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鰤鱼诺卡氏菌感染乌斑杂交鳢的组织病理学研究

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基因组学与应用生物学 2019年第10期38卷 4439-4446页

作者：王文基陈建林侯素莹鲁义善夏立群广东海洋大学深圳研究院深圳518108 广东海洋大学水产学院湛江524088 广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点实验室湛江524088 广东省水生动物健康评估工程技术研究中心深圳51808

人工养殖乌斑杂交鳢(Channa maculate♀×C.argus♂)受鰤鱼诺卡氏菌(Nocardia seriolae)侵害日益严重,为深入研究该菌的致病机理,鰤鱼诺卡氏菌感染乌斑杂交鳢的感染模型亟待建立。本研究通过对菌液浓度与吸光值、半致死剂量、组织病理... 详细信息

人工养殖乌斑杂交鳢(Channa maculate♀×C.argus♂)受鰤鱼诺卡氏菌(Nocardia seriolae)侵害日益严重,为深入研究该菌的致病机理,鰤鱼诺卡氏菌感染乌斑杂交鳢的感染模型亟待建立。本研究通过对菌液浓度与吸光值、半致死剂量、组织病理学和病理组织切片等方面进行研究。结果表明菌液浓度为4.75×10^4~4.75×10^7 cfu/mL范围时与其吸光值呈线性关系。通过人工感染实验,确定鰤鱼诺卡氏菌感染乌斑杂交鳢的半致死剂量(LD50)为1.52×10^5 cfu/尾。组织病理学分析发现,鰤鱼诺卡氏菌感染乌斑杂交鳢会引起皮肤溃烂、内脏器官肿大,形成白色结节。病理组织切片显示,结节中心呈干酪样坏死,周围有大量细胞浸润。研究结果为建立鰤鱼诺卡氏菌感染乌斑杂交鳢的动物模型及研究鰤鱼诺卡氏菌致病机制提供科学依据。

关键词：鰤鱼诺卡氏菌乌斑杂交鳢人工感染 LD50病理切片

鰤鱼诺卡氏菌感染乌斑杂交鳢的组织病理学研究

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鰤鱼诺卡氏菌感染乌斑杂交鳢的组织病理学研究

鰤鱼诺卡氏菌SOD基因克隆与表达及其酶活性质测定

2018年中国水产学会学术年会

作者：王文基陈建林侯素莹鲁义善夏立群广东海洋大学深圳研究院广东海洋大学水产学院广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点实验室广东省水生动物健康评估工程技术研究中心

人工养殖乌斑杂交鳢(Channa maculate♀×C. argus♂)受鰤鱼诺卡氏菌(Nocardia seriolae)侵害日益严重,为深入研究该菌的致病机理,鰤鱼诺卡氏菌感染乌斑杂交鳢的感染模型亟待建立。本研究通过对菌液浓度与吸光值,半致死剂量,组织病理学... 详细信息

人工养殖乌斑杂交鳢(Channa maculate♀×C. argus♂)受鰤鱼诺卡氏菌(Nocardia seriolae)侵害日益严重,为深入研究该菌的致病机理,鰤鱼诺卡氏菌感染乌斑杂交鳢的感染模型亟待建立。本研究通过对菌液浓度与吸光值,半致死剂量,组织病理学和病理组织切片等方面进行研究。结果表明菌液浓度为4.75×10～4.75×10 cfu/mL范围时与其吸光值呈线性关系。通过人工感染实验,确定鰤鱼诺卡氏菌感染乌斑杂交鳢的半致死剂量(LD50)为1.52×10 cfu/尾。组织病理学分析发现,鰤鱼诺卡氏菌感染乌斑杂交鳢会引起皮肤烂、内脏器官肿大、形成白色结节。病理组织切片显示,结节中心呈干酪样坏死,周围有大量细胞浸润。研究结果为建立鰤鱼诺卡氏菌感染乌斑杂交鳢的动物模型,及研究鰤鱼诺卡氏菌致病机制奠定了基础。

