检索结果-南通市图书馆

作者：侯红芬南京师范大学

学位级别：硕士

猪链球菌(Streptococcus suis,***)是一种重要的新现人兽共患病病原体,根据***荚膜多糖抗原的不同,可将其分为35种血清型,不同血清型之间的毒力不同,其中2型猪链球菌(Streptococcus suis 2,*** 2)致病性最强。人被感染后可导致脑膜炎、... 详细信息

猪链球菌(Streptococcus suis,***)是一种重要的新现人兽共患病病原体,根据***荚膜多糖抗原的不同,可将其分为35种血清型,不同血清型之间的毒力不同,其中2型猪链球菌(Streptococcus suis 2,*** 2)致病性最强。人被感染后可导致脑膜炎、心内膜炎以及败血症,严重者则因感染性休克而死亡。据报道,*** 2导致的中毒性休克综合征感染人的死亡率可达20%。因此研究*** 2的致病机理显得至关重要。课题组前期完成了对*** 2中国强毒株05ZYH33全基因组测序及基因功能注释,通过同源序列比对发现在*** 2中存在一种与细胞分裂及磷酸化调控相关的蛋白GpsB,编码基因为05SSU＿0417,该基因在多种病原菌中具有重要作用,与细菌毒力相关,而GpsB在*** 2中的生物学功能尚不清楚。因此开展GpsB生物学功能的研究,对于揭示*** 2分子致病机制具有重要意义。本研究的主要内容与结果如下:***基因的生物信息学分析用EditSep软件对基因进行一般特性分析发现,gpsB基因全长333bp,位于DNA正义链上;用BLAST对gpsB基因进行同源性检索及多序列比对分析发现,gpsB基因在***中高度保守;用Signal等在线网站对GpsB蛋白的信号肽及跨膜区进行预测发现,GpsB蛋白不存在信号肽、跨膜区;对gpsB基因结构及保守结构域进行分析并预测其三级结构,GpsB蛋白主要由α螺旋和无规卷曲组成。***蛋白的原核表达及多克隆抗体的制备设计gpsB基因上下游引物,以*** 2 05ZYH33全基因组DNA为模板扩增出目的片段,目的片段经双酶切、割胶回收等步骤,连接到载体PET32a上,构建出重组表达载体PET32a-gpsB,将重组表达载体PET32a-gpsB转化至感受态细胞BL21(DE3)感受态细胞中,获得GpsB蛋白重组表达菌株。采取IPTG诱导诱导重组蛋白表达,经镍离子亲和层析柱纯化蛋白,Western blot鉴定结果显示获得的重组蛋白rGpsB能特异性识别His-Tag单克隆抗体,经蛋白浓缩管浓缩后用于多克隆抗体的制备。获得的重组rGpsB蛋白免疫六周龄雌性BALB/c小鼠,制备多克隆抗体,ELISA方法测得小鼠血清效价为1:204800,制备的多克隆抗体能特异性识别GpsB蛋白。3.2型猪链球菌gpsB基因敲除株的构建设计gpsB上下游基因引物LA1/LA2、RA1/RA2,以*** 2 05ZYH33基因组为模板分别扩增05SSU-0417基因上下游片段L、R,将片段L、R依次连入载体p UC 18T-Spc构建出重组质粒p UC 18T-LSR,对重组质粒p UC 18T-LSR进行组合PCR及双酶切鉴定。制备*** 2 05ZYH33感受态,利用同源重组的原理将鉴定正确的敲除质粒电转入*** 2 05ZYH33感受态中,经初步筛选、组合PCR及RT-PCR鉴定,获得gpsB基因敲除株,将其命名为(?)gpsB。4.(?)gpsB基因敲除突变株的特性及功能分析对*** 2 05ZYH33和(?)gpsB基因敲除突变株进行生长速率比较,将两菌株的冻存菌过夜培养划线于哥伦比亚血琼脂平板上,观察菌落形态及溶血活性存在的差异,用革兰氏染色、扫描电子显微镜、透射电子显微镜进行两菌株的形态学观察。通过绘制生长曲线发现,相较于野生株,敲除株生长缓慢,进入对数生长期所需时间较长,说明gpsB基因的缺失已严重影响到细菌的生长。对***2 05ZYH33以及基因敲除突变株的菌落形态及溶血观察发现,两者的菌落形态及溶血环并无明显差异,两菌株均呈现出灰白色、湿润、半透明表面光滑等特点且具有溶血环,说明gpsB基因的缺失对菌落形态以及溶血活性并无影响。革兰氏染色结果显示野毒株呈明显的链状结构,排列整齐,而基因敲除突变株(?)gpsB只有少数菌有明显的链状结构,突变株链状结构不明显,细菌聚集成团。在扫描电镜下,突变株细菌链长增加,细胞分裂隔膜不明显。在透射电镜下,细菌隔膜形成异常,导致细菌不均等分裂,说明gpsB的缺失对*** 2 05ZYH3的形态及细胞间互作有所影响。综上所述,本研究通过构建重组表达载体,成功诱导表达、纯化出GpsB蛋白,蛋白主要存在于上清中。对蛋白进行了Western blot鉴定蛋白能特异性识别His-Tag单克隆抗体。利用GpsB蛋白免疫BALB/c小鼠,得到的多克隆抗体能特异性识别GpsB蛋白,效价为1:204800。成功构建出敲除质粒,根据同源重组的原理将敲除质粒电转入*** 2 05ZYH33感受态,经过鉴定,成功获得gpsB基因敲除株。

