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肢体缺血预处理对脑缺血再灌注损伤大鼠自噬的影响

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肢体缺血预处理对脑缺血再灌注损伤大鼠自噬的影响

作者：冷光朋桂林医学院

学位级别：硕士

目的:急性缺血性脑卒中(Acute ischemic stroke,AIS)是一种复杂的多因素疾病,传统的治疗手段是恢复缺血区的血流灌注,但是这种方法会引起缺血再灌注损伤(IRI)。在这种情况下,需要对新的神经保护措施进行探索。肢体缺血预处理(limb ische... 详细信息

目的:急性缺血性脑卒中(Acute ischemic stroke,AIS)是一种复杂的多因素疾病,传统的治疗手段是恢复缺血区的血流灌注,但是这种方法会引起缺血再灌注损伤(IRI)。在这种情况下,需要对新的神经保护措施进行探索。肢体缺血预处理(limb ischemic preconditioning,LIPC),是指预先对肢体进行反复短暂的缺血再灌注处理,激发机体的内源性保护机制,从而对远隔缺血器官产生保护作用。但是关于LIPC的作用机制至今尚未完全明确,特别是自噬在其中的作用机制。方法:将60只Wistar大鼠按随机原则分为假手术组(Sham组)、缺血再灌注组(I/R组)、肢体缺血预处理组(LIPC组)、3-甲基嘌呤组(3-MA组),每组15只。制作脑缺血再灌注、LIPC及3-MA干预大鼠模型,在脑缺血2h再灌注24h后进行神经功能缺陷评分和脑梗死体积测定,HE染色观察细胞形态学改变,Western Bloting法检测自噬相关蛋白Beclin-1、Cathepsin B的表达。结果:1、神经功能缺陷评分:Sham组反应灵敏,无神经功能障碍,与Sham组比较,I/R组,LIPC组,3-MA组均出现程度不同的神经功能障碍(P0.05)。2、脑梗死体积测定:TTC染色后,肉眼观Sham组脑组织呈红色,无脑梗死。与Sham组比较,I/R组,LIPC组,3-MA组均出现程度不同的脑梗死(P<0.05),梗死区为白色,其中I/R组的梗死区面积最大。与I/R组比较,LIPC组脑梗体积显著减小(P<0.05);与LIPC组比较,3-MA组脑梗体积减小(P<0.05)。3、病理形态学观察:HE染色后,使用光学显微镜进行观察,Sham组细胞形态呈圆形或椭圆形,间隙正常,胞膜完整,胞核清晰、居中,胞质可见尼氏小体。与Sham组比较,I/R组细胞呈急性缺血性改变,胞质为深红染,细胞缩小变形,胞核固缩,胞质内尼氏小体消失(P<0.05)。与I/R组比较,LIPC组脑组织病理学改变明显减轻(P<0.05);与LIPC组比较,3-MA组细胞损伤减轻(P<0.05)。4、脑缺血再灌注后各组自噬相关蛋白Beclin-1、Cathepsin B的表达:与Sham组比较,I/R组Beclin-1、Cathepsin B的蛋白表达明显增强(P<0.05);与I/R组比较,LIPC组Beclin-1、Cathepsin B的蛋白表达明显减弱(P<0.05);与LIPC组比较,3-MA组Beclin-1、Cathepsin B蛋白表达减弱(P<0.05)。结论:(1)I/R能够激活自噬,造成脑组织的损伤。(2)LIPC可能通过逆转自噬相关蛋白Beclin-1、Cathepsin B的过高表达,对IRI大鼠发挥保护作用。(3)自噬抑制剂3-MA能够增强LIPC的脑保护作用。

关键词：脑缺血肢体缺血预处理自噬 Beclin-1 Cathepsin B

分类树模型在缺血性脑卒中危险因素筛选中的应用研究

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中华危重病急救医学 2018年第10期30卷 973-977页

作者：姚爽李浩刘开祥冷光朋于健桂林医学院附属医院内分泌科广西壮族自治区桂林541001 桂林医学院附属医院神经内科广西壮族自治区桂林541001 桂林医学院第二附属医院神经内科广西壮族自治区桂林541100

