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尖孢镰刀菌亚麻专化型 FolSwe1基因功能分析

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内蒙古大学学报(自然科学版) 2024年

作者：冯欣茹侯占铭内蒙古师范大学生命科学与技术学院

本研究旨在对尖孢镰刀菌亚麻专化型 FolSwe1基因进行功能分析。利用同源比对，通过PCR对FolSwe1基因及其侧翼序列进行扩增和测序，使用Split-Marker 技术构建该基因缺失突变盒，使用聚乙二醇（PEG）介导转化野生型原生质体，获得了FolS... 详细信息

本研究旨在对尖孢镰刀菌亚麻专化型 FolSwe1基因进行功能分析。利用同源比对，通过PCR对FolSwe1基因及其侧翼序列进行扩增和测序，使用Split-Marker 技术构建该基因缺失突变盒，使用聚乙二醇（PEG）介导转化野生型原生质体，获得了FolSwe1基因缺失突变株，对突变体表型和致病力进行测定。构建荧光载体 pZESH1（pZWH1+EGFP+ FolSwe1)对FolSwe1蛋白进行亚细胞定位。结果显示，FolSwe1基因编码区为3219bp，含有一个内含子，长度为54bp，所测序列包括编码区上游1704bp，编码区下游为1694bp。表型观察发现，敲除突变体的菌丝比野生型短小且密实，菌落生长速度较慢，特别显著的变化是缺失突变体不再产生孢子，致病力也明显下降。亚细胞定位显示FolSwe1蛋白在培养时间较长菌丝的细胞膜中有荧光信号。综上所述，FolSwe1基因主要调控尖孢镰刀菌亚麻专化型的孢子发生、菌丝营养生长和对亚麻的致病性。

关键词：尖孢镰刀菌亚麻专化型 FolSwe1基因 Split-Marker 基因敲除

尖孢镰刀菌亚麻专化型Folcdc15基因参与调控分生孢子发生和菌丝生长

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华北农学报 2023年第6期38卷 175-183页

作者：李春阳侯占铭内蒙古师范大学生命科学与技术学院内蒙古自治区高等学校生物多样性保护与可持续利用重点实验室内蒙古呼和浩特010022

通过对尖孢镰刀菌亚麻专化型Folcdc15基因敲除及敲除突变体互补试验,探究该基因在尖孢镰刀菌亚麻专化型中的功能。对Folcdc15基因进行DNA测序后,使用Split-Marker技术,构建含有潮霉素抗性基因(hph)缺失盒。通过PEG介导法转入野生型原生... 详细信息

通过对尖孢镰刀菌亚麻专化型Folcdc15基因敲除及敲除突变体互补试验,探究该基因在尖孢镰刀菌亚麻专化型中的功能。对Folcdc15基因进行DNA测序后,使用Split-Marker技术,构建含有潮霉素抗性基因(hph)缺失盒。通过PEG介导法转入野生型原生质体,在含有潮霉素的选择培养基上进行转化子筛选,通过PCR正负筛选确定敲除突变体。利用pZWH1载体构建含有Folcdc15的互补载体pZLY1,将其转入敲除突变体中进行互补测验。与野生型hm相比,敲除突变体ko1菌落生长速率下降了73%,菌丝形态发生了显著改变,菌丝变短且分叉变多,分生孢子隔膜数量增多长度增加,分生孢子数量显著减少。亚麻侵染试验表明,ko1的致病力显著降低。通过互补测验发现,回复突变株ca1恢复了Folcdc15基因缺失带来的分生孢子产量及形态、菌落生长和形态及致病力的缺陷。Folcdc15参与调控尖孢镰刀菌亚麻专化型的分生孢子发生及菌丝生长。

关键词：尖孢镰刀菌亚麻专化型亚麻枯萎病 Split-Marker Folcdc15 基因功能致病性

尖孢镰刀菌亚麻专化型FolFTL1基因敲除及功能分析

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分子植物育种 2022年第7期20卷 2302-2309页