关键词： 2型猪链球菌 GpsB 多克隆抗体基因敲除

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园林绿化施工技术及养护措施探究

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花卉 2022年第16期 16-18页

作者：侯红芬李仁敏东营市垦利区城市管理局山东东营257500

在经济高速发展的情况下,群众生活水平有了明显提升,群众更加重视环境绿化工作。在园林绿化工程开展中,若想保证自身建设质量,需要对已有的施工技术进行改进,做好养护管理工作,确保技术更新效果,明确养护管理的重点内容,将绿化施工技术... 详细信息

在经济高速发展的情况下,群众生活水平有了明显提升,群众更加重视环境绿化工作。在园林绿化工程开展中,若想保证自身建设质量,需要对已有的施工技术进行改进,做好养护管理工作,确保技术更新效果,明确养护管理的重点内容,将绿化施工技术和养护技术合理融合。从城市建设角度来看,绿化建设工程是不可缺少的重要内容,只有重视绿化施工技术研究,提升养护工作质量,才能确保工程顺利发展,预防出现工程耗损问题。基于此,本文对园林绿化施工中的相关技术进行了探讨,以期提升养护管理水平。

关键词：园林绿化施工技术研究养护措施研究

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盐碱地绿化树种的选择探究

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居业 2017年第12期 53-53,55页

作者：牛丛丛侯红芬东营市垦利区城市管理局山东东营257500

众所周知,园林绿化植物具有很强的适应性,能够利用其自身的新陈代谢能力起到改善周边环境的作用。尤其是在部分生境条件较为恶劣的区域如盐碱地等区域进行园林绿化时,如何选择适合该地区特殊生境条件的植物品种成为了决定绿化项目成功... 详细信息

众所周知,园林绿化植物具有很强的适应性,能够利用其自身的新陈代谢能力起到改善周边环境的作用。尤其是在部分生境条件较为恶劣的区域如盐碱地等区域进行园林绿化时,如何选择适合该地区特殊生境条件的植物品种成为了决定绿化项目成功与否的关键。本文从研究盐碱地特殊生境条件入手,通过对盐碱地绿化树种选择的基本原则进行简要论述,从而推荐了部分适宜在盐碱地生长的植物品种,以期为盐碱地园林绿化提供技术支持与理论参考。

关键词：盐碱地绿化树种筛选

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2型猪链球菌低分子量酪氨酸磷酸酶的制备及酶学研究

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中国人兽共患病学报 2018年第7期34卷 588-594页