目的应用分类树模型构建缺血性脑卒中（IS）发病风险的预测模型,并评价其应用价值.方法采取整群抽样的方法,选取2017年1月至12月桂林医学院附属医院临床资料完善的858例IS患者（IS组）,并选择同期与IS患者性别、年龄相匹配的844例健康... 详细信息

目的应用分类树模型构建缺血性脑卒中（IS）发病风险的预测模型,并评价其应用价值.方法采取整群抽样的方法,选取2017年1月至12月桂林医学院附属医院临床资料完善的858例IS患者（IS组）,并选择同期与IS患者性别、年龄相匹配的844例健康体检者作为对照（健康对照组）,比较分析两组人群的代谢特征.应用分类树模型构建IS发病风险的预测模型,并采用增益图、索引图、错分概率Risk值和受试者工作特征曲线（ROC）评价该模型的应用价值.结果与健康对照组比较,IS组患者体重指数（BMI）、空腹血糖（FPG）、三酰甘油（TG）、总胆固醇（TC）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）水平明显升高〔BMI（kg/m2）：25.34±3.70比24.24±3.10,FPG（mmol/L）：6.79±2.89比5.73±1.17,TG（mmol/L）：1.62±1.06比1.44±1.06,TC（mmol/L）：4.70±2.73比4.35±0.79,LDL-C（mmol/L）：3.18±0.94比2.73±0.73,均P＜0.01〕,高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）水平明显降低（mmol/L：1.12±0.33比1.35±0.36,P＜0.01）,高血压及有吸烟史、饮酒史的比例明显升高（69.0%比41.9%,23.1%比16.8%,19.2%比13.4%,均P＜0.01）.对各因素赋值〔IS：无为0,有为1;BMI：＜24.0 kg/m2为0,≥24.0 kg/m2为1;FPG：＜7.0 mmol/L为0,≥7.0 mmol/L为1;TG：＜2.26 mmol/L为0,≥2.26 mmol/L为1;TC：＜6.22 mmol/L为0,≥6.22 mmol/L为1;LDL-C：＜4.14 mmol/L为0,≥4.14 mmol/L为1;HDL-C：＜1.04 mmol/L为0,≥1.04 mmol/L为1 ;高血压：无为0,有为1 ;吸烟史：无为0,有为1 ;饮酒史：无为0,有为1〕,建立分类树模型分析IS的危险因素,得出分类树模型共包括4层（第一层为高血压,第二层为FPG和HDL-C,第三层为HDL-C和FPG,第四层为LDL-C和吸烟史）、17个结点,最终筛选出5个解释变量,即高血压、FPG、HDL-C、LDL-C、吸烟史.树的第一层显示,高血压人群IS的发生概率（62.6%）明显高于无高血压人群（35.2%）.树的第二层显示,在有高血压人群中,HDL-C≥1.04 mmol/L者的IS发生概率（53.6%）低于HDL-C＜1.04 mmol/L者（78.5%）;在无高血压人群中,FPG≥7.0 mmol/L者的IS发生概率（71.1%）明显高于FPG＜7.0 mmol/L者（28.3%）.树的第三层显示,在无高血压、FPG＜7.0 mmol/L的人群中,HDL-C≥1.04 mmol/L者的IS发生概率（21.8%）低于HDL-C＜1.04 mmol/L者（48.7%）;在有高血压、HDL-C≥1.04 mmol/L的人群中,FPG≥7.0 mmol/L者的IS发生概率（78.6%）明显高于FPG＜7.0 mmol/L者（46.7%）.树的第四层显示,在无高血压、FPG＜7.0 mmol/L和HDL-C≥1.04 mmol/L的人群中,LDL-C≥4.14 mmol/L者的IS发生概率（53.8%）高于LDL-C＜4.14 mmol/L者（19.0%）;在无高血压、FPG＜7.0 mmol/L和HDL-C＜1.04 mmol/L的人群中,吸烟者的IS发生概率（76.9%）高于非吸烟者（39.1%）;在有高血压、HDL-C≥1.04 mmol/L和FPG＜7.0 mmol/L的人群中,LDL-C≥4.14 mmol/L者的IS发生概率（72.5%）高于LDL-C＜4.14 mmol/L者（44.4%）.IS分类树模型增益图显示增益值从0%开始先向100%快速增长后趋于平稳,索引图显示索引值从100%以上开始沿移动方向保持平稳状态,然后快速向100%下降,说明该模型良好.分类树模型错分概率Risk值为0.291,表明该模型对IS患者危险因素预测正确率是70.9%.分类树模型预测IS危险因素的ROC曲线下面积（AUC）为78.0%〔95%可信区间（95%CI）＝75.9%-79.9%,P＜0.001〕,敏感度为62.5%（95%CI＝59.1%-65.7%）,特异度为79.4%（95%CI＝76.5%-82.1%）.结论分类树模型能有效拟合IS患者危险因素的预测,其中高血压、高血糖、高LDL-C、吸烟史是IS的主要危险因素.