关键词：鰤鱼诺卡氏菌乌斑杂交鳢人工感染 LD50病理切片

来源： cnki会议评论

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基因组学与应用生物学 2019年第11期38卷 4894-4901页

作者：侯素莹黄嘉慧陈建林王文基鲁义善夏立群广东海洋大学深圳研究院深圳518108 广东海洋大学水产学院湛江524088 广东省水生动物健康评估工程技术研究中心深圳518108 广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点实验室湛江524088

鱼类的诺卡氏菌病主要由鰤鱼诺卡氏菌(Nocardia seriolae)引起。为探讨鰤鱼诺卡氏菌的毒力因子及其感染致病机制,本研究通过对鰤鱼诺卡氏菌全基因组序列的分析,发现了一个编码超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)的基因。生物信... 详细信息

鱼类的诺卡氏菌病主要由鰤鱼诺卡氏菌(Nocardia seriolae)引起。为探讨鰤鱼诺卡氏菌的毒力因子及其感染致病机制,本研究通过对鰤鱼诺卡氏菌全基因组序列的分析,发现了一个编码超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)的基因。生物信息学分析显示该基因编码一个分泌蛋白,可能是鰤鱼诺卡氏菌潜在的毒力因子。本研究通过基因克隆获取了鰤鱼诺卡氏菌SOD基因(NsSOD),其长度为624 bp。利用双酶切技术在含有GST标签的原核表达载体pGEX-6P-1中插入NsOD基因片段,成功构建了其重组表达载体并命名为pGEX-SOD。将pGEX-SOD导入大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,获得了原核表达菌株BL21/pGEXSOD并对其诱导表达条件进行了摸索,确定25℃、IPTG(1 mmol/L)诱导14 h,可成功获得具有生物活性的可溶性NsSOD重组蛋白。随后利用GST标签亲和柱纯化NsSOD重组蛋白,并进行酶活性质测定,确定NsSOD重组蛋白的活性为2.76酶活力单位。通过对NsSOD进行基因克隆、原核表达、重组蛋白纯化及体外酶活性质测定,为进一步研究NsSOD的功能和深入了解鰤鱼诺卡氏菌的致病机理奠定了基础。

关键词：鰤鱼诺卡氏菌超氧化物歧化酶原核表达蛋白纯化酶活性质测定

综合超声技术对颈动脉粥样硬化斑块中“络脉亢生”的证候特性的研究

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综合超声技术对颈动脉粥样硬化斑块中“络脉亢生”的证候特性的研...

作者：侯晓莹北京中医药大学

学位级别：硕士

研究目的:①通过超声造影半定量分析结合定量分析,探索颈动脉粥样硬化“络脉亢生”的超声下特征和中医证素分布规律,总结其共性以及差异性。②挖掘颈动脉粥样硬化“络脉亢生”与临床实验室检查、斑块性质等指标的相关性。研究方法:收集2... 详细信息