作者：焦成武侯占铭内蒙古师范大学生命科学与技术学院呼和浩特010022

为鉴定尖孢镰刀菌FolFTL1基因的功能,本研究采用Split Marker技术,构建了含有潮霉素抗性基因(hph)的基因缺失盒。通过聚乙二醇(PEG)介导法转化野生型hm原生质体,获得了FolFTL1基因缺失突变体ΔFolFTL1。与野生型hm相比,尽管ΔFolFTL1分... 详细信息

为鉴定尖孢镰刀菌FolFTL1基因的功能,本研究采用Split Marker技术,构建了含有潮霉素抗性基因(hph)的基因缺失盒。通过聚乙二醇(PEG)介导法转化野生型hm原生质体,获得了FolFTL1基因缺失突变体ΔFolFTL1。与野生型hm相比,尽管ΔFolFTL1分生孢子形态和大小没有不同,但产量显著减少,各菌株平均孢子产量分别为hm:2.45×10^(7)个/mL、ecFolFTL1:1.63×10^(7)个/m L、ΔFolFTL1:0.08×10^(7)个/mL,表明FolFTL1基因缺失影响了孢子发生。形态学观察发现,敲除突变体的菌落比野生型更致密,并且生长速率显著降低,各菌落生长速率分别为hm:1.78 cm/d、ecFolFTL1:1.75 cm/d、ΔFolFTL1:0.88 cm/d。亚麻幼苗侵染实验显示,敲除突变体侵染的幼苗生长正常,而野生型和外插入突变体侵染的幼苗严重枯萎,表明FolFTL1基因的缺失降低了尖孢镰刀菌的致病力。外插入突变体是为了进一步证明FolFTL1基因功能的改变是由基因敲除导致。本研究结果显示FolFTL1基因是尖孢镰刀菌亚麻专化型分生孢子发生、菌丝营养生长和植物侵染相关基因。

关键词：尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum f.sp.lini) FolFTL1基因 Split Marker技术基因敲除致病力

尖孢镰刀菌亚麻专化型Folprp4基因参与调控菌丝生长和分生孢子发生

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中国生物工程杂志 2022年第3期42卷 13-26页

作者：董慧霞侯占铭内蒙古师范大学生命科学与技术学院内蒙古自治区高等学校生物多样性保护与可持续利用重点实验室呼和浩特010022

目的:通过对尖孢镰刀菌中Folprp4基因的鉴定,揭示其在尖孢镰刀菌中的功能及致病相关性。方法:基于同源重组原理,根据测定出的Folprp4基因序列,应用Split-Marker重组技术构建含有潮霉素抗性基因(hph)的基因缺失盒。将基因缺失盒经PEG介... 详细信息

目的:通过对尖孢镰刀菌中Folprp4基因的鉴定,揭示其在尖孢镰刀菌中的功能及致病相关性。方法:基于同源重组原理,根据测定出的Folprp4基因序列,应用Split-Marker重组技术构建含有潮霉素抗性基因(hph)的基因缺失盒。将基因缺失盒经PEG介导转化到野生型原生质体中,在含有潮霉素B的TCC培养基上筛选转化子,通过PCR正负筛查获得Folprp4基因缺失突变株(ΔFolprp4)。构建含有Folprp4基因的载体pZDH1,并将其转化到敲除突变体中进行互补测验。结果:与野生型(hm)和异位插入突变体(ecFolprp4)相比,敲除突变体菌丝生长受到严重阻碍,当野生型和异位插入突变体长满整个平板时,敲除突变体菌落呈小点状。敲除突变体的另一个显著变化是ΔFolprp4的分生孢子产量显著下降。侵染实验表明,ΔFolprp4对亚麻幼苗的毒力显著降低。互补实验表明,该互补载体的回复子(Folprp4-C)在菌落形态、生长速率、分生孢子产量和毒力方面均恢复到了野生型菌株。结论:Folprp4基因与尖孢镰刀菌的菌丝生长、分生孢子发生和致病性有关。

