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产几丁质酶菌株SWCH-6的筛选、鉴定及其产酶条件的优化研究

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微生物学通报 2008年第5期35卷 705-711页

作者：王海东陈飚伦镜盛王成胡忠汕头大学生物系汕头515063

从汕头海湾养殖区域的海底沉积物中分离到1株几丁质酶活性较高的菌株,命名为SWCH-6,根据菌株的形态特征、生理生化特征和16SrDNA序列,确定该菌株为嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophlilla)。采用单因素优化方法结合正交实验,得到菌株SWCH-... 详细信息

从汕头海湾养殖区域的海底沉积物中分离到1株几丁质酶活性较高的菌株,命名为SWCH-6,根据菌株的形态特征、生理生化特征和16SrDNA序列,确定该菌株为嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophlilla)。采用单因素优化方法结合正交实验,得到菌株SWCH-6产几丁质酶的最佳发酵条件:胶体几丁质25.0g/L,胰蛋白胨10.0g/L,陈海水1.0L,pH8.5,32℃,150r/min培养72h;在该条件下酶活力达0.39U/mL。此外,菌株所产几丁质酶的最适催化pH5.0;最适催化温度为40℃;Cu2+、Fe3+及表面活性剂Tween-80能增强该酶的催化活性;Zn2+、Mn2+及表面活性剂SDS、洗衣粉对该酶的催化活性有抑制作用,与其它几丁质酶存在着一些不同。

关键词：几丁质酶嗜水气单胞菌优化

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基于整合思维的分子生物学实验教学改革

实验室研究与探索 2015年第8期34卷 173-178页

作者：伦镜盛胡忠钟名其黄淑芬汕头大学理学院生物实验教学中心广东汕头515063 汕头大学文学院整合思维项目组广东汕头515063

汕头大学从2011年开始推行整合思维教育计划,即从2011级新生开始开设整合思维核心课程,在各学院中挑选合适的课程开展整合思维试点项目,发展和实施基于整合思维的课程,以此逐步建立较为完整的汕头大学整合思维模式框架。论文运用整合思... 详细信息

汕头大学从2011年开始推行整合思维教育计划,即从2011级新生开始开设整合思维核心课程,在各学院中挑选合适的课程开展整合思维试点项目,发展和实施基于整合思维的课程,以此逐步建立较为完整的汕头大学整合思维模式框架。论文运用整合思维的方法,从课程设计、教学模式等方面,探索将先进的整合思维理念植入分子生物学实验教学,以探讨整合思维理论对实验教学的借鉴意义。

关键词：整合思维分子生物学实验教学改革

1例急性期的2型登革病毒感染病例的检测结果分析

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中华实验和临床病毒学杂志 2019年第4期33卷 437-439页

作者：郭川林洁敏陈婉张志华李进伦镜盛汕头市疾病预防控制中心 515041 汕头大学生物学系 515063

目的分析登革病毒(dengue virus,DENV)感染病例各检测指标值的关系,为制定合理的检测策略提供经验。方法以1例急性期2型DENV感染病例为例,分析检测中抗原、抗体及核酸结果之间的联系。结果在NS1抗原初检、IgM和IgG抗体检测皆为阴性情况... 详细信息

目的分析登革病毒(dengue virus,DENV)感染病例各检测指标值的关系,为制定合理的检测策略提供经验。方法以1例急性期2型DENV感染病例为例,分析检测中抗原、抗体及核酸结果之间的联系。结果在NS1抗原初检、IgM和IgG抗体检测皆为阴性情况下,核酸检测出现阳性结果;该病例所感染毒株的NS1编码基因未发生明显变异;而更换另一种NS1抗原试剂进行复检则结果阳性。结论实验室要进行登革病例的排查应以核酸检测结果为依据,NS1抗原用另一种试剂进行复检可以减少漏检的几率,增加结果的可信度。

关键词：登革病毒抗原核酸抗体

汕头海域几丁质酶产生菌的筛选及其几丁质酶编码基因研究

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应用与环境生物学报 2009年第4期15卷 511-514页

作者：王海东刘韫滔林伯坤宋小慧伦镜盛胡忠汕头大学生物系汕头515063 徐州生物工程高等职业学校徐州221006

在汕头海域表层沉积物中分离得到69株高产几丁质酶的菌株,对其中6株形态特征差异比较明显、几丁质酶活力比较高的菌株SWCH-1、SWCH-2、SWCH-3、SWCH-5、SWCH-6和SWCH-9进行了16S rDNA序列鉴定,发现它们分别归属于5个属,即短芽孢杆菌属(B... 详细信息