研究目的:①通过超声造影半定量分析结合定量分析,探索颈动脉粥样硬化“络脉亢生”的超声下特征和中医证素分布规律,总结其共性以及差异性。②挖掘颈动脉粥样硬化“络脉亢生”与临床实验室检查、斑块性质等指标的相关性。研究方法:收集2021年—2022年就诊于北京中医药大学我院脑病科门诊且临床上明确诊断有颈动脉粥样硬化低回声斑块的患者31例。采集患者的一般资料、中医四诊信息和临床症状及体征,依照《证素辨证学》中症状计量值,统计出证素积分,分析颈动脉粥样硬化患者的中医证素分布规律。然后对入组患者进行综合超声评价(包括常规超声评价及超声造影评价),并根据超声结果对斑块内新生血管情况进行半定量分级和定量分析,进一步完成实验室检查,最后将上述数据进行统计分析,挖掘颈动脉粥样硬化病患者中医证素与超声下斑块性质、临床实验室检查等指标的相关性。研究结果:1.入组患者整体一般资料比较:本研究共纳入CAS斑块患者31例,其中年龄者最大者81岁,最小者35岁,平均年龄为:59.65±11.64(岁)。男性患者24例,女性患者7例,男性患者显著多于女性患者。其中有高血压病史者19例(61.29%);糖尿病12例(38.71%);脑血管病事件病史12例(38.71%);冠心病7例(22.58%);吸烟史7例(22.58%);心脑血管病家族史7例(22.58%);高脂血症6例(19.35%);睡眠呼吸暂综合征5例(16.13%)。2.入组患者整体中医证素分布特点:患有颈动脉粥样硬化斑块的患者中最常见的证素为气虚(96.77%),其次为阴虚(93.55%)、血虚(87.10%)、阳虚(77.42%)、气滞(67.74%)、痰(61.29%)。提示动脉粥样硬化进展中,“虚”为重要的始动环节和推进因素。3.有新生血管组与无新生血管组比较:①两组在年龄、性别等一般资料上均无统计学意义(P>0.05)。②有新生血管组与无新生血管组在糖尿病、高血压病史发生率上有统计学意义(P0.05)。③两组患者证素和症状不同,有新生血管组病位证素排名:肾、肝、心神、脾、肺。无新生血管组病位证素排名:肝、肾、心神、脾、肺。有新生血管组病性证素排名:气虚、阴虚、血虚、阳虚、痰。无新生血管组病性证素排名:阳虚、气虚、阴虚、血虚、气滞。④有新生血管组高频症状包括头晕、健忘、睡眠不实、耳鸣、失眠、气短、口苦、心悸、倦怠乏力、心烦、急躁易怒、缓起久病、神疲、情绪易激动、面色萎黄、活动或劳累病重、出虚汗或易出汗、肢体肌肤麻木、腰膝酸软、眼干涩、牙齿松动、头痛、痰少质稠、痰色白、关节肢体活动不利、盗汗。无新生血管组高频症状包括失眠、心悸、头晕、睡眠不实、视物模糊、长期尿频、夜尿多、咽干、心烦、急躁易怒、倦怠乏力、经常畏冷、多梦、健忘、肢体肌肤麻木、头胀及胀痛、气短、口渴、经常便秘、病情与情志有关。⑤两组患者的实验室检查指标中性粒细胞计数与淋巴细胞计数比值(NLR)(P0.05)。4.斑块新生血管超声下特征分析:①新生血管的增强主要发生在斑块肩部;②斑块厚度与新生血管半定量分级有相关性(P素分析:①斑块形态与气虚、痰证素分级之间有相关性(P素分级均有相关性,差距有统计学意义(P素气虚失运可能是动脉粥样硬化中“络脉亢生”的始动因素和重要推动力,治疗动脉粥样硬化新生血管生成可从益气法辨证治疗。超声造影定量和半定量分析得出,动脉粥样硬化性斑块的病理性滋养血管新生与高血压、糖尿病、斑块形态、斑块厚度、NLR、HCY均有相关性,可作为临床筛查动脉粥样硬化斑块新生血管的预测因子。

关键词：颈动脉粥样硬化性斑块新生血管超声造影中医证素气虚

红花类黄酮合成关键酶CtC4H1基因的克隆及功能分析

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红花类黄酮合成关键酶CtC4H1基因的克隆及功能分析

作者：侯钰莹吉林农业大学

学位级别：硕士

苯丙烷代谢途径是植物中重要的次生代谢途径之一,多种次生代谢产物都是由这一途径直接或者间接生成,然后进入类黄酮、木质素等化合物的下游合成途径。C4H(肉桂酸4-羟化酶)是苯丙烷代谢途径中的关键酶,参与调控植物类黄酮和植物木质素的... 详细信息

