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作者：余秋地南京农业大学

学位级别：硕士

母乳是婴儿早期所需要的天然营养物质。母乳喂养有益于婴儿健康,其效应与母乳中生物活性因子有关。人乳寡糖作为母乳中重要的生物活性因子,具有益生、抑菌和抗炎等生物学功能。目前大多数研究集中在游离寡糖方面,对于乳N-链寡糖组的生... 详细信息

母乳是婴儿早期所需要的天然营养物质。母乳喂养有益于婴儿健康,其效应与母乳中生物活性因子有关。人乳寡糖作为母乳中重要的生物活性因子,具有益生、抑菌和抗炎等生物学功能。目前大多数研究集中在游离寡糖方面,对于乳N-链寡糖组的生物学功能研究较少。此外,岩藻糖基化是乳寡糖中重要的末端修饰,目前关于此方面的研究主要是将岩藻糖基化作为整体进行研究,对于不同类型(连接位点)的岩藻糖基化寡糖的功能研究几乎没有。本研究从人乳和牛乳中提取了N-链寡糖组,以Caco-2细胞为体外模型,LPS刺激细胞,建立细胞炎症模型,以细胞中LDH的溢出量评估乳N-链寡糖组对损伤细胞的修复作用,并以促炎症细胞因子IL-8、IL-12和TNF-α的分泌水平评估乳N-链寡糖组的抗炎活性。在此基础上,本研究进一步分析了不同类型岩藻糖基化修饰在人乳和牛乳N-链寡糖组中的相对含量的差异,以及对Caco-2炎症模型细胞中促炎症细胞因子IL-8、IL-12和TNF-α分泌水平的影响,具体研究内容和结果如下:1.人乳和牛乳N-链寡糖组对Caco-2细胞的抗炎活性研究为了探究人乳和牛乳N-链寡糖组的抗炎活性,以Caco-2细胞为研究对象,分别用 3 nmol/mL、6 nmol/mL、12 nmol/mL 和 24 nmol/mL 的乳 N-链寡糖组与 20 μg/mL的LPS共同孵育细胞24 h,LDH试剂盒检测细胞培养液中LDH的含量,ELISA试剂盒检测细胞裂解液中IL-8、IL-12和TNF-α的分泌水平评估抗炎效果。研究结果表明6 nmol/mL、12 nmol/mL和24 nmol/mL的人乳N-链寡糖组可以显著降低LDH的溢出量、IL-8和IL-12的分泌水平;12 nmol/mL和24 nmol/mL的人乳N-链寡糖组可以显著降低TNF-α的分泌水平。12 nmol/mL和24 mol/mL的牛乳N-链寡糖组可以显著降低LDH的溢出量、IL-8、IL-12和TNF-α的分泌水平。人乳N-链寡糖组在6 nmol/mL时对细胞有显著的抗炎作用,而牛乳N-链寡糖组在6 nmol/mL时没有显著作用,表明人乳N-链寡糖组抑制细胞炎症的最小作用浓度比牛乳N-链寡糖组的最小作用浓度低。24 nmol/mL的人乳N-链寡糖组可以将损伤细胞中LDH的溢出量、IL-8、IL-12和TNF-α的分泌水平降低至正常水平,而24 nmol/mL的牛乳N-链寡糖组只能将损伤细胞中LDH的溢出量和IL-8的分泌水平降低至正常水平。上述结果表明人乳N-链寡糖组比牛乳N-链寡糖组具有更好的抗炎活性。2.乳N-链寡糖组中不同类型岩藻糖基化修饰对Caco-2细胞的抗炎活性研究用本实验室挖掘并自主表达的三种重组岩藻糖苷酶AcFuc 3141(α-1,2)、EoFuc 3066(α-1,3/4)和EoFuc 0918(α-1,6)对乳N-链寡糖组进行不同的酶切处理,根据HPLC结果计算人乳和牛乳中不同类型岩藻糖基化N-链寡糖组的相对含量。结果表明人乳N-链寡糖组中,α-1,2连接的岩藻糖较少,α-1,3/4连接和α-1,6连接的岩藻糖较多;牛乳N-链寡糖组中,α-1,2连接和α-1,3/4连接的岩藻糖较少,α-1,6连接的岩藻糖较多。人乳和牛乳N-链寡糖组之间,不论是含有单种连接位点的岩藻糖还是含有所有连接位点的岩藻糖的相对含量都有显著差异。为了探究不同类型岩藻糖基化修饰对人乳和牛乳N-链寡糖组抗炎活性的影响,以Caco-2细胞为模型,LPS诱导细胞产生炎症,分别用24 mol/mL的去α-1,2连接、去α-1,3/4连接、去α-1,6连接和去全部岩藻糖的乳N-链寡糖组孵育细胞24 h,ELISA试剂盒检测细胞裂解液中IL-8、IL-12和TNF-α的分泌水平评估抗炎效果。结果表明这几种样品对抑制损伤细胞中促炎症因子IL-8、IL-12和TNF-α的分泌水平都有显著的作用。与原始人乳N-链寡糖组的抗炎作用相比,去α-1,2连接岩藻糖的人乳N-链寡糖组的抗炎作用没有显著差异,去α-l,3/4连接、去α-1,6连接和去全部岩藻糖的人乳N-链寡糖组的抗炎作用显著降低,表明α-1,3/4连接和α-1,6连接的岩藻糖在人乳N-链寡糖组抑制细胞炎症的过程中起一定的作用;与原始牛乳N-链寡糖组的抗炎作用相比,去α-1,2连接和去α-1,3/4连接岩藻糖的牛乳N-链寡糖组的抗炎作用没有显著差异,而去α-1,6连接和去全部岩藻糖的牛乳N-链寡糖组的抗炎作用显著降低,表明α-1,6连接的岩藻糖在牛乳N-链寡糖组抑制细胞炎症的过程中起一定的作用。

