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DOG融合蛋白对缺氧CT26细胞中Notch信号的阻断作用

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DOG融合蛋白对缺氧CT26细胞中Notch信号的阻断作用

作者：何爱丽苏州大学

学位级别：硕士

体外研究表明,缺氧促进肿瘤细胞的侵袭和转移与Notch信号有关。为了探讨结肠癌缺氧区细胞中的Notch信号与肿瘤体内生长的关系,本研究构建了特异性阻断缺氧细胞中Notch信号的DOG融合蛋白表达载体。论文主要涉及以下内容,首先,分别构建了D... 详细信息

体外研究表明,缺氧促进肿瘤细胞的侵袭和转移与Notch信号有关。为了探讨结肠癌缺氧区细胞中的Notch信号与肿瘤体内生长的关系,本研究构建了特异性阻断缺氧细胞中Notch信号的DOG融合蛋白表达载体。论文主要涉及以下内容,首先,分别构建了DNMAML1-GFP、ODD-DNMAML1-GFP ( ODG )和DNMAML1-ODD-GFP(DOG)三种不同的融合蛋白表达载体。其次,将上述融合蛋白表达载体转入293T人胚肾细胞,借助荧光显微镜,观察不同融合蛋白在正常氧和缺氧细胞中的表达,发现DOG融合蛋白的稳定存在依赖于缺氧环境。然后,通过逆转录病毒介导DOG融合蛋白在CT26结肠癌细胞中表达,借助荧光显微镜观察荧光强度,应用Western印迹和实时荧光定量PCR(real-time fluorogentic quantitative-PCR, RFQ-PCR)等方法验证DOG融合蛋白对缺氧的依赖性和抑制Notch信号的能力。最终,通过失巢凋亡实验和小鼠体内肿瘤形成实验,探讨了DOG融合蛋白对CT26结肠癌细胞的生物学作用。 1.成功构建了DNMAML1-GFP、ODG和DOG三种不同的融合蛋白表达载体酶切和测序结果表明,构建DNMAML1-GFP、ODG和DOG三种不同的融合蛋白表达载体获得成功。 ***融合蛋白在缺氧的293T细胞中表达增强因为DNMAML1、ODD和GFP为融合蛋白,故293T细胞中绿色荧光的强弱可以初步反映融合蛋白表达量的多少。荧光显微镜下观察DNMAML1-GFP、DOG、ODG三种融合蛋白在正常氧和缺氧细胞中的表达情况,结果发现DOG融合蛋白在缺氧细胞中的表达明显增强。 3.在结肠癌细胞(CT26)中DOG融合蛋白的稳定存在依赖于缺氧条件成功获得逆转录病毒感染的CT26稳定细胞系(MID-DOG/CT26和MID-GFP/ CT26)。在荧光显微镜下观察,发现DOG融合蛋白的稳定存在依赖于缺氧环境,Western印记法同样表明DOG融合蛋白只在缺氧的CT26细胞中存在。 ***融合蛋白特异性抑制缺氧CT26细胞中的Notch信号利用RFQ-PCR检测Notch信号下游靶基因Hes1 mRNA的表达水平。与GFP对照相比,DOG融合蛋白对正常CT26细胞中Hes1 mRNA水平无明显影响,该蛋白显著降低缺氧CT26细胞中Hes1 mRNA水平(P <0.01)。上述结果表明,DOG融合蛋白能够特异性抑制缺氧CT26细胞中的Notch信号。 ***融合蛋白促进缺氧的CT26细胞体外的失巢凋亡与对照相比,DOG融合蛋白对正常CT26细胞的失巢凋亡没有明显影响,却促进缺氧CT26细胞的失巢凋亡(P <0.01)。 ***融合蛋白抑制CT26细胞在BALB/c小鼠体内生长体内成瘤实验表明,与GFP对照蛋白相比,DOG融合蛋白抑制CT26细胞在小鼠体内成瘤;小鼠接种MID-DOG/CT26细胞21天后,肿瘤组织的质量明显低于MID-GFP/CT26对照组(P <0.01)。通过上述结果,我们得出以下结论:DOG融合蛋白特异性阻断缺氧CT26细胞中的Notch信号;结肠癌缺氧区细胞中的Notch信号促进肿瘤体内生长。