苯丙烷代谢途径是植物中重要的次生代谢途径之一,多种次生代谢产物都是由这一途径直接或者间接生成,然后进入类黄酮、木质素等化合物的下游合成途径。C4H(肉桂酸4-羟化酶)是苯丙烷代谢途径中的关键酶,参与调控植物类黄酮和植物木质素的生物合成。通过转录组和qRT-PCR联合分析,筛选并鉴定了一个CtC4H1基因。对CtC4H1系统发育、蛋白结构、理化性质等方面进行了详细分析。对于异源表达CtC4H1拟南芥和病毒诱导CtC4H1沉默的红花进行了表型分析、次生代谢产物含量测定及通路基因表达量的分析。对于CtC4H1蛋白相互作用网络进行了预测,亚细胞定位分析、酵母双杂交(Y2H)以及双分子荧光互补(BiFC)技术明确了CtC4H1蛋白的定位情况及互作蛋白。分析了CtC4H1对非生物胁迫响应的表达水平存在的差异,在干旱胁迫下揭示了CtC4H1转基因拟南芥的抗氧化性能。具体研究结果如下:1.基因组测序获得2条候选CtC4H基因,通过转录组数据的热图分析和实时荧光定量PCR(qRT-PCR)分析发现,CtC4H1的表达量始终高于CtC4H2,所以选择CtC4H1进行克隆研究,其编码区为1518 bp。多序列比对和同源性分析表明,红花中CtC4H1基因与其他物种中C4H进化关系密切,都具有细胞色素P450结构域、膜锚区、脯氨酸丰富区、苏氨酸结合区、血红素结合区和E-R-R三联体结构域,同时,CtC4H1具有CYP73A亚家族的6个特征底物识别位点,包括(SRS1、SRS2、SRS3、SRS4、SRS5和SRS6),与CYP73A亚家族最接近。并且,CtC4H1蛋白是亲水性不稳定蛋白,具有一个跨膜结构域和丰富的磷酸化位点。2.异源表达CtC4H1拟南芥经逐代筛选,经基因组鉴定和qRT-PCR分析,得到12株T3代转基因拟南芥,并从中选择了OE4和OE10两个高表达株系。对于野生型(WT)和两个过表达株系(OE4和OE10)生长发育阶段的表型统计分析显示,与野生型相比,转基因拟南芥具有更为明显的长势。CtC4H1转基因拟南芥的叶片偏大且莲座叶数目更多,抽薹时间稍早且茎的直径偏大,并伴随着茎端紫色色素的积累。CtC4H1转基因拟南芥中总黄酮含量为野生型中的1.5倍,而花青素含量则为野生型的2.5倍。过表达植物中参与黄酮类物质生物合成的基因(At PAL、At4CL、At CHS、At CHI、At F3H、At F3’H、At FLS、At DFR和At ANS)的表达显著上调,其中,At PAL基因最高上调了130倍。3.病毒诱导(VIGS)红花CtC4H1基因沉默实验中,对于TRV病毒介导下的CtC4H1植株沉默效率进行检测,选择了沉默效率较高的Line 1和Line 3进行对比分析。对注射前后的红花植株的表型观察发现,瞬时过表达的植株显示出比对照稍好的生长趋势,尤其是在注射七天时的生长状态。而基因沉默后的植株随着时间的推移显示出明显的叶片黄化情况,并且植物的生长受到阻遏显示出生长延缓的趋势。TRV病毒介导下的CtC4H1基因沉默的红花中总黄酮含量为空载对照的0.3-0.5倍,而花青素的含量为空载对照的0.3-0.6倍,参与黄酮类物质生物合成的基因(CtPAL、CtCHS、CtCHI、CtF3’H、CtFLS、CtDFR和CtANS)的表达显著降低。4.对红花中CtC4H1的相互作用网络进行了预测,结果显示C4H蛋白与通路上其他蛋白(PAL,4CL,HCT,FLS,ANS等)存在密切的关联以及相互作用的可能,利用烟草叶片细胞瞬时表达系统分别对CtC4H1和CtPAL1进行亚细胞定位分析,两个蛋白的定位主要分布于质膜和细胞核中。通过酵母双杂交(Y2H)验证了CtC4H1和CtPAL1蛋白之间存在互作的潜能,利用双分子荧光互补(BiFC)技术验证两个蛋白存在互作关系。5.通过qRT-PCR技术验证了CtC4H1基因在干旱、茉莉酸甲酯、光和暗等不同激素和非生物胁迫条件下的表达水平。与其他处理相比,在外部干旱处理下CtC4H1基因的表达水平从48 h开始显著提高且有持续增加的现象,结果表明CtC4H1具有调控红花应对干旱胁迫的反应机制。6.选择了CtPAL1和CtC4H1过表达拟南芥株系,研究这两个基因在干旱胁迫下过表达株系中的作用。两个CtC4H1过表达系(OE4和OE10)和CtPAL1过表达系(OE6)在干旱胁迫14 d后的表型分析表明,与WT拟南芥相比,干旱受损的叶子程度稍轻。3,3’-二氨基联苯胺(DAB)和硝基蓝四唑(NBT)对实验植株的叶片进行染色以及含量测定结果表明,转基因植株的过氧化氢(HO)和超氧阴离子(O)积累量少于对照株。干旱胁迫后转基因株系中总黄酮类化合物和花青素含量显著增加,转基因叶片的MDA含量明显低于WT。与野生型拟南芥相比,干旱胁迫诱导下转基因株系中参与活性氧(ROS)解毒的SOD、CAT、POD的活性以及脯氨酸的含量

