牛病毒性腹泻病毒、牛冠状病毒和牛肠道病毒多重RT-PCR检测方法的建立及初步应用

作     者：侯佩莉 王洪梅 何洪彬 HOU Pei-li;WANG Hong-mei;HE Hong-bin

作者机构：山东省农业科学院奶牛研究中心山东济南250100 

出 版 物：《中国兽医学报》 (Chinese Journal of Veterinary Science)

年 卷 期：2016年第36卷第10期

页      面：1672-1675,1700页

学科分类：090601[农学-基础兽医学] 09[农学] 0906[农学-兽医学] 

基　　金：现代农业(奶牛)产业技术体系科学家岗位资助项目(Cars-37) 国家自然科学基金资助项目(31502064 31272586 3130209 31302129) 兽医生物技术国家重点实验室开放课题基金资助项目(SKLVBF201510) 山东省自然科学基金培养基金资助项目(ZR2014CP029) 山东省科技发展计划资助项目(2014GGC02058) 山东省农业科学院科技创新重点项目子课题资助项目(2014CXZ08-3) 山东省农业科学院重大成果培育资助项目(2015CGPY02) 山东省优秀中青年科学家科研奖励基金资助项目(BS2014SW008) 山东省农科院青年基金资助项目(2014QNM17) 

主　　题：多重RT—PCR 牛病毒性腹泻病毒 牛冠状病毒 牛肠道病毒 

摘      要：根椐GenBank中已发表中病毒性腹泻病毒(BVDV)、中冠状病毒(BCoV)和中肠道病毒(BEV)基因的保守序列,设计合成引物,在建立单一病毒RT-PCR检测方法的基础上,继续优化条件,建立上述3种病毒的多重RT-PCR检测方法,并应用建立的检测方法对临床样本进行检测,计算符合率。结果表明,引物浓度分别为BVDV 0.5μL(20μmol/L),BCoV 0.25μL(20μmol/L),BEV 0.25μL(20μmol/L),退火温度为52℃时,可同时扩增BVDV的289bp,BCoV的458bp和BEV的732bp的特异性片段,对牛流行热病毒(BEFV)、牛轮状病毒(BRV)、牛副流感病毒3型(BPIV3)和牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)均无扩增。该方法最低能检出6.4pg的BVDV,1.28pg的BCoV和6.4pg的BEV的等量混合质粒模板。对24份临床腹泻病料进行检测,与单项RT-PCR检测的符合率为100.0%。本研究建立的多重RT-PCR检测方法,具有准确、快速、特异的特点,可用于临床混合感染的同时检测。