关键词：缺血性脑卒中分类树危险因素预测模型

通窍通络方治疗蛛网膜下腔出血后脑血管痉挛疗效及对血管内皮功能的影响

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现代中西医结合杂志 2023年第1期32卷 84-87页

作者：李偲姚弘毅魏传可冷光朋刘珊珊李燕霞华中科技大学同济医学院附属梨园医院湖北武汉430070 桂林医学院第二附属医院广西桂林541000

目的探讨通窍通络方治疗蛛网膜下腔出血后脑血管痉挛疗效及对血管内皮功能的影响。方法选择2020年3月—2022年5月华中科技大学同济医学院附属梨园医院诊治的86例蛛网膜下腔出血后脑血管痉挛患者,随机分为研究组43例和对照组43例。对照... 详细信息

目的探讨通窍通络方治疗蛛网膜下腔出血后脑血管痉挛疗效及对血管内皮功能的影响。方法选择2020年3月—2022年5月华中科技大学同济医学院附属梨园医院诊治的86例蛛网膜下腔出血后脑血管痉挛患者,随机分为研究组43例和对照组43例。对照组给予依达拉奉和尼莫地平治疗,研究组在对照组治疗基础上联合通窍通络方口服,2组均连续治疗2周。比较2组治疗总有效率,观察比较2组治疗前后血清降低素基因相关肽(CGRP)、内皮素-1(ET-1)、血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)水平和脑部中动脉平均血流速度(Vm)、阻力指数(RI)、收缩期峰值流速(PSV)及神经功能缺损NIHSS评分。结果研究组的总有效率为95.4%(41/43),明显高于对照组的81.4%(35/43),差异有统计学意义(P<0.05)。2组治疗后血清CGRP水平均明显高于治疗前(P均<0.05),血清ET-1、AngⅡ水平及Vm、RI、PSV和NIHSS评分均明显低于治疗前(P均<0.05);治疗后研究组血清CGRP水平明显高于对照组(P均<0.05),血清ET-1、AngⅡ水平及Vm、RI、PSV和NIHSS评分均明显低于对照组(P均<0.05)。结论常规西药基础上联合应用通窍通络方治疗蛛网膜下腔出血后脑血管痉挛疗效更好,可明显减轻血管内皮功能损伤,改善脑血流,减轻神经功能损伤。

关键词：通窍通络方蛛网膜下腔出血脑血管痉挛血管内皮功能血流动力学

肢体缺血预处理对脑缺血再灌注损伤大鼠自噬的影响

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中风与神经疾病杂志 2017年第3期34卷 234-237页

作者：冷光朋刘开祥李浩廖小明安祥李偲杨阳桂林医学院附属医院神经内科广西桂林541000 桂林医学院附属第二医院神经内科广西桂林541100

目的探讨肢体缺血预处理对脑缺血再灌注损伤大鼠自噬的影响。方法将60只Wistar大鼠随机分为假手术组(Sham组)、缺血再灌注组(I/R组)、肢体缺血预处理组(LIPC组)、3-甲基嘌呤组(3-MA组),每组15只。制作脑缺血再灌注、肢体缺血预处理及3-M... 详细信息