关键词：人乳牛乳 N-链寡糖组不同类型岩藻糖基化抗炎活性

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数字聚合酶链式反应技术在食品安全核酸检测领域中的研究进展及标准化现状

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食品科学 2024年第18期45卷 350-360页

作者：秦爱王娟邓方进余秋地周朝旭李根容肖昭竞重庆市计量质量检测研究院重庆401121 中国电信股份有限公司重庆分公司重庆401121

数字聚合酶链式反应(digital polymerase chain reaction,dPCR)是一种新型核酸扩增技术,无需借助内参基因和标准曲线,通过极限稀释和泊松分布统计即可实现核酸单分子层面的绝对定量分析,具有高灵敏度、高精确度和高耐受性等技术优势,在... 详细信息

数字聚合酶链式反应(digital polymerase chain reaction,dPCR)是一种新型核酸扩增技术,无需借助内参基因和标准曲线,通过极限稀释和泊松分布统计即可实现核酸单分子层面的绝对定量分析,具有高灵敏度、高精确度和高耐受性等技术优势,在食品安全核酸检测领域具有极大的发展潜力。本文介绍了dPCR的技术原理、优缺点及商业化平台,综述了dPCR在食源性致病菌检测、动物和植物源性成分检测、转基因成分检测和食源性病毒检测等领域的研究进展及标准化现状,并分析了该技术存在的技术难题和未来发展方向,以期为dPCR在食品安全核酸检测领域中的应用推广和标准制定提供研究思路。

关键词：数字聚合酶链式反应食品安全标准化

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数字PCR技术在食品安全核酸检测领域中的研究进展及标准化现状

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食品科学 2024年

作者：秦爱王娟邓方进余秋地周朝旭李根容肖昭竞重庆市计量质量检测研究院中国电信股份有限公司重庆分公司

数字聚合酶链式反应（digital polymerase chain reaction，dPCR）是一种新型的核酸扩增技术，无需借助内参基因和标准曲线，通过极限稀释和泊松分布统计即可实现核酸单分子层面的绝对定量分析，具有高灵敏度、高精确度和高耐受性等技... 详细信息

数字聚合酶链式反应（digital polymerase chain reaction，dPCR）是一种新型的核酸扩增技术，无需借助内参基因和标准曲线，通过极限稀释和泊松分布统计即可实现核酸单分子层面的绝对定量分析，具有高灵敏度、高精确度和高耐受性等技术优势，在食品安全核酸检测领域具有极大的发展潜力。本文介绍了dPCR的技术原理、优缺点及商业化平台，综述了dPCR在食源性致病菌检测、动物和植物源性成分检测、转基因成分检测和食源性病毒检测等领域的研究进展及标准化现状，并分析了该技术存在的技术难题和未来发展方向，以期为dPCR在食品安全核酸检测领域中的应用推广和标准制定提供研究思路。

关键词：数字聚合酶链式反应食品安全标准化

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十种食源性致病菌的多重PCR快速检测方法

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食品与发酵工业 2022年第17期48卷 273-281,I0015,I0016页