关键词：缺氧 DOG融合蛋白 Notch信号结肠癌

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几种食用油在煎炸过程中的品质变化研究

几种食用油在煎炸过程中的品质变化研究

作者：何爱丽河南工业大学

学位级别：硕士

利用棕榈油、花生油、菜籽油在120℃、140℃、160℃、180℃四个温度梯度下连续加热26h,通过对不同温度不同时间所取油样理化指标的测定,研究棕榈油、花生油、菜籽油在连续加热过程中的品质变化及煎炸稳定性。结果表明,经过26h的连续加热... 详细信息

利用棕榈油、花生油、菜籽油在120℃、140℃、160℃、180℃四个温度梯度下连续加热26h,通过对不同温度不同时间所取油样理化指标的测定,研究棕榈油、花生油、菜籽油在连续加热过程中的品质变化及煎炸稳定性。结果表明,经过26h的连续加热,棕榈油、花生油、菜籽油的酸值在0h分别为0.18mg/g、0.79mg/g、0.14mg/g,在120℃和180℃连续加热至26h时的酸值分别为1.21mg/g、1.22mg/g、0.80mg/g和2.32mg/g、2.64mg/g、2.12mg/g;三种油的羰基值在加热前分别为3.58meq/kg、2.59meq/kg、4.38meq/kg,在120℃和180℃连续加热26h时的羰基值分别增为63.03meq/kg、77.00meq/kg、70.20meq/kg和83.95meq/kg、94.98meq/kg、91.58meq/kg;极性组分含量在加热前分别为4.00%、5.53%、5.82%,在120℃和180℃连续加热26h时的极性组分含量分别增为27.97%、29.18%、30.31%和32.83%、34.07%、34.31%;对照GB 7102.1-2003《食用植物油煎炸过程中的卫生标准》,三种油连续煎炸26h后酸值仍符合≤5mg/g的限量,棕榈油在四个温度梯度下的羰基值超过50meq/kg限量的时间分别为22h、20h、20h、16h;花生油在四个温度梯度下的羰基值超过50meq/kg限量的时间分别为20h、16h、14h、14h;菜籽油在四个温度梯度下的羰基值超过50meq/kg限量的时间分别为20h、16h、12h、12h。利用棕榈油、花生油、菜籽油在120℃、140℃、160℃、180℃四个温度梯度下间断加热26h,通过对不同温度不同时间所取油样卫生指标的检测,结果表明,经过26h的间断加热,棕榈油、花生油、菜籽油的酸值0h分别为0.18mg/g、0.79mg/g、0.14mg/g,在120℃和180℃间断加热至26h时的酸值分别为1.28mg/g、1.98mg/g、1.05mg/g和3.48mg/g、3.79mg/g、3.03mg/g;羰基值在加热前分别为3.58meq/kg、2.59meq/kg、4.38meq/kg,在120℃和180℃间断加热26h时的羰基值分别增为70.26meq/kg、86.56meq/kg、74.49meq/kg和86.60meq/kg、98.14meq/kg、94.39meq/kg;三种油连续煎炸26h后酸值仍符合≤5mg/g的限量,棕榈油在四个温度梯度下的羰基值超过50meq/kg限量的时间分别为20h、20h、20h、12h;花生油在四个温度梯度下的羰基值超过50meq/kg限量的时间分别为18h、16h、14h、10h;菜籽油在四个温度梯度下的羰基值超过50meq/kg限量的时间分别为20h、16h、10h、10h。以生活中常用的薯条作为煎炸材料,分别对棕榈油、花生油、菜籽油进行160℃连续加热和连续煎炸试验。结果表明:棕榈油的酸值由煎炸前的0.18mg/g,在160℃连续加热和连续煎炸26h后分别增加到1.80mg/g和1.90mg/g;花生油的酸值由煎炸前的0.79mg/g,在160℃连续加热和连续煎炸26h后分别增加到1.97mg/g和2.90mg/g;菜籽油的酸值由煎炸前的0.14mg/g,在160℃连续加热和连续煎炸26h后分别增加到1.71mg/g和1.84mg/g。棕榈油的羰基值由煎炸前的3.58meq/kg,在160℃连续加热18h后增加至增46.68meq/kg再增加至26h的80.25meq/kg;在160℃连续煎炸12h后增加至47.18meq/kg再增加至26h的83.07meq/kg;花生油的羰基值由煎炸前的2.59meq/kg,在160℃连续加热14h的增加到51.45meq/kg再增加到26h的94.95meq/kg,在160℃连续煎炸10h的增加到49.52meq/kg再增加到26h的90.97meq/kg;菜籽油的羰基值由煎炸前的4.38meq/kg,在160℃连续加热10h的增加到52.06meq/kg再增加到26h的85.76meq/kg,在160℃连续煎炸10h的增加到56.11meq/kg再增加到26h的88.86meq/kg。棕榈油的极性组分含量由0h时的4.00%,在160℃连续加热12h后极性组分含量增加为16.68%,26h后增加为30.94%,在160℃连续煎炸12h后极性组分含量增加为20.32%,26h后增加为34.33%;花生油的极性组分含量由0h时的5.53%,在160℃连续加热12h后极性组分含量增加为18.37%,26h后增加为32.70%,在160℃连续煎炸12h后极性

