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牛轮状病毒的分离鉴定及其双抗体夹心ELISA方法建立

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牛轮状病毒的分离鉴定及其双抗体夹心ELISA方法建立

作者：侯美如黑龙江八一农垦大学

学位级别：硕士

牛轮状病毒（Bovine Rotavirus,BRV）属于呼肠孤病毒科（Reoviridae）轮状病毒属（Rotavirus）,为双股RNA病毒,共分11个节段,是引起犊牛病毒性腹泻的主要病原之一。该病多发生于1月龄以内的犊牛。犊牛感染后表现为精神沉郁、食欲废绝、... 详细信息

牛轮状病毒（Bovine Rotavirus,BRV）属于呼肠孤病毒科（Reoviridae）轮状病毒属（Rotavirus）,为双股RNA病毒,共分11个节段,是引起犊牛病毒性腹泻的主要病原之一。该病多发生于1月龄以内的犊牛。犊牛感染后表现为精神沉郁、食欲废绝、水样腹泻、严重脱水、酸中毒,甚至死亡。2008年11月至2009年4月,在大庆某牧场共收集140份新生牛腹泻样品,经A群轮状病毒抗原检测试剂盒确定为阳性的样品,处理后接种于MA104细胞,盲传数代后分离到一株牛轮状病毒。该分离毒于第九代出现明显的细胞病变。随着传代次数的增加,该分离毒出现细胞病变的时间提前,细胞病变程度亦随之加剧。病毒在MA104细胞上传至第11代时测得TCID50为10/0.1mL。该病毒对5-碘脱氧尿核苷、酸、氯仿、乙醚均不敏感,不耐热,50℃加热60min可被完全灭活,Mg对该病毒不具有保护作用;该病毒能被BRV参考株阳性血清中和;应用特异性引物,通过RT-PCR检测方法从病毒细胞培养物中扩增出BRV VP7基因中1 062bp的特异性片段,此片段与GenBank中BRV毒株G10型VP7基因相应片段的核苷酸序列同源性为95. 4%、95.5%。以上结果表明所分离到的病毒为牛轮状病毒,命名为BRV DQ株。利用差速离心法纯化的牛轮状病毒（BRV）分别免疫鼠和兔,制备了鼠抗BRV和兔抗BRV超免疫血清,并用层析方法进行了纯化,建立了检测BRV的双抗体夹心ELISA方法。该双抗体夹心ELISA的最佳反应条件为:兔抗BRV IgG包被浓度为10μg/mL,鼠抗BRV IgG工作浓度为5μg/mL,样品反应时间60 min,酶标抗体工作浓度为1: 5 000,以ODnm≥0.432作为阳性判定标准。该方法的板间、板内重复性变异系数小于10%,最低检测浓度为1.41μg/mL,并与牛呼吸道合胞体病毒（BRSV）、牛冠状病毒（BCV）和牛传染性鼻气管炎病毒（IBRV）以及空肠弯曲杆菌（Campylobacter jejuni, Cj）、产肠毒素性大肠杆菌（Enterotoxigenic ***,ETEC）等病原无交叉反应。用建立的ELISA方法与BRV RT-PCR方法同时检测40份临床粪便样品,符合率达到95%。结果表明,建立的双抗体夹心ELISA方法具有较好的特异性和较高的敏感性,可用于BRV的快速检测。本研究利用MA104细胞成功分离牛轮状病毒,并建立了双抗体夹心ELISA诊断方法,为牛轮状病毒诊断试剂盒的研制和深入开展病原学研究奠定了基础。

关键词：牛轮状病毒分离鉴定双抗体夹心ELISA 检测

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一例猪伪狂犬病感染的诊治

黑龙江畜牧兽医（下半月） 2017年第6期 139-140页

作者：侯美如刘宇王岩秦平伟尹珺伊史同瑞黑龙江省兽医科学研究所黑龙江齐齐哈尔161006

猪伪狂犬病又名狂痒病，也称猪疱疹病毒病、奥其基氏病、阿捷申氏病，为一种猪和其他动物共患的急性传染病，以发热、奇痒（猪除外）、脑脊髓炎为特征性症状。成年猪常为隐性感染，可引起流产、产死胎及呼吸道症状，哺乳仔猪除呈脑脊髓... 详细信息

猪伪狂犬病又名狂痒病，也称猪疱疹病毒病、奥其基氏病、阿捷申氏病，为一种猪和其他动物共患的急性传染病，以发热、奇痒（猪除外）、脑脊髓炎为特征性症状。成年猪常为隐性感染，可引起流产、产死胎及呼吸道症状，哺乳仔猪除呈脑脊髓炎和败血综合征外，还可侵害消化系统。且该病可以感染人，但不引起死亡。