作者：张明娟刘明明余秋地袁磊王娟秦爱李根容重庆市计量质量检测研究院重庆400020

为建立能够同时检测食品中单核细胞增生李斯特氏菌、沙门氏菌属、克罗诺杆菌属、志贺氏菌属、金黄色葡萄球菌、副溶血性弧菌、大肠埃希氏菌O157:H7、铜绿假单胞菌、粪链球菌、产气荚膜梭菌等10种食源性致病菌的多重PCR方法,通过特异性... 详细信息

为建立能够同时检测食品中单核细胞增生李斯特氏菌、沙门氏菌属、克罗诺杆菌属、志贺氏菌属、金黄色葡萄球菌、副溶血性弧菌、大肠埃希氏菌O157:H7、铜绿假单胞菌、粪链球菌、产气荚膜梭菌等10种食源性致病菌的多重PCR方法,通过特异性引物的设计、引物特异性验证、引物灵敏度验证和多重PCR检测体系主要反应条件优化,建立多重PCR检测体系,并对其特异性、灵敏度以及人工感染样品应用进行评价。结果表明,建立的多重PCR检测体系可以扩增出10种食源性致病菌的特异目标条带,无非特异扩增。测序结果与目的基因序列进行比对,其序列同源性高达98%,体系灵敏度可达10ng/μL。人工污染样品应用结果表明,采用多重PCR方法简单快速,仅需简单增菌,检出限可达10 CFU/mL,整个检测时间在48 h以内。建立的多重PCR检测体系特异性强、灵敏度较高,与检验机构实际检测工作联系紧密,具有推广应用价值。

关键词：食源性致病菌多重PCR 快速检测特异性灵敏度

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重组酶介导等温核酸扩增技术在食源性致病菌检测中的应用

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食品安全质量检测学报 2023年第10期14卷 278-286页

作者：秦爱刘明明邓方进余秋地肖昭竞重庆市计量质量检测研究院重庆401121 中国电信股份有限公司重庆分公司重庆401121

重组酶介导等温核酸扩增(recombinase aided amplification, RAA)是一种新型的国产等温扩增技术,其扩增反应可以在恒定温度(37~42℃)下快速完成,具有较高检测效率,且对精密仪器和检测场地的要求较低,更能应对大批量筛查、应急处理等应... 详细信息

重组酶介导等温核酸扩增(recombinase aided amplification, RAA)是一种新型的国产等温扩增技术,其扩增反应可以在恒定温度(37~42℃)下快速完成,具有较高检测效率,且对精密仪器和检测场地的要求较低,更能应对大批量筛查、应急处理等应用场景。经10年的科学研究和实践应用, RAA技术已取得了诸多突破性成果,本文介绍了RAA技术的反应原理,综述了近3年RAA技术及其扩展技术在食源性致病菌检测中的研究进展,总结了RAA技术在样品前处理、假阳性和假阴性、检测通量、试剂盒开发等方面存在的技术难点,并对未来的研究方向提出了若干建议,以期为RAA技术在食源性致病菌快速检测中的应用推广提供研究思路。

关键词：重组酶介导等温核酸扩增食源性致病菌分子检测

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食用淀粉及其制品鉴别技术研究进展

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食品科技 2024年第9期49卷 341-348页

作者：张明娟袁磊余秋地周朝旭肖朝竟李根容重庆市计量质量检测研究院重庆401120

近年来我国食用淀粉产业发展迅速,各类淀粉总产量早已突破千万吨,显示出巨大的市场价值。市场上,不同种类淀粉价格相差很大,部分厂家为降低生产成本,出现以低价淀粉冒充高价淀粉的行为,这严重损害了消费者的合法权益。因此,近年来针对... 详细信息

近年来我国食用淀粉产业发展迅速,各类淀粉总产量早已突破千万吨,显示出巨大的市场价值。市场上,不同种类淀粉价格相差很大,部分厂家为降低生产成本,出现以低价淀粉冒充高价淀粉的行为,这严重损害了消费者的合法权益。因此,近年来针对淀粉及其制品掺假鉴别技术的研究和开发具有广阔的应用前景。文章就当前淀粉及其制品鉴别方法的检测原理、优缺点、应用进行了综述,并对现有方法的局限性和未来发展方向进行讨论,以期为淀粉及其制品鉴别检测技术的开发和利用提供参考。