关键词：食用油品质变化极性组分羰基值

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EM车用润滑油在中国的营销渠道设计

EM车用润滑油在中国的营销渠道设计

作者：何爱丽长春理工大学

学位级别：硕士

随着中国汽车行业的快速发展,车用润滑油的市场需求也越来越大,这无疑加剧了国外润滑油品牌和国内润滑油品牌之间的竞争。中国润滑油企业要想在激烈的竞争中确立市场地位、赢得竞争优势,就必须注重润滑油营销渠道的规范管理和运行。因... 详细信息

随着中国汽车行业的快速发展,车用润滑油的市场需求也越来越大,这无疑加剧了国外润滑油品牌和国内润滑油品牌之间的竞争。中国润滑油企业要想在激烈的竞争中确立市场地位、赢得竞争优势,就必须注重润滑油营销渠道的规范管理和运行。因为营销渠道是连接企业与消费者的桥梁,营销渠道的优劣决定着企业能否获得竞争的主动权和持久的竞争优势,决定着企业的可持续发展空间,渠道在润滑油商家未来竞争局势中越来越具有更加重要的地位。本论文对埃克森美孚公司车用润滑油在中国的营销渠道设计进行研究,分析了埃克森美孚公司的现有渠道模式,并运用模糊层次分析法对渠道成员和渠道模式进行优化分析,使我们能能够通过定性和定量分析深入剖析这一跨国石油公司较为科学的市场营销渠道。同时,通过对埃克森美孚车用润滑油营销渠道的分析,可以为我国润滑油企业制定合适的营销渠道,开拓新的思路,提供参考依据。

关键词：车用润滑油营销渠道 EM

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妊高征患者凝血纤溶及血流变学改变及意义

中国实用妇科与产科杂志 2003年第2期19卷 99-100页

作者：董晋何爱丽谭宏伟陕西省妇幼保健院妇产科西安710003 西安交通大学第二医院血液科 710004

目的　探讨凝血、纤溶及血流变学在妊高征发病中的作用。方法　对 69例轻、中、重度妊高征患者 ,采用美国ACL 2 0 0全血自动凝血分析仪检测凝血指标 ,用发色底物法检测组织型纤维蛋白溶酶原激活剂 (t PA)及纤溶酶原激活物抑制剂 (PAI 1... 详细信息

目的　探讨凝血、纤溶及血流变学在妊高征发病中的作用。方法　对 69例轻、中、重度妊高征患者 ,采用美国ACL 2 0 0全血自动凝血分析仪检测凝血指标 ,用发色底物法检测组织型纤维蛋白溶酶原激活剂 (t PA)及纤溶酶原激活物抑制剂 (PAI 1) ,用LBY N5A旋转式血液流变仪测血粘度。结果　妊高征患者的部分激活的凝血活酶时间 (APTT)、凝血酶原时间 (PT)缩短 ,FG含量升高 ,PAI 1活性升高 ,血粘度升高 ,与正常非妊娠妇女、妊娠妇女相比 ,P 0 0 5 ,t PA在四者之间无显著性差异。结论　凝血、纤溶及血流变学改变在妊高征的发生。