作者：吴倩倩潘秀珍李超龙侯红芬王长军高基民温州医科大学检验医学院生命科学学院温州325000 南京军事医学研究所南京210002

目的表达纯化2型猪链球菌(Streptococcus suis 2,SS2)低分子量酪氨酸磷酸酶(Low molecular weight protein tyrosine phosphatase,LMW-PTP),测定LMW-PTP磷酸酶活性并鉴定其酶活性位点,为后续的功能鉴定奠定基础。方法分别构建野生型LMW-PTP基因表达质粒pET28a:LMW-PTP、突变型LMW-PTP基因表达质粒pET28a:LMWPTPC33A和pET28a:LMW-PTPR39A,重组质粒转化*** BL21(DE3),筛选阳性转化子,通过IPTG诱导表达后经SDS-PAGE鉴定表达产物。镍柱亲和层析纯化得到重组蛋白经Western blot鉴定,野生型LMW-PTP免疫新西兰兔制备兔多克隆抗体。以对硝基苯酚二钠六水(PNPP-Na)为底物检测重组蛋白的磷酸酶活性。结果成功构建野生型LMW-PTP基因表达质粒pET28a:LMW-PTP、突变型LMW-PTP基因表达质粒pET28a:LMW-PTPC33A、pET28a:LMW-PTPR39A,在大肠杆菌中野生型和突变型LMW-PTP均以包涵体的形式存在,相对分子量为23kDa,包涵体经镍柱纯化及透析复性获得纯度较高的野生型和突变型LMW-PTP。制备得到的抗LMW-PTP的兔多克隆抗体的效价为1∶102 400,且重组蛋白均能与His-Tag单抗和兔多抗血清发生反应。对野生型蛋白进行磷酸酶活性检测显示其具有酶活性,酶活为2.1nmol/(min·μg),突变型LMW-PTPC33A、LMW-PTPR39A无磷酸酶活性。结论成功表达了具有磷酸酶活性的LMW-PTP,并鉴定出Cys33和Arg39是LMW-PTP的活性位点。为后续寻找LMW-PTP在2型猪链球菌致病过程中毒力相关的靶蛋白奠定了基础。

关键词： 2型楮链球菌低兮子量酪氧酸磷酸酶原梭表达

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2型猪链球菌细胞分裂蛋白GpsB的原核表达及其鉴定

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中国人兽共患病学报 2019年第3期35卷 201-205页

作者：侯红芬张会芳胡丹郑峰朱旭辉王长军潘秀珍曹祥荣南京师范大学生命科学学院南京210046 南京军事医学研究所南京210002

目的利用原核表达系统诱导表达2型猪链球菌(Streptococcus suis 2,*** 2)分裂相关因子GpsB重组蛋白,为后续研究奠定基础。方法以*** 2菌株05ZYH33全基因组DNA为模板,经PCR扩增得到目的基因片段。目的基因经双酶切后连接至表达载体pET32a... 详细信息

目的利用原核表达系统诱导表达2型猪链球菌(Streptococcus suis 2,*** 2)分裂相关因子GpsB重组蛋白,为后续研究奠定基础。方法以*** 2菌株05ZYH33全基因组DNA为模板,经PCR扩增得到目的基因片段。目的基因经双酶切后连接至表达载体pET32a,转化大肠杆菌(Escherichia coli,***)DH5α感受态细胞。重组质粒经测序鉴定正确后转化*** BL21感受态细胞。获得的重组表达菌经IPTG诱导表达目的蛋白。利用Ni离子亲和层析柱纯化重组蛋白,并进行SDS-PAGE和Western blot鉴定。利用重组蛋白免疫小鼠制备多克隆抗体。结果成功构建出重组表达载体pET32a^(gpsB),并经IPTG诱导表达出目的蛋白。重组蛋白主要存在于表达菌裂解液上清中,分子质量约30 kD,与预期大小一致。Western blot检测发现,该蛋白能被His-Tag单克隆抗体特异性识别。制备的多克隆抗体能特异性识别重组GpsB蛋白(rGpsB)。结论成功表达和纯化了rGpsB并获得了该蛋白的多克隆抗体,为进一步研究该蛋白在*** 2分裂过程中的作用鉴定了基础。

关键词： 2型猪链球菌 GpsB 原核表达多克隆抗体

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阴道B超与腹部B超诊断异位妊娠的价值50例对比分析

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中国农村卫生 2013年第2Z期5卷 241-241页

作者：侯红芬江苏省常州市新北区罗溪镇卫生院江苏常州213136

目的研究两种B超检查在异位妊娠中的诊断作用。方法将100例患者随机分为两组，其中50例行腹部B超检查，标记为对照组，另外50例行阴道口超检查，标记为观察组，比较两者的诊断结果。结果对照组检查结果与手术病理比较，有40例诊断诊断... 详细信息