在汕头海域表层沉积物中分离得到69株高产几丁质酶的菌株,对其中6株形态特征差异比较明显、几丁质酶活力比较高的菌株SWCH-1、SWCH-2、SWCH-3、SWCH-5、SWCH-6和SWCH-9进行了16S rDNA序列鉴定,发现它们分别归属于5个属,即短芽孢杆菌属(Brevibacillus)、类芽孢杆菌属(Paenibacillus)、芽孢杆菌属(Bacillus)、气单胞菌属(Aeromonas)和寡养单胞菌属(Stenotrophomonas).采用兼并引物对6株菌几丁质酶编码基因的催化保守区片段进行了PCR扩增和序列分析,发现菌株均含有18家族几丁质酶编码基因;但是其编码的蛋白序列与NCBI收录的蛋白序列存在着差异,其中菌株SWCH-1和SWCH-3的蛋白序列与数据库中序列的相似性比较低,分别为85%和81%,菌株含有比较新的几丁质酶编码基因,其全基因序列的克隆和酶蛋白的纯化分析尚在进一步研究中.

关键词：汕头海域表层沉积物几丁质酶产生菌几丁质酶编码基因

海洋沉积物来源的混合菌S6降解苯并[a]芘的研究

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海洋沉积物来源的混合菌S6降解苯并[a]芘的研究

弧菌外膜蛋白OmpU的免疫交叉反应性和交叉保护性

2006中国微生物学会第九次全国会员代表大会暨学术年会

作者：吴奕瑞胡忠伦镜盛汕头大学生物学系

苯并[a]芘(BaP)作为高分子量多环芳烃的代表,稳定且广泛存在,难以自然降解,具有三致——致癌、致畸、致突变的特性,对生态环境、人类健康均具有极大的危害性。本研究以微生物共培养方式为基础,采用筛选培养基从不同海洋沉积物样品中富...

苯并[a]芘(BaP)作为高分子量多环芳烃的代表,稳定且广泛存在,难以自然降解,具有三致——致癌、致畸、致突变的特性,对生态环境、人类健康均具有极大的危害性。本研究以微生物共培养方式为基础,采用筛选培养基从不同海洋沉积物样品中富集驯化得到能利用 BaP、并以其为唯一碳源进行生长的混合菌群S6。经HPLC分析测定,S6能在含有10mg／L 的BaP中生长,并在6d内降解高达73．31％的BaP。研究发现,加入100mg/L的乳糖、棉

关键词：

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微生物学报 2016年第5期56卷 867-879页

作者：伦镜盛张设熙董亚萍谢少凤麦亨梅颖怡胡忠汕头大学生物系微生物实验室广东汕头515063

【目的】通过对弧菌外膜蛋白Omp U的克隆、表达以及免疫学特性分析,明确外膜蛋白Omp U是否为弧菌的共同抗原,并具有免疫交叉反应性和交叉保护性。【方法】对弧菌外膜蛋白omp U基因进行克隆和生物信息学分析。分别制备副溶血弧菌、溶藻... 详细信息

【目的】通过对弧菌外膜蛋白Omp U的克隆、表达以及免疫学特性分析,明确外膜蛋白Omp U是否为弧菌的共同抗原,并具有免疫交叉反应性和交叉保护性。【方法】对弧菌外膜蛋白omp U基因进行克隆和生物信息学分析。分别制备副溶血弧菌、溶藻弧菌、创伤弧菌、拟态弧菌和霍乱弧菌的Omp U重组蛋白抗血清,对Omp U的免疫交叉反应特性以及抗原表位定位情况进行比较分析。以霍乱弧菌的Omp U重组蛋白免疫小鼠后,再以多种弧菌进行攻毒,分析其交叉免疫保护作用。【结果】外膜蛋白Omp U在弧菌种内和种间相似性分别为73.0%–100%和58.6%–89.0%,并至少存在9个保守的B细胞抗原表位。Omp U重组蛋白抗血清在弧菌种内和种间均产生显著的免疫交叉反应,识别弧菌中分子量35–40 k Da的同源蛋白。副溶血弧菌ATCC17802、创伤弧菌ATCC27562和拟态弧菌ATCC33653来源的Omp U重组蛋白抗体能识别供试菌株,提示这些菌株的Omp U抗原表位定位于细胞表面。Omp U重组蛋白对免疫后的小鼠具有交叉免疫保护作用,攻毒实验后小鼠相对存活率(RPS)为43.0%–100%。【结论】上述结果表明,外膜蛋白Omp U是弧菌中一种保守的共同抗原,具有免疫交叉保护性,可以作为弧菌广谱疫苗的候选抗原。

关键词：弧菌外膜蛋白 Omp U 交叉反应性交叉保护性

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海洋微生物产琼胶酶及其编码基因的研究

海洋微生物产琼胶酶及其编码基因的研究

中国遗传学会第八次代表大会暨学术讨论会

作者：林伯坤伦镜盛谢伟胡忠广东汕头大学生物学系

琼胶酶(agarase)是可以将琼胶(琼脂)降解为琼胶寡糖的酶。不同聚合度的琼胶寡糖已被发现具有越来越多的生理功能活性,生产系列琼胶寡糖也成为了琼胶酶的一个主要应用。此外,琼胶酶还可以用于琼脂糖电泳中的核酸回收、制备海藻细胞原生...