关键词：凝血纤溶血流变学妊娠高血压综合征临床意义

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原发免疫性血小板减少症血清标志物的筛选

中国实验血液学杂志 2016年第3期24卷 788-794页

作者：张扬白菊张王刚何爱丽西安交通大学医学部第二附属医院血液科陕西西安710004

目的:利用弱阳离子磁珠联合MALDI-TOF-MS分析ITP患者和健康对照血清蛋白质表达谱,鉴定差异表达蛋白,建立ITP的诊断模型,探索ITP的发病机制。方法:选择ITP患者40例和健康对照40例,应用美国布鲁克.道尔顿(Bruker Daltonics)公司生产的WCX-... 详细信息

目的:利用弱阳离子磁珠联合MALDI-TOF-MS分析ITP患者和健康对照血清蛋白质表达谱,鉴定差异表达蛋白,建立ITP的诊断模型,探索ITP的发病机制。方法:选择ITP患者40例和健康对照40例,应用美国布鲁克.道尔顿(Bruker Daltonics)公司生产的WCX-MB(Weak cation exchange nanometer magnetic beads)捕获血清蛋白质组分,用Autoflex II基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱仪MALDI-TOF-MS检测各样品的蛋白质质谱,再利用Bruker Daltonics公司的Cliprotools TM2.2软件进行数据分析,筛选差异蛋白质分子并建立ITP诊断模型,并选取20例ITP血清和20例健康对照血清对产生的模型进行分类验证和交叉验证。结果:40例ITP建模血清标本与40例健康对照建模血清标本经Clinprot系统检测蛋白质质谱,应用Cliprotools TM2.2软件进行数据分析,在分子量700-10000 Da范围内,可检测到55个差异蛋白质表达峰,其中有统计学意义的差异蛋白质峰19个(P<0.05),在ITP组表达上调的蛋白质有5个,下调的蛋白质有14个。软件自动将区分疾病组与对照组能力最强的10个质谱峰建成了一个基于SNN(Supervised Neural Network Algorithm)算法的诊断模型,建模组判断ITP的预期敏感性为100%,预期特异性为100%。应用建立的SNN诊断模型对验证组进行分类验证,20例ITP病例及20例健康对照均被全部正确识别;交叉验证对ITP患者和健康对照检出的正确率为100%。结论:应用具有高通量及良好重复性Clin Prot系统建立的ITP SNN模型由10个显著差异蛋白质峰构成,能有效区分ITP患者与正常对照,而且敏感性和特异性较高。

关键词：原发性免疫性血小板减少症弱阳离子交换纳米磁珠基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱血清蛋白质组学

自体淋巴细胞免疫重建对白血病瘤苗的加强作用

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西安交通大学学报（医学版） 2005年第4期26卷 355-357,408页

作者：许康玲张王刚何爱丽西安交通大学第二医院血液科陕西西安710004

目的观察在免疫重建过程中应用白血病瘤苗对DBA/2小鼠的一般状况、抵御L1210细胞攻击以及小鼠保护性免疫功能的影响。方法用同系小鼠脾脏淋巴细胞对照射后的免疫缺陷鼠进行免疫重建,同时用灭活的L1210细胞皮下注射免疫DBA/2小鼠,7d后用L... 详细信息

目的观察在免疫重建过程中应用白血病瘤苗对DBA/2小鼠的一般状况、抵御L1210细胞攻击以及小鼠保护性免疫功能的影响。方法用同系小鼠脾脏淋巴细胞对照射后的免疫缺陷鼠进行免疫重建,同时用灭活的L1210细胞皮下注射免疫DBA/2小鼠,7d后用L1210细胞皮下攻击小鼠,观察小鼠的一般状况、成瘤率、瘤块生长情况。通过ELISA法测定外周血IFN-γ含量,以评估细胞免疫作用的强弱;通过病理切片了解瘤块中心坏死区及周围浸润细胞情况。结果与对照组相比,免疫重建+瘤苗可以有效提高单纯应用瘤苗所产生的保护性免疫功能,IFN-γ含量明显升高;用L1210细胞攻击,成瘤小鼠瘤块生长缓慢,瘤周单个核细胞浸润明显,瘤块内部肿瘤细胞坏死明显,生存期大大延长。结论在免疫重建的同时应用瘤苗,可以大大加强瘤苗的保护性免疫作用。

关键词：白血病肿瘤疫苗免疫重建

淋巴细胞功能相关抗原-3与血液系统恶性肿瘤的研究进展

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国外医学（输血及血液学分册） 1998年第6期21卷 390-395页