目的研究两种B超检查在异位妊娠中的诊断作用。方法将100例患者随机分为两组，其中50例行腹部B超检查，标记为对照组，另外50例行阴道口超检查，标记为观察组，比较两者的诊断结果。结果对照组检查结果与手术病理比较，有40例诊断诊断正确，诊断符合率为80％（40／50），观察组有47例诊断正确，诊断符合率为94％（47／50），结果有统计学意义（P〈0．05）。对照组的灵敏度为82．5％，特异度为50％，观察组的灵敏度为93．6％，特异度为66．7％。结论阴道B超在诊断中的确诊率、灵敏性和特异性上均优于腹部B超，在实践中有一定的指导意义。

关键词：阴道B超腹部B超异位妊娠

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2型猪链球菌stk/stp1基因敲除株的构建及特性研究

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医学研究生学报 2018年第5期31卷 453-458页

作者：李超龙张剑吴倩倩侯红芬张会芳王长军曹祥荣潘秀珍南京师范大学生命科学学院南京理学硕士210023 南京军区军事医学研究所南京210002

目的丝/苏氨酸激酶(STK)与丝/苏氨酸磷酸酶(STP)通过对蛋白质的可逆磷酸化调控原核生物的各项生理活动。文中旨在研究2型猪链球菌中国强毒株05ZYH33中、stk/stp1同时缺失对其生物学特性及致病性的影响。方法运用同源重组的方法构建2型... 详细信息

目的丝/苏氨酸激酶(STK)与丝/苏氨酸磷酸酶(STP)通过对蛋白质的可逆磷酸化调控原核生物的各项生理活动。文中旨在研究2型猪链球菌中国强毒株05ZYH33中、stk/stp1同时缺失对其生物学特性及致病性的影响。方法运用同源重组的方法构建2型猪链球菌中国强毒株05ZYH33的stk/stp1基因敲除突变株Δstk/stp1,比较分析野毒株05ZYH33与突变株Δstk/stp1的生物学特性;通过细胞黏附实验、抗吞噬实验以及小鼠感染模型分析stk/stp1缺失对细菌毒力的影响。将30只SPF级BALB/c小鼠,用随机数字表法分成05ZYH33组(注射1 m L野毒株菌液)、Δstk/stp1组(注射1 m L突变株菌液)和THB组(注射1 m L的新鲜THB液体培养基),每组10只。结果 PCR结果显示,stk/stp1基因被壮观霉素抗性基因Spcr替换,突变株构建成功;生物学特性实验表明,05ZYH33和Δstk/stp1在接种2 h后开始缓慢增殖,在7 h时都到达平台期。突变株进入对数生长期(A600≈0.4)的时间比野毒株推迟1 h左右,到达平台期后的菌体密度比野毒株低(0.8 vs 1.0)。05ZYH33和Δstk/stp1在血平板上均长出灰白色、圆形半透明、湿润、表面光滑的细小菌落。菌落周围有明显的β-溶血环,菌落形态和溶血活性无明显变化。小鼠致病性实验显示,05ZYH33组小鼠在12 h内全部死亡,Δstk/stp1组小鼠在12 h内死亡9只,24 h内全部死亡,THB组无发病和死亡症状。结论 stk/stp1同时缺失可能主要影响细菌增殖、分裂相关蛋白的调控。

关键词： 2型猪链球菌基因敲除生物学特性丝/苏氨酸激酶和磷酸酶

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微咸水灌溉与施肥方式对盐碱地水稻生理特性、产量及品质的互作效应

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节水灌溉 2025年

作者：王璐侯红燕胡鑫慧郭洪海贾曦山东省农业科学院山东省农业科学院黄河三角洲现代农业研究院农业农村部盐碱地生物资源与评价利用重点实验室东营黄河三角洲现代农业研究中心

探索黄河三角洲滨海滩涂微咸水与淡水联合灌溉对水稻生理生长特性及品质的影响。以圣香1826为试验材料，设置主区为淡水灌溉（FI，全生育期均灌溉淡水）、微咸水-淡水联合灌溉（BFI，插秧后至分蘖前灌溉淡水，分蘖期至成熟期补灌微咸水... 详细信息