琼胶酶(agarase)是可以将琼胶(琼脂)降解为琼胶寡糖的酶。不同聚合度的琼胶寡糖已被发现具有越来越多的生理功能活性,生产系列琼胶寡糖也成为了琼胶酶的一个主要应用。此外,琼胶酶还可以用于琼脂糖电泳中的核酸回收、制备海藻细胞原生质体、筛选信号肽序列等。目前的琼胶酶主要来自海洋细菌。本文在海藻养殖区采集海底沉积物和富含琼胶的红藻样品,从中筛选得到多株产琼胶酶的海洋细菌,并主要研究了其中两株菌株 HZ105 和 ZC1。16SrDNA 序列分析结合细胞形态、部分生理生化性质表明,菌株 HZ105归属于 Agarivorans,命名为 Agarivorans ***105。16SrDNA 序列分析结合细胞形态、全细胞脂肪酸组分、碳源利用、部分生理生化性质、基因组 GC 含量等分析表明,菌株 ZC1应属于新种。此外初步优化了该两株菌的生长和产琼胶酶条件,其中菌株 HZ105在 pH7-10、NaCl 浓度为1-3 %范围内培养16h 产琼胶酶最好,说明菌株 HZ105偏好碱性环境,其所产琼胶酶也可能耐碱性。此外,菌株 HZ105的胞外琼胶酶粗酶液在室温存放2天后还能保持90.9%的酶活力。菌株 ZC1在 pH7-8、NaCl 浓度为2-3%范围内产琼胶酶最好。菌株 ZC1的营养需求比较特别,只能利用 Biolog 系统的 GN2板95种碳源中葡萄糖、半乳糖、麦芽糖、淀粉、糊精等少数碳源, 但是在上述碳源培养下,菌株 ZC1亦可以产生琼胶酶,并不依赖于琼脂诱导。采用从聚丙烯酰胺凝胶电泳凝胶回收蛋白的方法分离纯化了菌株 HZ105的三个胞外琼胶酶,并通过 SDS-PAGE 电泳测得了其分子量54kDa、58kDa、105kDa,接着进一步运用串联质谱技术鉴定了该三个琼胶酶,发现这三个酶均为β琼胶酶,属于糖基水解酶50家族。根据琼胶酶的串联质谱结果, 通过 PCR 克隆了其中分子量为105kDa 的琼胶酶的基因,成熟蛋白编码序列长2931bp。目前正在努力实现该基因的高效重组原核表达

关键词：

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副溶血弧菌EMA-PCR检测技术的建立

微生物学通报 2011年第6期38卷 952-956页

作者：伦镜盛夏常艳罗鹏梁嘉明黄通旺胡忠汕头大学生物系广东汕头515063 中国科学院南海海洋研究所广东广州510301

PCR技术被广泛应用于副溶血弧菌的检测中,但传统的PCR技术无法区分样品中的死细菌与活细菌,往往使检测结果出现较高的假阳性。因此,将叠氮溴乙锭(Ethidium monoazide bro-mide,EMA)与PCR技术结合,建立一种快速、准确的副溶血弧菌检测方... 详细信息

PCR技术被广泛应用于副溶血弧菌的检测中,但传统的PCR技术无法区分样品中的死细菌与活细菌,往往使检测结果出现较高的假阳性。因此,将叠氮溴乙锭(Ethidium monoazide bro-mide,EMA)与PCR技术结合,建立一种快速、准确的副溶血弧菌检测方法。以dnaJ基因为检测副溶血弧菌的靶基因,分别用副溶血弧菌的纯培养细胞及其基因组DNA作模板进行PCR检测,灵敏度分别为2.5×104 CFU/mL和6×102 fg/μL。在检测样品前处理过程中加入EMA,当EMA的浓度小于5 mg/L时,EMA对活菌靶基因的扩增没有明显的抑制;而终浓度为2 mg/L的EMA,能有效抑制1×108 CFU/mL副溶血弧菌死菌的扩增。活菌和死菌混合体系的PCR结果表明,EMA-PCR能有效降低副溶血弧菌检测过程中的假阳性。

关键词：副溶血弧菌 EMA-PCR 死菌与活菌

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海洋产几丁质酶菌株SWCH-6的初步研究

海洋产几丁质酶菌株SWCH-6的初步研究