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A型流感病毒PB1-F2蛋白与MOAP-1的相互作用

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微生物学报 2012年第9期52卷 1122-1128页

作者：崔雨明侯佩莉张茂林段铭关振宏吉林大学人兽共患病教育部重点实验室人兽共患病研究所长春130062

【目的】探讨A型流感病毒PB1-F2蛋白和人类凋亡调节因子1(MOAP-1)之间的相互作用。【方法】构建pACT2-MOAP-1重组质粒,与pGBKT7-PB1-F2质粒共转化酵母AH109,检测转化菌在四缺培养基的生长情况及β半乳糖苷酶报告基因的活性;利用GST pull... 详细信息

【目的】探讨A型流感病毒PB1-F2蛋白和人类凋亡调节因子1(MOAP-1)之间的相互作用。【方法】构建pACT2-MOAP-1重组质粒,与pGBKT7-PB1-F2质粒共转化酵母AH109,检测转化菌在四缺培养基的生长情况及β半乳糖苷酶报告基因的活性;利用GST pull-down和免疫共沉淀(Co-IP)技术进一步验证PB1-F2与宿主细胞蛋白MOAP-1的相互作用;通过过表达PB1-F2和MOAP-1,检测PB1-F2对MOAP-1蛋白表达水平的影响。【结果】酵母双杂交结果表明,PB1-F2和MOAP-1可以在酵母细胞内特异性结合。GST pull-down和Co-IP实验也进一步证实了这两种蛋白的相互作用,而且PB1-F2可上调外源MOAP-1的蛋白水平。【结论】流感病毒PB1-F2与MOAP-1存在相互作用,PB1-F2可能通过与MOAP-1的相互作用参与调控细胞生长及凋亡过程。

关键词： A型流感病毒 PB1-F2 MOAP-1 蛋白相互作用

A型流感病毒PB1-F2蛋白的原核表达、纯化及鉴定

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湖北农业科学 2010年第4期49卷 788-790,797页

作者：李俊杰侯佩莉关振宏吉林农业大学动物科学技术学院长春130118 吉林大学人兽共患病研究所/人兽共患病教育部重点实验室长春130062

对A型流感病毒PB1-F2蛋白进行了原核表达及纯化,获得了谷胱甘肽硫转移酶(GST)-PB1-F2融合蛋白,以用于研究流感病毒PB1-F2蛋白的功能及分子作用机制。以RT-PCR方法扩增PB1-F2基因,将其克隆至原核表达载体pGEX-6P-1上。重组质粒pGEX-6P-1-... 详细信息

对A型流感病毒PB1-F2蛋白进行了原核表达及纯化,获得了谷胱甘肽硫转移酶(GST)-PB1-F2融合蛋白,以用于研究流感病毒PB1-F2蛋白的功能及分子作用机制。以RT-PCR方法扩增PB1-F2基因,将其克隆至原核表达载体pGEX-6P-1上。重组质粒pGEX-6P-1-PB1-F2转化大肠杆菌(Es-cherichia coli)菌株BL21,并诱导表达,利用谷胱甘肽-Sepharose 4B亲和柱进行纯化,所得产物进行SDS-PAGE、Western blot试验鉴定。结果显示,大肠杆菌细胞经诱导,表达出了相对分子量约为36kDa的蛋白,与GST-PB1-F2融合蛋白大小相符;Western blot鉴定显示,该融合蛋白能够被抗GST的抗体特异性识别。试验在大肠杆菌表达系统中成功表达纯化了GST-PB1-F2融合蛋白,为深入研究PB1-F2蛋白的功能奠定了基础。

关键词：流感病毒谷胱甘肽硫转移酶-A型流感病毒PB1-F2蛋白融合蛋白原核表达纯化

牛病毒性腹泻病毒非结构蛋白NS3的研究进展

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中国畜牧兽医 2012年第5期39卷 68-72页

作者：侯佩莉孙涛何洪彬山东省农业科学院奶牛研究中心山东济南250100

非结构蛋白NS3是致细胞病变型牛病毒性腹泻病毒的分子标记蛋白,它具有多种生物学功能。研究结果表明,NS3在病毒非结构蛋白的加工、成熟、基因组复制与转录过程中以及宿主细胞致细胞病变效应的产生中起重要作用。文章总结了NS3的生物学... 详细信息

非结构蛋白NS3是致细胞病变型牛病毒性腹泻病毒的分子标记蛋白,它具有多种生物学功能。研究结果表明,NS3在病毒非结构蛋白的加工、成熟、基因组复制与转录过程中以及宿主细胞致细胞病变效应的产生中起重要作用。文章总结了NS3的生物学特性及其相关功能,为阐明NS3的致细胞病变作用机理奠定基础。