关键词：猪伪狂犬病隐性感染呼吸道症状诊治脑脊髓炎疱疹病毒病急性传染病哺乳仔猪

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奶牛乳房炎抗菌中药及组方筛选的试验

黑龙江畜牧兽医（下半月） 2015年第6期 125-127页

作者：周庆民徐馨冯万宇侯美如黄健黑龙江省兽医科学研究所黑龙江齐齐哈尔161006

奶牛乳房炎发生广泛,发病率高,不易治愈,经济损失严重。用抗生素治疗产生的耐药性、菌株变异、药物残留等不良反应大,已不适合现代奶牛生产和食品安全的需要,临床开始选用低毒、无药物残留、无耐药性、不能产生菌株变异的中草药对奶牛... 详细信息

奶牛乳房炎发生广泛,发病率高,不易治愈,经济损失严重。用抗生素治疗产生的耐药性、菌株变异、药物残留等不良反应大,已不适合现代奶牛生产和食品安全的需要,临床开始选用低毒、无药物残留、无耐药性、不能产生菌株变异的中草药对奶牛乳房炎进行治疗,并取得了较好效果[1-4]。

关键词：牛乳房炎抗菌中药无乳链球菌现代奶牛中药制剂金黄色葡萄球菌中药组方抑制作用抑菌圈直径细菌数

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益生菌保护剂的筛选与优化

黑龙江畜牧兽医 2016年第9期 208-211页

作者：王岩侯美如刘宇尹珺伊秦平伟史同瑞黑龙江省兽医科学研究所黑龙江齐齐哈尔161006

益生菌是由一种或多种微生物组成的活菌制剂，人和动物食用后能通过改善宿主本身菌群的组成，从而提高人和动物的健康。动物食用一定数量的益生菌有助于建立畜禽正常微生态区系，使其在畜禽体内成为优势菌群，抑制畜禽体内有害微生物的... 详细信息

益生菌是由一种或多种微生物组成的活菌制剂，人和动物食用后能通过改善宿主本身菌群的组成，从而提高人和动物的健康。动物食用一定数量的益生菌有助于建立畜禽正常微生态区系，使其在畜禽体内成为优势菌群，抑制畜禽体内有害微生物的生长，有效改善宿主体内的微生态环境，调节机体免疫力，从而使其在促进动物生长、防治疾病、提高生产性能和降低饲养成本等方面发挥重要作用。

关键词：益生菌保护剂动物生长微生物组成微生态环境优化筛选优势菌群

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解淀粉芽孢杆菌发酵黄芪培养基的筛选与优化

黑龙江畜牧兽医 2017年第11期 214-217页

作者：史同瑞刘宇侯美如王岩尹伊陈楠楠王刚黑龙江省兽医科学研究所黑龙江齐齐哈尔161006

为了筛选与优化解淀粉芽孢杆菌固态发酵黄芪培养基,试验以菌生长量为指标,采用单因子试验对菌株适宜发酵培养基成分进行筛选;采用二次正交旋转组合试验设计及响应面法对黄芪固态发酵培养基进行优化。结果表明:最适发酵培养基成分为黄芪... 详细信息

为了筛选与优化解淀粉芽孢杆菌固态发酵黄芪培养基,试验以菌生长量为指标,采用单因子试验对菌株适宜发酵培养基成分进行筛选;采用二次正交旋转组合试验设计及响应面法对黄芪固态发酵培养基进行优化。结果表明:最适发酵培养基成分为黄芪、黄豆粉和CaCO_3,用其分别替代基础培养基中相应营养物质,然后接种解淀粉芽孢杆菌,37℃、150 r/min振荡培养24 h,细菌菌数分别为6.50×10~9,5.17×10~9,5.07×10~9cfu/mL。优化的固态发酵培养基为黄芪粉30%、黄豆粉10%、CaCO_30.2%、水59.8%,37℃发酵培养72 h,发酵物中活菌数达到7.67×10~8cfu/g。说明优化的黄芪固态发酵培养基适合解淀粉芽孢杆菌生长,筛选的培养基原材料符合固态发酵产业化生产条件。

关键词：黄芪降纤维素酶解淀粉芽孢杆菌中药发酵固态发酵培养基筛选

发酵黄芪对蛋鸡生产性能、蛋品质及抗氧化能力的影响

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黑龙江畜牧兽医 2018年第18期 166-168页

作者：史同瑞尹珺伊侯美如王岩刘宇陈楠楠黑龙江省兽医科学研究所

黄芪是临床上较为常用的补气中草药之一,含有多糖、黄酮、皂苷、生物碱等多种生物活性物质,具有益气固表、敛汗固脱、托疮生肌、利水消肿之功效。现代医学研究表明,黄芪具有增强机体免疫力、抗炎、抗肿瘤等药理活性及保健功效[1]。黄芪... 详细信息

黄芪是临床上较为常用的补气中草药之一,含有多糖、黄酮、皂苷、生物碱等多种生物活性物质,具有益气固表、敛汗固脱、托疮生肌、利水消肿之功效。现代医学研究表明,黄芪具有增强机体免疫力、抗炎、抗肿瘤等药理活性及保健功效[1]。黄芪为豆科植物,其细胞壁是由纤维素、半纤维素、果胶质和木质素等成分构成的致密结构。黄芪的有效成分大多包裹在致密的细胞壁内,提纯时不易析出。