关键词： Folprp4基因尖孢镰刀菌亚麻专化型 Split-Marker 基因敲除致病性

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真菌类遗传学分析教学概论

遗传 1997年第3期19卷 30-33页

作者：侯占铭内蒙古师范大学生物系

真菌类遗传学分析教学概论侯占铭（内蒙古师范大学生物系，呼和浩特０１００２２）ＯｕｔｌｉｎｅｏｆＴｅａｃｈｉｎｇＭｅｔｈｏｄｆｏｒＧｅｎｅｔｉｃＡｎａｌｙｓｉｓｏｆＦｕｎｇｉＨｏｕＺｈａｎｍｉｎｇ（Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ... 详细信息

真菌类遗传学分析教学概论侯占铭（内蒙古师范大学生物系，呼和浩特０１００２２）ＯｕｔｌｉｎｅｏｆＴｅａｃｈｉｎｇＭｅｔｈｏｄｆｏｒＧｅｎｅｔｉｃＡｎａｌｙｓｉｓｏｆＦｕｎｇｉＨｏｕＺｈａｎｍｉｎｇ（ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＢｉｏｌｏｇｙ，ＩｎｎｅｒＭｏ...

关键词：生物学教育真菌遗传学分析

MDT1基因参与禾谷镰刀菌分生孢子发生和营养生长

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中国生物工程杂志 2020年第8期40卷 10-18页

作者：彭海丽侯占铭内蒙古师范大学生命科学与技术学院呼和浩特010020

背景:禾谷镰刀菌(Fusarium graminearum)是小麦及其它粮食作物小麦赤霉病(Fusarium head blight)的主要病原菌。目前,分子分析在研究病原菌的致病机理中已有广泛应用。MGV1菌株是禾谷镰刀菌MAPK信号通路基因MGV1缺失后的突变体,MGV1敲... 详细信息

背景:禾谷镰刀菌(Fusarium graminearum)是小麦及其它粮食作物小麦赤霉病(Fusarium head blight)的主要病原菌。目前,分子分析在研究病原菌的致病机理中已有广泛应用。MGV1菌株是禾谷镰刀菌MAPK信号通路基因MGV1缺失后的突变体,MGV1敲除突变体的差异基因表达(DGE)分析显示,MGV1基因缺失后,MDT1基因表达量显著下调。GO注释预测是参与ATP结合蛋白二聚作用的活性因子。推测该基因涉及MGV1通路。目的:探讨MDT1基因(MGV1dependent transcripts)的生物学功能。方法:应用Split-Marker技术构建基因敲除盒,并通过常规方法检测缺失突变体的表型和致病性。结果:与禾谷镰刀菌PH-1相比,MDT1基因缺失突变体的分生孢子量和子囊壳量显著下降,表明该基因对于无性繁殖和有性生殖能力至关重要。同时发现,在固体培养基上,缺失突变体的营养生长能力大大下降。该缺失突变体对细胞壁降解酶也很敏感,液体培养基中32℃下,菌丝顶端膨大,并有菌丝断裂,表明该基因与禾谷镰刀菌的细胞壁整合有关。互补实验证实了敲除突变体表型改变确实是由于MDT1基因缺失所致。结论:MDT1基因与禾谷镰刀菌的分生孢子和营养生长能力有关。

关键词：禾谷镰刀菌 MDT1 Split-marker 基因敲除致病力

Folpcs1基因对尖孢镰刀菌亚麻专化型的无性繁殖和营养生长的调控

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中国生物工程杂志 2020年第3期40卷 48-64页

作者：郭晶侯占铭内蒙古师范大学生物科学与技术学院呼和浩特010022

背景:尖孢镰刀菌亚麻专化型[Fusarium oxysporum Schl. f. sp. Lini (Bolley) Snyder&Hansen]是一种引起亚麻枯萎病的土传真菌,对亚麻的产量及质量有严重的危害。研究表明,在小麦赤霉菌中C2H2型锌指转录因子Pcs1调控中间瓶梗(intercalar... 详细信息

