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基于衍生化3-氨基-2-恶唑烷酮的夹心酶联免疫分析

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食品科学 2024年第6期45卷 271-276页

作者：张世伟吴会玲周迎春王炳志杨星星杜业刚汤璐冯荣虎郭继平深圳市计量质量检测研究院广东深圳518000 深圳市易瑞生物技术股份有限公司广东深圳518000

建立一种3-氨基-2-恶唑烷酮(3-amino-2-oxazolidinone,AOZ)夹心免疫检测方法。通过1,6-己二醇连接2-硝基-4-羧基苯甲醛和生物素合成针对AOZ的新型衍生试剂。在样品前处理时加入衍生试剂可对AOZ进行衍生,衍生产率为89%。在酶标板上包被抗... 详细信息

建立一种3-氨基-2-恶唑烷酮(3-amino-2-oxazolidinone,AOZ)夹心免疫检测方法。通过1,6-己二醇连接2-硝基-4-羧基苯甲醛和生物素合成针对AOZ的新型衍生试剂。在样品前处理时加入衍生试剂可对AOZ进行衍生,衍生产率为89%。在酶标板上包被抗AOZ单克隆抗体并以辣根过氧化物酶标记的亲和素或抗生物素抗体作为第二结合物可实现AOZ的夹心酶联免疫吸附检测(enzyme-linked immunosorbnent assay,ELISA)。从实际应用的角度,得到双抗夹心和抗体-亲和素夹心模式下两个表位的极限距离,分别为12Å和13Å,理想距离分别为16Å和17Å。在双抗夹心和抗体-亲和素夹心模式下的检出限分别达到1.8 pg/mL和0.8 pg/mL(以AOZ质量浓度计),相对于竞争ELISA,其灵敏度最高提高了25倍。平均回收率为73%~85%,平均相对标准偏差为9.0%。

关键词： 3-氨基-2-恶唑烷酮夹心酶联免疫分析表位间隔距离辣根过氧化物酶标记亲和素

建筑废弃物对水体有机物和总磷的去除效果及作用方式

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环境保护科学 2024年第2期50卷 117-123页

作者：李文凯朱畅门颖欣冯兴圣冯荣虎刘辉成文虎雷宏伟郑天龙陕西建工第十二建设集团有限公司安康725000 内蒙古工业大学呼和浩特010051 中国科学院生态环境研究中心北京100085

文章通过研究加气块、混凝土、砂浆和红砖4种建筑废弃物对水体有机物和总磷(TP)的去除效果和作用方式发现:4种建筑废弃物均可实现水体中有机物和TP的去除,其中加气块(平均去除率>50%,去除量达0.33 mg/g)和红砖(平均去除率>35%,去除量达0... 详细信息

文章通过研究加气块、混凝土、砂浆和红砖4种建筑废弃物对水体有机物和总磷(TP)的去除效果和作用方式发现:4种建筑废弃物均可实现水体中有机物和TP的去除,其中加气块(平均去除率>50%,去除量达0.33 mg/g)和红砖(平均去除率>35%,去除量达0.22 mg/g)具有较高的有机物去除效果,砂浆(平均去除率>70%,去除量达0.018 mg/g)和加气块(平均去除率超过45%,去除量达0.013 mg/g)具有较高的TP去除效果;4种建筑废弃物均可能通过水合有机物物理吸附的方式去除有机物,加气块、混凝土、砂浆可能通过磷酸钙类沉淀生成型化学吸附方式去除TP,红砖可能通过磷酸铝类表面络合型化学吸附方式去除TP。该研究有助于深化建筑废弃物用于水污染控制的机理认知并帮助改进其技术参数。

关键词：建筑废弃物有机物磷效果机理

烯酰吗啉人工抗原的合成及其ic-ELISA方法的建立

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食品科技 2022年第9期47卷 264-270页

作者：冯荣虎吴会玲王珍妮张恒张世伟广东省深圳市计量质量检测研究院广东深圳518060

目的:旨在建立一种可定量检测果蔬中烯酰吗啉残留的间接竞争酶联免疫吸附检测(Indirect competitive-enzyme linked immunosorbent assay,ic-ELISA)方法。方法:首先合成烯酰吗啉半抗原,通过活泼酯法与钥孔血蓝蛋白(Keyhole limpet hemoc... 详细信息

目的:旨在建立一种可定量检测果蔬中烯酰吗啉残留的间接竞争酶联免疫吸附检测(Indirect competitive-enzyme linked immunosorbent assay,ic-ELISA)方法。方法:首先合成烯酰吗啉半抗原,通过活泼酯法与钥孔血蓝蛋白(Keyhole limpet hemocyanin,KLH)及牛血清白蛋白(Bovine albumin,BSA)偶联获得免疫抗原DMM-KLH和包被抗原DMM-BSA;通过杂交瘤技术获得1株能够稳定分泌烯酰吗啉的单克隆抗体细胞株DMM-2C4,并通过腹水制备大量抗体。建立烯酰吗啉的ic-ELISA检测方法。结果:烯酰吗啉IC_(50)为2.05 ng/mL,检测限为0.35 ng/mL,与其他真菌杀菌剂无交叉反应。在果蔬中的添加回收率为68.3%~115.5%。结论:该方法能有效应用于果蔬中烯酰吗啉的快速检测。