关键词：牛病毒性腹泻病毒非结构蛋白NS3 产生机制细胞凋亡

GST pull-down验证流感病毒PB1-F2蛋白与热休克蛋白40的相互作用

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生物技术通报 2011年第1期27卷 202-207页

作者：侯佩莉关振宏张茂林李影段铭吉林农业大学动物科学技术学院长春130118 吉林大学人兽共患病研究所人兽共患病研究教育部重点实验室长春130062

为体外验证流感病毒PB1-F2与热休克蛋白Hsp40相互作用,通过两个方向的GST pull-down试验验证PB1-F2与Hsp40的相互作用。构建GST-多肽融合蛋白原核表达载体pGEX-6P-1-PB1-F2和pGEX-6P-1-Hsp40,并在大肠杆菌(***-li)BL21中诱导表达;构建... 详细信息

为体外验证流感病毒PB1-F2与热休克蛋白Hsp40相互作用,通过两个方向的GST pull-down试验验证PB1-F2与Hsp40的相互作用。构建GST-多肽融合蛋白原核表达载体pGEX-6P-1-PB1-F2和pGEX-6P-1-Hsp40,并在大肠杆菌(***-li)BL21中诱导表达;构建真核表达载体pLEGFP-Hsp40及pCAGGS-PB1-F2,并分别转染293T细胞使其表达Hsp40及PB1-F2融合蛋白,然后进行GST pull-down试验验证二者的相互作用。成功地构建了两种蛋白的各种表达载体,经表达、纯化获得了可溶性的GST-多肽融合蛋白,GST pull-down试验正反两方向都证实了PB1-F2与Hsp40的相互作用,初步证实了流感病毒PB1-F2在体外能与Hsp40发生相互作用。

关键词： GST pull-down 流感病毒PB1-F2蛋白热休克蛋白40 蛋白质相互作用

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A型流感病毒感染免疫应答中细胞因子的作用

动物医学进展 2010年第10期31卷 108-112页

作者：侯佩莉张茂林李影关振宏吉林大学人兽共患病研究所人兽共患病教育部重点实验室吉林长春130062 吉林农业大学动物科学技术学院吉林长春130118

A型流感病毒是引起人和禽类呼吸道疾病的重要病原体。病毒在宿主的上皮细胞和中性粒细胞中复制并刺激机体产生具有各种生物活性的细胞因子。细胞因子作为天然免疫的一部分,具有抗病毒和辅助Th1型免疫应答的作用,同时细胞因子也影响适应... 详细信息

A型流感病毒是引起人和禽类呼吸道疾病的重要病原体。病毒在宿主的上皮细胞和中性粒细胞中复制并刺激机体产生具有各种生物活性的细胞因子。细胞因子作为天然免疫的一部分,具有抗病毒和辅助Th1型免疫应答的作用,同时细胞因子也影响适应性免疫应答和疾病的表现型。流感病毒感染导致趋化性细胞因子、促炎性细胞因子、肿瘤坏死因子α以及抗病毒细胞因子的产生。论文综述了细胞因子在A型流感病毒感染的免疫应答中的可能作用,为更好地阐明病毒感染的发病机理奠定基础。

关键词：细胞因子免疫 A型流感病毒发病机理

牛病毒性腹泻病毒、牛冠状病毒和牛肠道病毒多重RT-PCR检测方法的建立及初步应用

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中国兽医学报 2016年第10期36卷 1672-1675,1700页

作者：侯佩莉王洪梅何洪彬山东省农业科学院奶牛研究中心山东济南250100

根椐GenBank中已发表中病毒性腹泻病毒(BVDV)、中冠状病毒(BCoV)和中肠道病毒(BEV)基因的保守序列,设计合成引物,在建立单一病毒RT-PCR检测方法的基础上,继续优化条件,建立上述3种病毒的多重RT-PCR检测方法,并应用建立的检测方法对临床... 详细信息

根椐GenBank中已发表中病毒性腹泻病毒(BVDV)、中冠状病毒(BCoV)和中肠道病毒(BEV)基因的保守序列,设计合成引物,在建立单一病毒RT-PCR检测方法的基础上,继续优化条件,建立上述3种病毒的多重RT-PCR检测方法,并应用建立的检测方法对临床样本进行检测,计算符合率。结果表明,引物浓度分别为BVDV 0.5μL(20μmol/L),BCoV 0.25μL(20μmol/L),BEV 0.25μL(20μmol/L),退火温度为52℃时,可同时扩增BVDV的289bp,BCoV的458bp和BEV的732bp的特异性片段,对牛流行热病毒(BEFV)、牛轮状病毒(BRV)、牛副流感病毒3型(BPIV3)和牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)均无扩增。该方法最低能检出6.4pg的BVDV,1.28pg的BCoV和6.4pg的BEV的等量混合质粒模板。对24份临床腹泻病料进行检测,与单项RT-PCR检测的符合率为100.0%。本研究建立的多重RT-PCR检测方法,具有准确、快速、特异的特点,可用于临床混合感染的同时检测。