关键词：红花 CtC4H1 类黄酮的生物合成抗氧化蛋白互作

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优秀物理教师学科教学知识发展的个案研究

教育理论与实践 2012年第23期32卷 25-27页

作者：侯新杰王莹栗素姣河南师范大学物理与信息工程学院

通过对一名高中优秀物理教师学科教学知识发展历程的个案研究发现,优秀物理教师的学科教学知识的发展可以分为三个阶段,即初始阶段、充实阶段和丰富阶段。在不同的发展阶段,教师学科教学知识的发展重点是不同的,并呈现出螺旋上升的态势。

关键词：优秀物理教师学科教学知识发展

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内蒙古冰雪旅游资源及其利用研究

干旱区资源与环境 2017年第9期31卷 201-207页

作者：郝晶晶齐晓明张素丽侯晓莹内蒙古师范大学地理科学学院呼和浩特010022

内蒙古自治区是中国现阶段发展冰雪旅游最具潜力的地区,拥有大量丰富优质的冰雪旅游资源。基于GIS技术,通过空间插值法、最近邻指数法定量分析了内蒙古年日均温≤0℃天数、积雪日数两个气象指标的空间分布特征以及冰雪旅游资源的空间分... 详细信息

内蒙古自治区是中国现阶段发展冰雪旅游最具潜力的地区,拥有大量丰富优质的冰雪旅游资源。基于GIS技术,通过空间插值法、最近邻指数法定量分析了内蒙古年日均温≤0℃天数、积雪日数两个气象指标的空间分布特征以及冰雪旅游资源的空间分布状况。选取滑雪场、冰雪游览区、冰雪节庆与赛事活动三个指标深入分析了内蒙古冰雪旅游资源的开发利用现状。分析发现内蒙古冰雪旅游资源在空间上趋向集聚,具有可利用时间长、种类丰富、组合度好,文化气息浓厚、地域特色明显等优势,同时存在着离中心消费市场距离远,品牌效应低,规范化不足等劣势;依据这些特点,提出了内蒙冰雪旅游资源开发利用的一些对策。