作者：何爱丽西安医科大学第二临床医学院血液内科 710004

T淋巴细胞的活化需要2条相互独立且具有协同作用的信号传导途径。淋巴细胞功能相关抗原-3(LFA-3)作为共刺激信号在活化T细胞中起一定的作用,从而在体外产生抗肿瘤作用。但其在某些血液系统恶性肿瘤细胞上呈低表达,可能与肿瘤的发病有关... 详细信息

T淋巴细胞的活化需要2条相互独立且具有协同作用的信号传导途径。淋巴细胞功能相关抗原-3(LFA-3)作为共刺激信号在活化T细胞中起一定的作用,从而在体外产生抗肿瘤作用。但其在某些血液系统恶性肿瘤细胞上呈低表达,可能与肿瘤的发病有关。本文介绍了LFA-3的结构与分布、抗肿瘤作用及与血液系统恶性肿瘤的关系。

关键词：血液系统肿瘤 LFA-3 T细胞活化

具有缺氧反应性的Notch信号抑制蛋白调节鼠结肠癌细胞的体内生长

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肿瘤 2009年第11期29卷 1019-1024页

作者：何爱丽马爱辉瞿玉兰郝向芳赵林川刘永忠苏州大学医学部基础医学与生命科学院苏州215123 上海交通大学肿瘤研究所癌基因及相关基因国家重点实验室上海200032

目的:研究缺氧细胞中的Notch信号对小鼠结肠癌细胞体内生长的影响。方法:将缺氧诱导因子(hypoxia-inducible factor,HIF)-1α中的氧依赖性蛋白降解结构域(oxygen-dependent degradation domain,ODD)、抑制Notch信号的mastermind样(mastermind-like,MAML)突变体蛋白1和绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)重组构建融合蛋白表达载体。通过在免疫荧光显微镜下观察荧光强度,应用Western印迹和实时荧光定量PCR(real-time fluorogentic quantitative-PCR,RFQ-PCR)检测融合蛋白对缺氧的反应性和抑制Notch信号的能力。通过失巢凋亡实验和小鼠体内肿瘤形成实验,观察融合蛋白DNMAML1-ODD-GFP(DOG)对CT26结肠癌细胞体外失巢凋亡和小鼠体内肿瘤生长的影响。结果:DOG融合蛋白在细胞中的稳定表达依赖于缺氧条件,该融合蛋白能够靶向抑制缺氧CT26细胞中的Notch信号靶基因Hes1 mRNA的表达(P<0.01)。体外失巢凋亡实验表明,DOG融合蛋白可显著促进缺氧CT26细胞的失巢凋亡(P<0.01)。小鼠体内成瘤实验显示,DOG融合蛋白的表达可抑制结肠癌细胞CT26在小鼠体内的生长(P<0.01)。结论:成功构建了靶向阻断缺氧细胞中Notch信号的融合蛋白表达载体。缺氧结肠癌细胞中的Notch信号对于肿瘤生长起重要作用。

关键词：结肠肿瘤细胞缺氧重组融合蛋白质类 Notch信号

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多潘立酮治疗功能性消化不良的临床疗效

中国当代医药 2010年第17期17卷 64-65页

作者：何爱丽河南省三门峡市职工康复医院河南三门峡472000

目的:探讨多潘立酮治疗功能性消化不良的临床疗效。方法:选择本院2006年3月～2008年10月收治的功能性消化不良患者30例(实验组)的临床资料,另选30例作为对照组,观察用药后两组的症状改善情况并进行疗效比较。结果:本组治疗中实验组总有... 详细信息

目的:探讨多潘立酮治疗功能性消化不良的临床疗效。方法:选择本院2006年3月～2008年10月收治的功能性消化不良患者30例(实验组)的临床资料,另选30例作为对照组,观察用药后两组的症状改善情况并进行疗效比较。结果:本组治疗中实验组总有效率为96.67%,明显高于对照组的90.00%,P<0.05。两组患者治疗前后胃电图变化进行分析,实验组与对照组比较,差异有统计学意义,P<0.05。结论:多潘立酮治疗功能性消化不良效果显著,患者满意度高,副作用少。

关键词：多潘立酮治疗功能性消化不良