关键词：烯酰吗啉间接竞争酶联免疫吸附法(ic-ELISA) 人工抗原

燕窝唾液酸糖蛋白间接竞争酶联免疫检测方法的建立

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食品安全质量检测学报 2022年第23期13卷 7630-7636页

作者：何金麟王仍瑞张世伟冯荣虎范群艳柳训才徐敦明厦门海关技术中心厦门361026 深圳市计量质量检测研究院深圳518102 厦门市燕之屋丝浓食品有限公司厦门361100

目的建立间接竞争酶联免疫(indirect competitive enzyme linked immunesorbent assay,IC-ELISA)检测燕窝中唾液酸糖蛋白的分析方法。方法以唾液酸糖蛋白为抗原,制备单克隆抗体,对IC-ELISA步骤中相关参数进行优化,确定最佳反应条件。结... 详细信息

目的建立间接竞争酶联免疫(indirect competitive enzyme linked immunesorbent assay,IC-ELISA)检测燕窝中唾液酸糖蛋白的分析方法。方法以唾液酸糖蛋白为抗原,制备单克隆抗体,对IC-ELISA步骤中相关参数进行优化,确定最佳反应条件。结果最佳包被抗原为1:2000,抗体稀释倍数为1:5000;封闭液浓度为1%牛血清白蛋白(bovine serum albumin,BSA),封闭时间为150 min;竞争时间30 min;酶标二抗浓度稀释倍数为1:1000,孵育时间30 min;显色时间为10 min。建立的IC-ELISA检测方法半抑制浓度(50%inhibition concentration,IC_(50))为8.61μg/mL,线性范围为2.23~33.25μg/mL,回收率为82.7%~92.0%,相对标准偏差(relative standard deviation,RSDs)为1.7%~8.9%。结论该方法灵敏度较高、特异性强,可以有效地鉴别假冒伪劣燕窝产品,具有较好的实际应用价值。

关键词：燕窝唾液酸糖蛋白间接竞争酶联免疫分析法

肉眼读取-荧光微球竞争免疫层析法半定量快速检测保健食品中的西布曲明

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食品科学 2021年第8期42卷 313-318页

作者：谭贵良潘子强张世伟胡敏冯荣虎杨懋勋电子科技大学中山学院广东中山528402 深圳市计量质量检测研究院广东深圳518102 广东省生态环境技术研究所广东广州510650 广东江门中医药职业学院广东江门529030

建立一种新型的西布曲明半定量检测方法。通过在检测试纸条上设置4条包被有抗原的检测线,和被测抗原反应后的剩余标记抗体与包被抗原的反应浓度可梯度降低,实现在单一试纸条构建多级灵敏度的免疫反应,从而建立基于波长470 nm手电筒作为... 详细信息

建立一种新型的西布曲明半定量检测方法。通过在检测试纸条上设置4条包被有抗原的检测线,和被测抗原反应后的剩余标记抗体与包被抗原的反应浓度可梯度降低,实现在单一试纸条构建多级灵敏度的免疫反应,从而建立基于波长470 nm手电筒作为激发光源、肉眼读取结果的西布曲明荧光微球竞争免疫层析半定量检测方法。对吐温-20表面活性剂含量、标记抗体量、包被抗原质量浓度、硝酸纤维膜类型和层析反应时间等参数进行优化,通过试纸条上显色条带的数量对西布曲明进行半定量。结果显示,在优化的实验条件下,该检测方法检出限为0.05μg/mL,检测范围为0~9.00μg/mL。该方法无需使用专门的检测仪器,可在15 min内完成检测,其结果与液相色谱-串联质谱法检测结果一致。该方法操作简便、灵敏度高、结果可靠,可用于保健食品中西布曲明非法添加物的定性和半定量筛查分析。

关键词：西布曲明半定量荧光微球免疫层析保健食品

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天然兔源噬菌体单链抗体库的构建与鉴定

生物技术 2012年第1期22卷 31-34页

作者：黄爱玲冯荣虎吕暾李森福州大学生物科学与工程学院福建福州350108 北京师范大学生命科学学院北京市基因工程药物及生物技术重点实验室北京100875

目的:构建天然兔源噬菌体单链抗体库。方法:采用RT-PCR法从未免疫的兔子脾脏中克隆得到抗体重链可变区(VH)与轻链可变区(VL)基因,重叠PCR将VH和VL拼接成scFv片段,将scFv连接到噬菌粒pComb3XSS上,电转入XL1-Blue菌中,得到单链抗体库,并... 详细信息