关键词：冰雪旅游资源利用现状利用对策内蒙古

糖尿病视网膜病变患者大脑的扩散峰度成像应用研究

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糖尿病视网膜病变患者大脑的扩散峰度成像应用研究

作者：侯若莹遵义医科大学

学位级别：硕士

目的:运用扩散峰度成像(diffusion kurtosis imaging,DKI)探究常规磁共振阴性的2型糖尿病视网膜病变(diabetes retinopathy,DR)患者全脑各脑区微结构变化的特点,并分析其与认知功能的相关性。方法:选取2019年10月—2020年10月遵义医科... 详细信息

目的:运用扩散峰度成像(diffusion kurtosis imaging,DKI)探究常规磁共振阴性的2型糖尿病视网膜病变(diabetes retinopathy,DR)患者全脑各脑区微结构变化的特点,并分析其与认知功能的相关性。方法:选取2019年10月—2020年10月遵义医科大学附属医院DR患者26例作为病例组,年龄40～60岁,同期招募年龄、性别、受教育程度与病例组匹配的27例健康志愿者作为对照组。对病例组及对照组进行认知功能测评,记录测评结果,并收集所有被试者的临床相关资料。用3.0T MRI扫描仪对所有被试进行脑部MRI扫描(3D-TWI结构像、扩散张量成像、T-FLAIR)及DKI序列扫描。图像处理:采用MRIcorn软件将原始dicom数据转为nii文件格式,再用FSL软件进行头动、涡流校正处理,使用DKE(diffusion kurtosis estimator)软件批处理后得到DKI参数图,采用基于MATLAB环境的统计参数图软件SPM12(Solid and Physical Modeling)将所有DKI参数图像配准至标准空间,并进行平滑处理。然后对两组的各参数值进行统计学分析,并提取有差异的脑区,记录差异脑区的坐标及体素值等。以masbar软件提取2型糖尿病视网膜病变患者全脑张量和峰度参数的平均值并与临床变量(病程、血糖和认知状态的测评结果)进行皮尔逊相关分析(pearson correlation),p0.05)。相对于对照组,病例组双侧颞上回、额颞叶白质、边缘叶、海马旁回、舌回、胼胝体、尾状核及楔前叶AK、MK、RK值减低,双侧丘脑、胼胝体及双侧尾状核FA值减低,双侧枕中回、小脑、额颞叶灰白质、边缘叶、海马、海马旁回、扣带回、舌回、胼胝体、楔前叶、距状回、左侧颞横回及颞上回AD、RD、MD值增高。相关性分析发现病例组右侧前扣带回RD值与简易智能量表(Mini-mental State Examination,MMSE)评分呈负相关(r=-0.153,p=0.048)。结论:基于扩散峰度成像研究表明常规MRI阴性DR患者存在多个脑区微结构改变。右侧前扣带回RD值与MMSE评分呈负相关,为糖尿病脑病的病理生理机制提供影像学依据。

关键词：糖尿病糖尿病视网膜病变磁共振成像扩散峰度成像认知功能障碍

中国喀斯特型铝土矿的地质特征与成矿物源研究的思考

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低碳世界 2022年第1期12卷 126-128,132页

作者：侯莹玲广东石油化工学院石油工程学院广东茂名525000

喀斯特型铝土矿是我国最重要的铝土矿类型,其地质特征与物源研究对促进铝土矿地质学发展有重要意义。本文阐释了我国铝土矿的分类及喀斯特型铝土矿的地质特征,对我国喀斯特型铝土矿物源研究的进展进行综述,指出用单一的不活动性元素对... 详细信息

喀斯特型铝土矿是我国最重要的铝土矿类型,其地质特征与物源研究对促进铝土矿地质学发展有重要意义。本文阐释了我国铝土矿的分类及喀斯特型铝土矿的地质特征,对我国喀斯特型铝土矿物源研究的进展进行综述,指出用单一的不活动性元素对比分析并不能有效解决喀斯特型铝土矿的物源争议,综合地质学、岩相学、地球化学和同位素年代学等多学科研究,可能会取得更好的源区示踪效果。

关键词：喀斯特型铝土矿矿床特征物质来源