关键词：抗氧化能力黄芪生产性能蛋品质蛋鸡发酵生物活性物质保健功效

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乳头药浴涂膜剂对奶牛乳房炎的临床疗效

畜牧与兽医 2015年第9期47卷 91-94页

作者：周庆民冯万宇徐馨侯美如黄健黑龙江省兽医科学研究所黑龙江齐齐哈尔161006

为观察乳头药浴涂膜剂对奶牛隐性乳房炎的预防效果,选择隐性乳房炎奶牛60头,随机分为5组,每组12头。试验Ⅰ组为对照组,Ⅱ组为4%次氯酸钠组,Ⅲ组为0.5%洗必泰组,Ⅳ组为1%碘伏组,Ⅴ组为药浴涂膜剂浸组。在第0、30、60、90天采用SCC法和CM... 详细信息

为观察乳头药浴涂膜剂对奶牛隐性乳房炎的预防效果,选择隐性乳房炎奶牛60头,随机分为5组,每组12头。试验Ⅰ组为对照组,Ⅱ组为4%次氯酸钠组,Ⅲ组为0.5%洗必泰组,Ⅳ组为1%碘伏组,Ⅴ组为药浴涂膜剂浸组。在第0、30、60、90天采用SCC法和CMT法检测牛乳中体细胞数,并记录临床型奶牛乳房炎的发病数和发病率,同时记录各组奶牛泌乳总量和平均泌乳量。结果:同对照组相比,各试验组均能显著降低隐性乳房炎病牛体细胞数,且对奶牛乳脂、乳蛋白、乳糖及乳汁p H值、比重、日均泌乳量几乎没有影响。用于预防奶牛隐性乳房炎时,试验Ⅲ、Ⅴ的效果高于试验Ⅱ、Ⅳ组,差异显著(P<0.05)。在进行奶牛隐性乳房炎临床治疗试验时,试验Ⅴ组对隐性乳房炎的治愈率和有效率分别为77.78%、88.89%,远高于其他各组。结论:奶牛乳头药浴涂膜剂是一种更适合于进行临床防治奶牛隐性乳房炎的新型奶牛药浴药物,对临床型奶牛乳房炎有较好的预防效果,可以作为预防类药物用于奶牛生产中,降低奶牛乳房炎的发生率。

关键词：奶牛乳房炎乳头药浴涂膜剂预防乳成分泌乳量

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奶牛乳头药浴涂膜剂膜材的筛选

黑龙江畜牧兽医（下半月） 2015年第4期 121-122页

作者：周庆民徐馨冯万宇侯美如黄健黑龙江省兽医科学研究所黑龙江齐齐哈尔161006

成膜材料的选择是涂膜剂制备成功的关键因素之一,是成膜剂质量控制的主要指标[1-6]。试验选择成膜性、柔软性、稳定性、安全性均较好的聚乙烯醇（PVA）[7]、聚乙烯吡咯烷酮（PVP）[8]、丙烯酸树脂[9]和卡波姆[10]4种应用较广泛的药用合... 详细信息

成膜材料的选择是涂膜剂制备成功的关键因素之一,是成膜剂质量控制的主要指标[1-6]。试验选择成膜性、柔软性、稳定性、安全性均较好的聚乙烯醇（PVA）[7]、聚乙烯吡咯烷酮（PVP）[8]、丙烯酸树脂[9]和卡波姆[10]4种应用较广泛的药用合成高分子材料综合考察成膜时间、黏度、抗张强度和药物分布均匀度4项指标,现将结果报道如下。1材料与方法1.1主要试剂PVA,购自广州市淇盛化工有限公司;

关键词：乳头药浴涂膜剂合成高分子材料药物分布成膜材料综合考察柔软性膜性乳头管牛乳房炎

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奶牛乳头药浴涂膜剂的制备与质量控制

黑龙江畜牧兽医（下半月） 2015年第5期 128-129页

作者：周庆民徐馨冯万宇侯美如黄健黑龙江省兽医科学研究所黑龙江齐齐哈尔161006

将制备工艺简单、所需生产机械设备简单、不用裱背材料、且使用方便的药浴涂膜剂[1-4]应用到奶牛乳房炎的防治突显了许多优势：药浴涂膜剂可在奶牛乳头表面迅速形成保护膜隔离保护创面,既能广谱高效杀灭乳头上的细菌和病毒,又能阻止病... 详细信息

将制备工艺简单、所需生产机械设备简单、不用裱背材料、且使用方便的药浴涂膜剂[1-4]应用到奶牛乳房炎的防治突显了许多优势：药浴涂膜剂可在奶牛乳头表面迅速形成保护膜隔离保护创面,既能广谱高效杀灭乳头上的细菌和病毒,又能阻止病原微生物通过乳头管口侵入乳腺组织[5-8];还能促进乳眼快速闭合,以减少感染机会,护理乳眼,防御乳头感染;还能修复黏膜、皮肤,促进恢复.

关键词：乳头药浴乳头管牛乳房炎涂膜剂药物分布病原微生物机械设备广谱高效成膜材料隔离保护