关键词：多重RT—PCR 牛病毒性腹泻病毒牛冠状病毒牛肠道病毒

Annexin A2在病毒复制周期中的作用的研究进展

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中国动物传染病学报 2022年第2期30卷 198-202页

作者：陈立慧侯佩莉王洪梅何洪彬山东师范大学生命科学学院反刍动物疾病研究中心济南250014

膜联蛋白A2(AnxA2)是钙离子依赖的磷脂结合蛋白,参与胞吞、胞吐、细胞增殖、膜结构域的形成、囊泡的贩运等多种细胞过程。近年来研究表明,AnxA2蛋白通过与病毒蛋白的相互作用参与病毒的整个生命周期,包括吸附和侵入、复制、组装和释放... 详细信息

膜联蛋白A2(AnxA2)是钙离子依赖的磷脂结合蛋白,参与胞吞、胞吐、细胞增殖、膜结构域的形成、囊泡的贩运等多种细胞过程。近年来研究表明,AnxA2蛋白通过与病毒蛋白的相互作用参与病毒的整个生命周期,包括吸附和侵入、复制、组装和释放等过程,进而影响病毒的整个复制周期。本文主要从AnxA2的定位和功能方面概述了其参与病毒复制周期的作用。

关键词：膜联蛋白A2 侵入复制组装与释放

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牛肠道病毒SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR检测方法的建立及初步应用

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病毒学报 2015年第5期31卷 488-493页

作者：朱彤赵贵民沈付娆侯佩莉王洪梅李杰何洪彬山东省农业科学院奶牛研究中心济南250100 东北农业大学生命科学学院哈尔滨150030

牛肠道病毒（Bovine enterovirus,BEV）是2011年在我国部分牛场新发现的一种消化道病毒病病原,因此亟需建立针对BEV快速、有效的检测方法。本研究根据BEV 3D基因保守序列,设计并合成一对特异性引物,建立了检测BEV的SYBR Green I实时荧... 详细信息

牛肠道病毒（Bovine enterovirus,BEV）是2011年在我国部分牛场新发现的一种消化道病毒病病原,因此亟需建立针对BEV快速、有效的检测方法。本研究根据BEV 3D基因保守序列,设计并合成一对特异性引物,建立了检测BEV的SYBR Green I实时荧光定量RT-PCR方法。该方法与引起牛的病毒性腹泻的其它几种牛的病毒均无交叉反应,检出敏感度达7.13×10^1拷贝/μL,比常规RT-PCR检测方法高10倍。应用该方法检测了3个规模化奶牛场送检的41份奶牛腹泻样本和3份气溶胶样本,腹泻样品阳性检出率为39.02%（16/41）;3份气溶胶样本均为阳性,表明该方法灵敏度高、特异性强、重复性好,可同时检测大量临床样本,本方法为BEV的早期快速诊断和定量分析提供了技术支撑。

关键词：牛肠道病毒(BEV) 荧光定量PCR 检测 3D基因

RNA-Seq技术在动物病毒传染病学研究中的应用

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中国兽医学报 2018年第6期38卷 1244-1249页

作者：侯佩莉王洪梅赵贵民何洪彬山东师范大学生命科学学院山东济南250014 山东师范大学反刍动物疾病研究中心山东济南250014

病原与宿主相互作用，是构成感染的基本因素，RNA—Seq技术的发展推动病原与宿主相互作用研究，已进入全方位系统分析整个转录组水平，能够从整体水平研究差异表达基因以及基因功能，揭示特定生物学过程以及病毒致病的分子机理。现主要... 详细信息

病原与宿主相互作用，是构成感染的基本因素，RNA—Seq技术的发展推动病原与宿主相互作用研究，已进入全方位系统分析整个转录组水平，能够从整体水平研究差异表达基因以及基因功能，揭示特定生物学过程以及病毒致病的分子机理。现主要介绍了RNA—Seq原理、技术特点及其在动物病毒感染研究中的应用，简略地分析了该技术的不足之处，并对其应用进行了展望。

关键词： RNA—Seq 病毒感染宿主差异基因