目的探讨肢体缺血预处理对脑缺血再灌注损伤大鼠自噬的影响。方法将60只Wistar大鼠随机分为假手术组(Sham组)、缺血再灌注组(I/R组)、肢体缺血预处理组(LIPC组)、3-甲基嘌呤组(3-MA组),每组15只。制作脑缺血再灌注、肢体缺血预处理及3-MA干预大鼠模型,在脑缺血2 h再灌注24 h后进行神经功能缺陷评分和脑梗死体积测定,HE染色观察细胞形态学改变,Western Bloting法检测自噬相关蛋白Beclin-1、Cathepsin B的表达。结果与I/R组比较,LIPC组神经功能缺陷评分降低(P<0.05),脑梗体积明显减小(P<0.05),细胞损伤、坏死减轻(P<0.05),Beclin-1、Cathepsin B的蛋白表达明显减弱(P<0.05)。结论 LIPC对缺血再灌注损伤大脑具有保护作用,其机制可能与减弱自噬水平有关。

关键词：脑缺血肢体缺血预处理自噬 Beclin-1 Cathepsin B

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华夏医学 2018年第1期31卷 1-4页

作者：杨阳冷光朋韦家俊吴岚李浩刘开祥桂林医学院附属医院神经内科广西桂林541000

目的:探讨自噬的激活在缺血再灌注损伤中的作用。方法:将45只Wistar大鼠随机分为假手术组(Sham组)、缺血再灌注组(I/R组)、雷帕霉素组(RAPA组),每组15只。制作大脑中动脉缺血再灌注、缺血再灌注+雷帕霉素干预大鼠模型,脑缺血2 h后再灌注... 详细信息

目的:探讨自噬的激活在缺血再灌注损伤中的作用。方法:将45只Wistar大鼠随机分为假手术组(Sham组)、缺血再灌注组(I/R组)、雷帕霉素组(RAPA组),每组15只。制作大脑中动脉缺血再灌注、缺血再灌注+雷帕霉素干预大鼠模型,脑缺血2 h后再灌注,24 h后进行神经功能缺损评分、HE染色观察细胞病理学改变、Western Blot法检测自噬相关蛋白Beclin-1和Cathepsin B的表达。结果:RAPA组的Beclin-1及Cathepsin B表达高于I/R组,神经功能缺损程度低于I/R组,差异有统计学意义(P<0.01),细胞坏死程度减轻。结论:雷帕霉素激活自噬对缺血再灌注大鼠有明显的神经保护作用,这种保护作用与Beclin-1和Cathepsin B表达有关。

关键词：脑缺血再灌注自噬 Beclin-1 Cathepsin B

肢体缺血后处理通过Nrf2/ARE通路对大鼠脑缺血再灌注损伤的影响

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广西医学 2017年第7期39卷 1029-1031,1034页

作者：安祥阳昀刘开祥李浩冷光朋李偲廖小明桂林医学院第二附属医院神经内科广西桂林市541001 桂林医学院附属医院神经内科广西桂林市541000

目的探讨肢体缺血后处理通过核转录因子红细胞系相关因子-2(Nrf2)/抗氧化反应元件(ARE)通路对大鼠脑缺血再灌注损伤(CIRI)的影响。方法 45只大鼠随机分为假手术组(S组)、缺血再灌注组(I/R组)、肢体缺血后处理组(Lpost C组)3组,每组15只... 详细信息

目的探讨肢体缺血后处理通过核转录因子红细胞系相关因子-2(Nrf2)/抗氧化反应元件(ARE)通路对大鼠脑缺血再灌注损伤(CIRI)的影响。方法 45只大鼠随机分为假手术组(S组)、缺血再灌注组(I/R组)、肢体缺血后处理组(Lpost C组)3组,每组15只。分别建立I/R组、Lpost C组的脑缺血再灌注模型,在该基础上建立Lpost C组的肢体缺血后处理模型。于造模后24 h分别比较三组的神经功能缺损评分、脑梗死体积、脑组织病理形态学、Nrf2和超氧化物歧化酶(SOD)1蛋白表达。结果 S组大鼠无神经功能缺损、脑梗死,Lpost C组神经功能缺损评分和脑梗死体积低于I/R组(均P<0.05);S组脑组织无病理学改变,I/R组呈急性缺血性改变,Lpost C组病理学改变轻于I/R组;I/R组、Lpost C组的Nrf2和SOD1蛋白表达均高于S组,且Lpost C组高于I/R组(均P<0.05)。结论肢体缺血后处理上调大鼠Nrf2和SOD1蛋白表达,通过激活Nrf2/ARE信号通路减轻CIRI。

关键词：肢体缺血后处理脑缺血再灌注损伤 Nrf2/ARE通路超氧化物歧化酶11