探索黄河三角洲滨海滩涂微咸水与淡水联合灌溉对水稻生理生长特性及品质的影响。以圣香1826为试验材料，设置主区为淡水灌溉（FI，全生育期均灌溉淡水）、微咸水-淡水联合灌溉（BFI，插秧后至分蘖前灌溉淡水，分蘖期至成熟期补灌微咸水）2种灌溉制度；裂区为5种施肥方式T1(常规施肥，当地习惯施肥N 300 kg/hm2)、T2(减N20%，N240 kg/hm2)、T3(减N20%，穗肥增施K，N240 kg/hm2+K36 kg/hm2)、T4(减N20%，蘖肥增施Ca，N240 kg/hm2+Ca18 kg/hm2)、T5(减N20%增施K和Ca，N240 kg/hm2+K36 kg ·hm-2+Ca 18 kg/hm2)。结果表明，BFIT5处理可以显著的延长水稻的营养生长期与生殖生长期，Ca肥补施，使水稻植株Na+含量降低24.35%（P < 0.05）、K+含量提高20.20%、Na+/K+降低、过氧化氢酶（CAT）含量升高13.06%、脯氨酸（Pro）含量升高20.69%、可溶性糖含量升高了9.19%，提高了植株的抗性；BFIT5处理使水稻的有效穗数提高30.1%、穗总粒数提高7.2%、穗实粒数提高38.2%、结实率提高28.9%、产量提高38.2%、稻米的食味值增加6、崩解值升高、消减值降低、蒸煮品质升高。在分蘖期开始浇灌微咸水，且减少常规施氮量的20%、增施K和Ca肥，节约稻田用淡水的同时提高了微咸水资源的利用效率，具有重要的实践意义。

关键词：微咸水灌溉水稻水肥耦合生理特性水肥互作

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浅析园林绿化设计中的植物造景

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农业与技术 2018年第6期38卷 216-216页

作者：侯红芬牛丛丛垦利区城市管理局山东东营257500

本文主要以东营市盐碱地植物造景设计为研究对象,通过对东营地区植物生境特点的简要分析,并以东营市某绿地植物景观设计为例。从其植物造景设计及树种选择的基本原则入手,分析和归纳了绿地不同功能分区的植物造景技法,以期为同行提供借... 详细信息

本文主要以东营市盐碱地植物造景设计为研究对象,通过对东营地区植物生境特点的简要分析,并以东营市某绿地植物景观设计为例。从其植物造景设计及树种选择的基本原则入手,分析和归纳了绿地不同功能分区的植物造景技法,以期为同行提供借鉴和参考。

关键词：植物造景盐碱地设计

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非金属螺杆转子翘曲变形的预补偿方法研究

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合成树脂及塑料 2025年

作者：尹大帅赵永强黑刚刚侯红玲何亚银陕西理工大学机械工程学院陕西省工业自动化重点实验室

针对螺杆转子非金属化注塑成型过程中存在的翘曲变形问题，提出一种基于计算机辅助工程技术的变形预补偿法，以减少塑件的翘曲变形量。运用Moldflow模流分析软件对非金属螺杆转子注塑成型过程进行“冷却+填充+保压+翘曲”分析，确定了... 详细信息

针对螺杆转子非金属化注塑成型过程中存在的翘曲变形问题，提出一种基于计算机辅助工程技术的变形预补偿法，以减少塑件的翘曲变形量。运用Moldflow模流分析软件对非金属螺杆转子注塑成型过程进行“冷却+填充+保压+翘曲”分析，确定了该塑件翘曲变形的主要成因是收缩不均匀和取向不均匀，得到了螺杆转子的翘曲变形量，且最大翘曲变形量出现在齿顶位置。运用变形预补偿法对模具型腔进行修正，螺杆转子的最大翘曲变形量由0.269 9 mm降到了0.136 8 mm，且螺杆转子的齿面翘曲变形量可控制在0.031 0～0.040 6 mm，说明运用变形预补偿法可以对螺杆转子注塑成型的翘曲变形进行有效控制。

关键词：螺杆转子预补偿翘曲变形 Moldflow软件

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