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应用TALEN技术对兔CCR5基因进行靶向修饰

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遗传 2014年第4期36卷 360-368页

作者：唐成程张全军李小平樊娜娜杨翌全龙泉赖良学吉林大学动物科学学院长春130062 中国科学院广州生物医药与健康研究院广州510530

缺少合适的能够被人免疫缺陷病毒1型（Human immunodeficiency virus 1,HIV-1）感染的动物模型是获得性免疫缺陷综合征/艾滋病（Acquired immunedeficiency syndrome,AIDS）疫苗和药物研发的瓶颈.HIV-1能在野生型兔子中形成持续感染,在... 详细信息

缺少合适的能够被人免疫缺陷病毒1型（Human immunodeficiency virus 1,HIV-1）感染的动物模型是获得性免疫缺陷综合征/艾滋病（Acquired immunedeficiency syndrome,AIDS）疫苗和药物研发的瓶颈.HIV-1能在野生型兔子中形成持续感染,在共表达人CD4和CCR5的兔细胞系中,HIV-1能高效复制,并形成合胞体.若在家兔中高表达人CD4和CCR5,就可能获得研究AIDS的理想动物模型.文章采用高效基因打靶技术—类转录激活因子效应物核酸酶（Transcription activator-like effector nuclease,TALEN）,探讨在家兔CCR5基因位点定点敲入人CD4和CCR5,获得能够感染HIV-1家兔模型的可能性.针对家兔CCR5基因,设计了两对TALENs和一个同源打靶载体,TALEN mRNAs和DNA同源片段显微注射到家兔受精卵中,体外培养3～5 d后,收集24枚胚胎,对胚胎的基因突变情况进行PCR和测序分析.结果显示,在家兔CCR5位点,24枚胚胎均发生了基因敲除,5枚胚胎还发生了人CD4和CCR5基因敲入.该结果为建立艾滋病研究新动物模型奠定了基础.

关键词：类转录激活因子效应物核酸酶(TALEN) 家兔 CCR5基因基因修饰

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猪MSTN基因敲除载体的构建及细胞筛选

中国兽医学报 2013年第1期33卷 142-145,160页

作者：高飞唐成程全龙泉戴祯苏佰通赖良学逄大欣欧阳红生吉林大学畜牧兽医学院吉林长春130062

构建猪肌肉生长抑制素(Myostatin,MSTN)基因的打靶载体并获得敲除MSTN基因的猪胎儿成纤维细胞。以Puro为正筛选基因,白喉毒素-A(DT-A)为负筛选基因。将同源长臂和同源短臂分别插入Puro基因的两侧。同源长短臂分别为4 294bp和1 015bp,定... 详细信息

构建猪肌肉生长抑制素(Myostatin,MSTN)基因的打靶载体并获得敲除MSTN基因的猪胎儿成纤维细胞。以Puro为正筛选基因,白喉毒素-A(DT-A)为负筛选基因。将同源长臂和同源短臂分别插入Puro基因的两侧。同源长短臂分别为4 294bp和1 015bp,定点敲除MSTN基因的部分内含子2和部分外显子3。采用FugeneHD转染法将打靶载体转入37d的猪胎儿成纤维细胞中,转染后的细胞采用嘌呤霉素筛选。结果显示,成功构建了对猪MSTN基因部分区域进行敲除的打靶载体,共得到48个具有药物抗性的细胞克隆,经PCR检测,获得2个正确同源重组的细胞克隆。

关键词：猪 MSTN基因基因敲除打靶载体

新生长白仔猪尾尖成纤维细胞的分离培养及其对猪瘟病毒的易感性分析

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中国兽医学报 2013年第3期33卷 326-329页

作者：武蓉戴祯赵致阳高飞全龙泉逄大欣王铁东涂长春欧阳红生吉林大学畜牧兽医学院吉林长春130062 军事医学科学院军事兽医研究所吉林长春130062

以出生2日龄的正常长白仔猪尾尖组织为材料,通过组织消化法培养获得原代尾尖成纤维细胞。并通过间接免疫荧光法,梯度10倍倍比稀释猪瘟病毒石门株(105.2 TCID50/mL)感染在猪尾尖成纤维细胞,确定尾尖成纤维细胞最佳病毒感染滴度。结果显示... 详细信息