关键词：淀粉淀粉制品鉴别

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一次性餐具中沙门氏菌检验能力验证结果和关键控制点分析

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食品安全导刊 2024年第9期 89-92页

作者：王娟袁磊秦爱余秋地重庆市计量质量检测研究院重庆401121

为了准确验证实验室对一次性餐具中沙门氏菌的检验能力,实验室自愿参加一次性餐具用品中沙门氏菌的测定能力验证计划。本实验按照《食品安全国家标准消毒餐(饮)具》(GB 14934—2016)对两份样品中的沙门氏菌进行检验,检验结果均为阳性,... 详细信息

为了准确验证实验室对一次性餐具中沙门氏菌的检验能力,实验室自愿参加一次性餐具用品中沙门氏菌的测定能力验证计划。本实验按照《食品安全国家标准消毒餐(饮)具》(GB 14934—2016)对两份样品中的沙门氏菌进行检验,检验结果均为阳性,取得满意结果,同时对能力验证过程中的一些关键质控制点进行了简单分析。

关键词：一次性餐具沙门氏菌能力验证关键控制点分析

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护色剂的研究现状及未来发展趋势

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农产品加工 2016年第7期 62-63,66页

作者：邹倩杨思静余秋地陈杨李敏长江师范学院生命科学与技术学院重庆408000

对护色剂在肉制品、果蔬加工中的应用进行概述,简述护色剂对酶类的影响及对色素的保护作用,对它们在食品加工中的安全及替代品等方面进行总结,并分析护色剂在未来食品行业的发展趋势。

关键词：护色剂研究现状发展趋势

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奶粉中蜡样芽胞杆菌检测能力验证结果和关键控制点分析

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质量安全与检验检测 2024年第6期34卷 60-66页

作者：余秋地秦爱张明娟袁磊刘明明王娟重庆市计量质量检测研究院重庆401121

为提升微生物实验室蜡样芽胞杆菌检测能力,加强实验室质量控制,实验室参加了国家市场监督管理总局食品安全抽检监测司组织的“奶粉中蜡样芽胞杆菌检验能力评价”。根据作业指导书和GB 4789.14—2014《食品安全国家标准食品微生物学检验... 详细信息

为提升微生物实验室蜡样芽胞杆菌检测能力,加强实验室质量控制,实验室参加了国家市场监督管理总局食品安全抽检监测司组织的“奶粉中蜡样芽胞杆菌检验能力评价”。根据作业指导书和GB 4789.14—2014《食品安全国家标准食品微生物学检验蜡样芽胞杆菌检验》对样品编号为NFLY-43和NFLY-82的2份能力验证样品进行定量检测,并对检测过程和结果进行关键控制点分析。综合革兰氏染色镜检、VITEK 2 Compact鉴定、根状生长试验和蛋白质毒素结晶试验等生化鉴定结果,样品NFLY-43结果报告为1.1×10^(4) CFU/g,样品NFLY-82结果报告为6.2×10^(4) CFU/g,其检测结果获得满意评价。

关键词：蜡样芽胞杆菌能力验证质量控制

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五重实时荧光聚合酶链式法快速筛查食用淀粉及其制品中植物源性成分

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食品安全质量检测学报 2024年第13期15卷 207-214页

作者：张明娟余秋地王娟李根容肖昭竟周朝旭重庆市计量质量检测研究院重庆401120

目的建立五重实时荧光聚合酶链式方法快速筛查食用淀粉及其制品中植物源性成分。方法首先设计豌豆、绿豆、木薯、玉米的特异性引物、探针,建立多重实时荧光聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)检测方法 ,再验证方法的特异... 详细信息

目的建立五重实时荧光聚合酶链式方法快速筛查食用淀粉及其制品中植物源性成分。方法首先设计豌豆、绿豆、木薯、玉米的特异性引物、探针,建立多重实时荧光聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)检测方法 ,再验证方法的特异性和绝对灵敏度,最后通过样品掺假模拟实验验证方法的检出限。结果该方法的特异性强,仅能检出豌豆源性、绿豆源性、木薯源性、玉米源性成分;灵敏度较高,对绿豆源性和木薯源性的检测灵敏度可达到1×10^(–1) ng/μL水平,豌豆源性和玉米源性的检测灵敏度可达到1×10^(–2) ng/μL水平。结论本研究建立的五重实时荧光PCR方法可用来区分市场上淀粉及其制品中的豌豆源性、绿豆源性、玉米源性和木薯源性成分,具有较好的应用价值。

关键词：五重实时荧光聚台酶链式反应淀粉淀粉制品检测方法

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