背景:尖孢镰刀菌亚麻专化型[Fusarium oxysporum Schl. f. sp. Lini (Bolley) Snyder&Hansen]是一种引起亚麻枯萎病的土传真菌,对亚麻的产量及质量有严重的危害。研究表明,在小麦赤霉菌中C2H2型锌指转录因子Pcs1调控中间瓶梗(intercalary phialides)产生分生孢子。目的:鉴定pcs1同源基因Folpcs1在镰刀菌中的作用。方法:对Folpcs1的基因组DNA及cDNA测序后,利用Split-Marker基因敲除技术破坏该基因。构建含有潮霉素抗性基因(hph)的基因缺失盒。通过聚乙二醇(PEG)转化野生型原生质体法,获得了Folpcs1基因缺失突变株(ΔFolpcs1),并利用PCR法进行正负筛选。为了对缺失突变体互补,将pcs1及其上下游侧翼序列构建到pZWH1中后,回复到ΔFolpcs1中。结果:测序结果表明,有一个654bp的内含子,cDNA序列长度为2 846bp。通过观察发现,敲除突变体的生长速率明显降低,培养基中几乎观察不到分生孢子。回复突变体回复了野生型菌株的生长速率及分生孢子产生过程。结论:说明Folpcs1负责菌丝的营养生长和分生孢子的产生。

关键词：尖孢镰刀菌亚麻专化型 Folpcs1 Split-Marker 基因敲除

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香龙血树和紫铁的组织培养与快速繁殖

内蒙古大学学报（自然科学版） 2001年第6期32卷 642-643页

作者：侯占铭满都拉内蒙古师范大学生物学系内蒙古呼和浩特010022

香龙血树 (Dracaena fragrans K er-Gawl.)带腋芽茎段接种到 MS+BA5 mg/L(单位下同 ) +IAA 0 .2培养基中诱导形成愈伤组织并在愈伤组织上发生不定芽的分化 .紫铁(Cordyline f ruticosa var.“Compacta”)顶芽接种到 MS+BA2的培养基中可... 详细信息

香龙血树 (Dracaena fragrans K er-Gawl.)带腋芽茎段接种到 MS+BA5 mg/L(单位下同 ) +IAA 0 .2培养基中诱导形成愈伤组织并在愈伤组织上发生不定芽的分化 .紫铁(Cordyline f ruticosa var.“Compacta”)顶芽接种到 MS+BA2的培养基中可被大量扩增 .两种植物的诱导芽接种到 MS+IAA 0 .2～ 0 .4的培养基中 ,可直接发生不定根 .所形成的试管苗移植后 ,生长正常 ,成活率 90 %～ 1 0 0 %

关键词：香龙血树紫铁组织培养快速繁殖百合科愈伤组织培养基

FolCbk1基因控制尖孢镰刀菌亚麻专化型营养生长和分生孢子发生

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分子植物育种 2021年

作者：孟芙蓉侯占铭内蒙古师范大学生命科学与技术学院内蒙古自治区高等学校生物多样性保护与可持续利用重点实验室

为鉴定尖孢镰刀菌亚麻专化型FolCbk1基因的功能，本研究对FolCbk1基因及其侧翼序列进行了测序，利用Split Marker技术构建了基因缺失盒，并通过PEG介导法将其转化到野生型原生质体中，在含有潮霉素的TCC选择培养基上获得转化子，通过PC...

为鉴定尖孢镰刀菌亚麻专化型FolCbk1基因的功能，本研究对FolCbk1基因及其侧翼序列进行了测序，利用Split Marker技术构建了基因缺失盒，并通过PEG介导法将其转化到野生型原生质体中，在含有潮霉素的TCC选择培养基上获得转化子，通过PCR正负筛选获得敲除突变体(ΔFolCbk1)与外插入转化子(ec FolCbk1)。为确定敲除突变体与FolCbk1基因缺失的对应关系，构建了互补载体pZMH1 (pZWH1+FolCbk1)进行互补测验。所得结果显示，FolCbk1基因编码区含有2 104 bp，两个长度分别为59 bp，52 bp的内含子，测得上、下游侧翼序列分别为1 384 bp、1 314 bp。对敲除突变体表型测定发现，突变体生长速率显著降低，更为特别的是，其完全丧失了分生孢子产生的能力，菌落形态也发现十分明显的改变，致病力相应下降。互补测验表明，回复突变体(FolCbk1-C)回复了野生型菌株的生长速率和产孢能力以及感染能力。综上所述，FolCbk1基因主要参与尖孢镰刀菌亚麻专化型的营养生长、产孢能力的调控。

关键词：