以出生2日龄的正常长白仔猪尾尖组织为材料,通过组织消化法培养获得原代尾尖成纤维细胞。并通过间接免疫荧光法,梯度10倍倍比稀释猪瘟病毒石门株(105.2 TCID50/mL)感染在猪尾尖成纤维细胞,确定尾尖成纤维细胞最佳病毒感染滴度。结果显示,运用组织块消化法能够获得生长状态的原代猪尾尖成纤维细胞,并且细胞对10-3稀释倍数的猪瘟病毒石门株具有适中的感染力。

关键词：猪尾成纤维细胞分离细胞培养转基因动物病毒易感性猪

吴茱萸碱对人胃腺癌细胞SGC-7901作用的研究

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北京中医药大学学报 2011年第2期34卷 115-118页

作者：田秀丽张瑾王小亮王珊史祺云赵广厚全龙泉宋宇吉林大学畜牧兽医学院吉林130062

目的研究吴茱萸碱(Evo)对人胃腺癌(SGC-7901)细胞的作用,并初步探讨其作用机制。方法 MTT法测定Evo的抗肿瘤活性;电镜观察Evo对细胞形态学的影响;琼脂糖凝胶电泳检测Evo对细胞DNA电泳行为的影响;流式细胞技术检测Evo对SGC-7901细胞的抑... 详细信息

目的研究吴茱萸碱(Evo)对人胃腺癌(SGC-7901)细胞的作用,并初步探讨其作用机制。方法 MTT法测定Evo的抗肿瘤活性;电镜观察Evo对细胞形态学的影响;琼脂糖凝胶电泳检测Evo对细胞DNA电泳行为的影响;流式细胞技术检测Evo对SGC-7901细胞的抑制作用和细胞周期的影响。结果一定浓度范围内Evo对SGC-7901细胞的增殖有剂量、时间依赖性抑制作用;透射电镜下可见细胞核染色质边集、核碎裂及凋亡小体;一定浓度的Evo可使细胞基因组DNA电泳出现阶梯状条带;流式细胞仪检测Evo作用后,G0/G1期和S期细胞减少,大量细胞停滞在G2/M期,凋亡细胞增多。结论 Evo对SGC-7901细胞的抑制作用与诱导其凋亡使细胞停滞于G2/M期密切相关。

关键词：吴茱萸碱人胃腺癌细胞抗肿瘤凋亡周期阻滞

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猪MSTN基因敲除载体的构建

猪MSTN基因敲除载体的构建

全国动物生理生化第十二次学术交流会

作者：高飞唐成程全龙泉武蓉戴祯欧阳红生逄大欣吉林大学畜牧兽医学院

MSTN基因是TGF-B超家族的一员,又被成为GDF-8,该基因通过调控肌卫星细胞的活化和自我更新来调控肌肉生长发育,该基因失活时表现出双肌症状。MSTN基因共含有3个外显子和2个内含子,外显子3序列及其编码的氨基酸变异程度小,MSTN基因表达产...

MSTN基因是TGF-B超家族的一员,又被成为GDF-8,该基因通过调控肌卫星细胞的活化和自我更新来调控肌肉生长发育,该基因失活时表现出双肌症状。MSTN基因共含有3个外显子和2个内含子,外显子3序列及其编码的氨基酸变异程度小,MSTN基因表达产物的功能区主要由109个氨基酸组成,编码这一段氨基酸的核苷酸主要集中在外显子3上,其中9个半胱氨酸对该因

关键词：

来源： cnki会议评论

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猪肝脏特异性启动子Alb表达载体的构建

猪肝脏特异性启动子Alb表达载体的构建