓励企业增强环保意识,积极承担社会责任,不断提升公司治理水平。本文的研究结论如下:第一,企业ESG评级高低与债券信用利差大小呈显著负相关关系,即企业可通过提升环保治理水平、积极承担社会责任、改善公司治理的方式获取较高的ESG评级,从而提高企业财务绩效,降低融资约束,优化债券信用评级,最终实现降低债券信用利差的目的;第二,由于企业股权性质不同,ESG评级对企业债券信用利差的影响有明显差异,即与国有企业相比,非国有企业的高ESG评级对信用利差的收窄作用更加显著;相对于非重污染行业企业,ESG评级对重污染行业企业的债券信用利差影响更为显著;当企业受到较高的分析师关注以及媒体监督时,ESG评级对债券信用利差的收窄作用更加有力。本文贡献如下:第一,本文有助于拓展ESG评级经济后果的相关研究,证实了ESG评级对企业风险的抑制能力,同时为降低企业债券融资成本提供新思路。第二,本文系统研究了企业ESG评级对公司债信用利差的作用路径,有助于明确ESG评级可以通过何种途径实现对公司债信用利差的影响。

关键词： ESG评级债券信用利差债券信用评级财务绩效融资约束

Piezo1离子通道介导的流体剪切应力抑制MLO-Y4骨细胞凋亡

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中国医学物理学杂志 2022年第10期39卷 1287-1292页

作者：刘众成何良志移穷刘雪宁张坤王力夫耿彬夏亚一姜金兰州大学第二医院骨科/甘肃省骨与关节疾病重点实验室甘肃兰州730000

目的:研究Piezo1机械敏感性离子通道对骨细胞的调控作用。方法:应用课题组研发的流体剪切力(FSS)加载装置,使用免疫荧光探究FSS对Piezo1通道在MLO-Y4中影响的最佳强度;对Piezo1使用FSS、激动剂Yoda1或阻滞剂GsMTx4进行干预。使用Western... 详细信息

目的:研究Piezo1机械敏感性离子通道对骨细胞的调控作用。方法:应用课题组研发的流体剪切力(FSS)加载装置,使用免疫荧光探究FSS对Piezo1通道在MLO-Y4中影响的最佳强度;对Piezo1使用FSS、激动剂Yoda1或阻滞剂GsMTx4进行干预。使用Western Blot探究Cleaved Caspase-3、Bcl-2、Bax凋亡相关蛋白的表达量;使用Hoechst-33258以及流式细胞凋亡检测MLO-Y4骨细胞的凋亡比例。结果:免疫荧光染色结果表明FSS对MLO-Y4骨细胞中Piezo1的表达呈现先增加后降低的单峰趋势,其中以9 dyne/cm2加载30 min为最佳刺激条件。使用Yoda1抑制MLO-Y4细胞凋亡(P<0.05),使用GsMTx4促进MLO-Y4细胞凋亡(P<0.05)。Piezo1介导的FSS抑制MLO-Y4细胞凋亡(P<0.05)。结论:Piezo1机械敏感性离子通道介导的FSS在9 dyne/cm2条件下抑制MLO-Y4骨细胞凋亡,且FSS在该条件下可以有效逆转Piezo1阻滞剂GsMTx4在4μmol/L作用0.5 h下促进MLO-Y4细胞凋亡作用。

关键词：流体剪切力 Piezo1 骨细胞凋亡

不同后交叉韧带指数测量方法对前交叉韧带损伤的诊断价值

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中国骨伤 2023年第10期36卷 926-931页

作者：杨俊滕元君王遵林刘众成陈思捷伍雪平牛永康夏亚一兰州大学第二临床医学院甘肃兰州730030 兰州大学第二医院骨科甘肃兰州730030 哈尔滨医科大学黑龙江哈尔滨150000

目的:比较6种不同测量方法下的后交叉韧带(posterior cruciate ligament,PCL)指数(Index),分析验证其在前交叉韧带(anterior cruciate ligament,ACL)损伤中的临床诊断价值。方法:回顾性分析2018年5月至2022年3月收治的225例患者的膝关节... 详细信息

目的:比较6种不同测量方法下的后交叉韧带(posterior cruciate ligament,PCL)指数(Index),分析验证其在前交叉韧带(anterior cruciate ligament,ACL)损伤中的临床诊断价值。方法:回顾性分析2018年5月至2022年3月收治的225例患者的膝关节MRI资料,年龄18~60岁,中位数32岁。根据ACL是否损伤,分为ACL正常组和ACL损伤组。在114例ACL损伤和111例ACL完整受试者的膝关节MRI矢状位图像上,测量MRI矢状位PCL在股骨附着点和胫骨附着点之间的直线距离(A)和该直线到矢状位图像上PCL弧形标记点之间的最大垂直距离(B),计算PCL Index并评估其对ACL损伤的诊断价值。结果:ACL正常组和ACL损伤组PCL Index1、2、3、6比较差异无统计学意义(P>0.05);两组PCL Index4、5比较,差异有统计学意义(P<0.001)。ACL正常组的PCL Index2、6与患者年龄呈负相关性(相关系数=-0.213,-0.189;P<0.05),ACL损伤组的PCL Index5与患者身体质量指数(body mass index,BMI)呈负相关性(相关系数=-0.277;P<0.05)。结论:PCL Index的改变有助于ACL损伤的诊断,临床中PCL Index4、5可以作为诊断ACL损伤的有效参考指标。

关键词：前交叉韧带损伤后交叉韧带指数诊断价值敏感性

Piezo1介导的流体剪切应力通过增强细胞骨架重组上调成骨细胞增殖

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甘肃医药 2022年第8期41卷 673-677,704页