目的:构建天然兔源噬菌体单链抗体库。方法:采用RT-PCR法从未免疫的兔子脾脏中克隆得到抗体重链可变区(VH)与轻链可变区(VL)基因,重叠PCR将VH和VL拼接成scFv片段,将scFv连接到噬菌粒pComb3XSS上,电转入XL1-Blue菌中,得到单链抗体库,并用此抗体库筛选抗肌酸激酶抗体。结果:构建了容量为4×108,基因重组率95%的单链抗体库,DNA指纹图谱显示抗体库多样性良好。以肌酸激酶为抗原,从该库中筛到3株抗肌酸激酶的抗体。结论:分析表明构建的天然兔源单链抗体库质量良好,可用于快速筛选、制备多种单链抗体。

关键词：噬菌体展示单链抗体兔源抗体库

基于免疫分析的杏仁蛋白饮料中杏仁蛋白质定量方法研究

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河南农业科学 2016年第4期45卷 145-149页

作者：张世伟赖心田王士峰黄静敏冯荣虎谭贵良刘垚杨国武深圳市计量质量检测研究院深圳518102 广东省中山市质量计量监督检测所广东中山528403

为建立基于竞争酶联免疫分析（ELISA）的杏仁蛋白饮料中杏仁蛋白质定量方法,使用2-D电泳结合MALDI-TOF/MS鉴定了杏仁的高丰度蛋白,分离纯化了杏仁40 ku prunin蛋白α链,并以此作为抗原制备了抗杏仁蛋白单克隆抗体,使用该抗体建立了检测... 详细信息

为建立基于竞争酶联免疫分析（ELISA）的杏仁蛋白饮料中杏仁蛋白质定量方法,使用2-D电泳结合MALDI-TOF/MS鉴定了杏仁的高丰度蛋白,分离纯化了杏仁40 ku prunin蛋白α链,并以此作为抗原制备了抗杏仁蛋白单克隆抗体,使用该抗体建立了检测杏仁蛋白质的竞争酶联免疫分析方法。该方法以杏仁可溶全蛋白作为标准品,IC50为19.6μg/m L,线性范围为5.0-100μg/m L（R^2=0.990）。该方法特异性良好,和其他可食种子蛋白质无交叉反应。检测植物蛋白饮料样品的检出限为0.6 mg/m L,相对标准偏差〈10%。使用巴氏杀菌、超高温瞬时灭菌和高压灭菌的蛋白质平均回收率分别为96%、92%和81%。

关键词：杏仁蛋白饮料 ELISA 定量

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牛奶蛋白改性纤维免疫层析快速鉴定方法

产业用纺织品 2019年第4期37卷 44-49页

作者：张世伟王云发王士峰姚添淇冯荣虎杨国武深圳市计量质量检测研究院国家营养食品质量监督检验中心

建立了一种快速、简单、准确的牛奶蛋白改性纤维鉴定方法。使用ESI(Electron Spray Ionization)/TOF(Time of Flight)质谱对牛奶蛋白改性纤维胰蛋白酶解肽进行分析,确定了牛奶蛋白改性纤维特征肽段,使用该特征肽段制备得到特异性单克隆... 详细信息

建立了一种快速、简单、准确的牛奶蛋白改性纤维鉴定方法。使用ESI(Electron Spray Ionization)/TOF(Time of Flight)质谱对牛奶蛋白改性纤维胰蛋白酶解肽进行分析,确定了牛奶蛋白改性纤维特征肽段,使用该特征肽段制备得到特异性单克隆抗体;将酪蛋白包被于T线,建立了针对牛奶蛋白改性纤维的免疫层析快速鉴定方法。该方法以7M尿素为提取剂,检出限为氨基酸质量分数为1.00%的牛奶蛋白改性纤维(相当于混纺4.00%牛奶蛋白改性纤维的纱线),检测时间不超过20min(含前处理)。该方法无需使用分析仪器,对常见的纤维没有非特异性识别,纤维的染色不会对检测结果造成干扰。

关键词：牛奶蛋白改性纤维免疫层析法纤维鉴定特征肽段

基于单克隆抗体的食品中乳酸链球菌素酶联免疫方法

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中国食品添加剂 2017年第8期28卷 166-169页

作者：张世伟冯荣虎王士峰赖心田杨国武深圳市计量质量检测研究院深圳518102

建立了乳酸链球菌素的酶联免疫检测方法。以乳酸链球菌素A偶联牛血清白蛋白作为抗原制备了单克隆抗体,该抗体能等同识别乳酸链球菌素A和Z,对其他多肽类抗生素无交叉反应。所建立的乳酸链球菌素检测方法 IC_(50)为0.49μg/mL,线性范围为0... 详细信息

建立了乳酸链球菌素的酶联免疫检测方法。以乳酸链球菌素A偶联牛血清白蛋白作为抗原制备了单克隆抗体,该抗体能等同识别乳酸链球菌素A和Z,对其他多肽类抗生素无交叉反应。所建立的乳酸链球菌素检测方法 IC_(50)为0.49μg/mL,线性范围为0.05μg/mL^5.4μg/mL(y=-0.12ln(x)+0.385,R^2=0.98)。该方法适用于热加工样品的检测,前处理简单,整个检测过程仅需60min,为乳酸链球菌素速测提供了有力的技术手段。

关键词：乳酸链球菌素单克隆抗体酶联免疫分析定量