作者：杜文佳何良志刘众成詹红伟姜金兰州大学第二医院(甘肃省骨科临床医学研究中心) 甘肃兰州730030

目的:最近研究发现的Piezo1机械敏感性离子通道或许在骨质疏松的发生、发展过程中起相关作用。本研究探索流体剪切力(FSS)是否通过Piezo1离子通道对MC3T3-E1成骨细胞增殖产生作用。方法:使用本课题组自行研究设计的FSS加载装置,对MC3T3... 详细信息

目的:最近研究发现的Piezo1机械敏感性离子通道或许在骨质疏松的发生、发展过程中起相关作用。本研究探索流体剪切力(FSS)是否通过Piezo1离子通道对MC3T3-E1成骨细胞增殖产生作用。方法:使用本课题组自行研究设计的FSS加载装置,对MC3T3-E1成骨细胞加载不同强度(3、6、9、12、15、18dyne/cm2)流体剪切力,使用Western Blot方法观察促进Piezo1蛋白表达的最佳FSS条件,探究激活剂(Yoda1)和抑制剂(GsMTx4)对Piezo1表达的影响。使用Western Blot及EdU染色观察成骨细胞增殖变化。通过鬼笔环肽染色、免疫荧光以及EdU染色探究细胞骨架对成骨细胞增殖的影响。结果:在不同强度循环流体剪切力下,6dyne/cm2时成骨细胞内Piezo1蛋白表达量最高。激活剂Yoda1浓度在20μM作用3h上调细胞内增殖相关蛋白PCNA、MCM2、Cyclin D1表达,细胞增殖率明显增加;抑制剂GsMTx4浓度在0.5μM作用2h下调细胞内增殖相关蛋白PCNA、MCM2、Cyclin D1表达,细胞增殖率明显下降。而使用胞松驰素D(Cyto D)抑制细胞骨架蛋白后会进一步抑制成骨细胞的增殖。结论:(1)对成骨细胞加载6dyne/cm^(2)循环FSS45min后,细胞内Piezo1蛋白表达最高;(2)Piezo1介导的FSS通过上调细胞骨架重组促进MC3T3-E1成骨细胞增殖。

关键词：流体剪切力 Piezo1 成骨细胞细胞增殖细胞骨架

前交叉韧带重建中内侧半月板桶柄样撕裂的缝合:全内和由内向外的比较研究

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创伤外科杂志 2022年第11期24卷 843-849页

作者：徐立虎靳佳欣吴萌刘众成何进文夏亚一兰州大学第二医院骨科兰州730030

目的探讨前交叉韧带损伤合并内侧半月板桶柄样撕裂患者一期关节镜下自体腘绳肌腱重建前交叉韧带并分别选用全内技术或由内向外技术缝合半月板的临床指标、关节功能评分及术后并发症的差异。方法回顾性分析2015年1月—2021年1月兰州大学... 详细信息

目的探讨前交叉韧带损伤合并内侧半月板桶柄样撕裂患者一期关节镜下自体腘绳肌腱重建前交叉韧带并分别选用全内技术或由内向外技术缝合半月板的临床指标、关节功能评分及术后并发症的差异。方法回顾性分析2015年1月—2021年1月兰州大学第二医院骨科收治的交叉韧带断裂合并内侧半月板桶柄样撕裂患者65例,其中采用关节镜下前交叉韧带重建和半月板的全内缝合技术(全内缝合组)37例(男性30例,女性7例;年龄18~36岁,平均26.1岁),采用关节镜下前交叉韧带重建和半月板的由内向外缝合技术(由内向外缝合组)28例(男性25例,女性3例;年龄19~37岁,平均27.6岁)。记录两组患者的手术时间、平均住院日。所有患者予以≥6个月的随访,记录临床症状和阳性体征,采用Lysholm评分和Tegner评分及关节活动度评价关节功能。结果全内缝合组患者手术时间(84.1±6.2)min,由内向外缝合组(92.6±8.5)min,差异有统计学意义(P0.05)。末次随访Lysholm评分,全内缝合组为91(87,94)分,由内向外缝合组为90(88,94)分,差异无统计学意义(P>0.05);全内缝合组术后Tegner评分为5(5,6)分,由内向外缝合组为5(5,6)分,差异无统计学意义(P>0.05);全内缝合组关节活动度为130°(130°,135°),由内向外缝合组为130°(130°,135°),差异无统计学意义(P>0.05);全内缝合组9例(24%)发现少量关节积液,由内向外缝合组6例(21%),差异无统计学意义(P>0.05);全内缝合组7例(19%)关节间隙压痛,由内向外缝合组3例(11%),差异无统计学意义(P>0.05)。全内缝合组患者轴移试验0度患者27例(73%)、Ⅰ度7例(19%)、Ⅱ度3例(8%);由内向外缝合组0度22例(78%)、Ⅰ度5例(18%)、Ⅱ度1例(4%),两组均无Ⅲ度轴移试验阳性患者,差异无统计学意义(P>0.05)。全内缝合组患者Lachman试验0度松弛20例(54%),Ⅰ度松弛12例(32%),Ⅱ度松弛5例(14%);由内向外缝合组0度松弛16例(57%),Ⅰ度松弛9例(32%),Ⅱ度松弛3例(11%),两组均无Ⅲ度松弛患者,差异无统计学意义(P>0.05)。由内向外缝合组有5例(18%)术后出现较为明显的髌骨内下区域局限性麻木症状,两组患者神经症状发生比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论关节镜下前交叉韧带重建并内侧半月板桶柄样撕裂的缝合,全内缝合较由内向外缝合手术时间更短,术后关节功能和阳性症状发生率比较没有差异,而由内向外缝合存在隐神经髌骨下支损伤的风险。

关键词：内侧半月板撕裂前交叉韧带关节镜缝合