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小鼠骨髓干细胞在缺血再灌注损伤肾脏内分化的研究

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小鼠骨髓干细胞在缺血再灌注损伤肾脏内分化的研究

作者：代静澜第三军医大学

学位级别：硕士

成体干细胞是从胎儿和出生后个体的不同组织中分离到的具有自我更新、多向分化潜能和增殖特性的细胞,它不仅对所在组织器官有重建和修复功能,还具有分化为其他组织细胞的可塑性。研究较多的骨髓干细胞已证实除了可分化成造血细胞系列外... 详细信息

成体干细胞是从胎儿和出生后个体的不同组织中分离到的具有自我更新、多向分化潜能和增殖特性的细胞,它不仅对所在组织器官有重建和修复功能,还具有分化为其他组织细胞的可塑性。研究较多的骨髓干细胞已证实除了可分化成造血细胞系列外,还可跨系统、跨胚层分化为肝细胞、胆管上皮细胞、内皮细胞、骨骼肌细胞、心肌细胞、神经元细胞、视网膜细胞等,目前动物实验及一些临床病例利用骨髓干细胞极强的分化能力用于心肌梗塞,缺血性心脏病的治疗,发现移植的骨髓干细胞可迁移到心肌梗死区分化为心肌细胞和血管内皮细胞,参与坏死心肌组织的再生和血管生成,改善心功能。提示骨髓干细胞移植在退行性和遗传性等难治性疾病中具有潜在的治疗前景。急性肾功能衰竭在临床的发病率较高,可由多种因素引起,其中缺血再灌注(I/R)损伤是最为常见原因,严重烧伤、心脏停跳、失血性休克、呼吸抑制、肾移植术、毒物中毒及严重感染等,均可导致急性肾缺血再灌注损伤,主要病理表现为肾小管的损害,肾功能的恢复依赖于肾小管上皮细胞的再生。已有的研究发现,在制备的肾小球肾炎模型中,骨髓干细胞可分化成肾小球系膜细胞,参与肾小球的修复,提示骨髓干细胞在损伤肾脏的局部微环境中可发挥多向分化的潜能。为此,本实验制备小鼠肾脏缺血再灌注损伤模型,观察骨髓干细胞在其中的分化情况。方法: 制备雌性BALB/C小鼠肾脏缺血再灌注损伤模型,亚致死剂量60Co照射后通过尾静脉移植同系雄性小鼠骨髓单个核细胞,移植后不同时相点处死小鼠,PCR检测受体雌鼠骨髓中Y-染色体性别决定区Sry基因片段;免疫组织化学染色结合荧光原位杂交观察骨髓干细胞在肾脏内的分化情况;骨髓移植前后不同时相测定血清尿素氮值了解小鼠肾功能情况。主要结果: 1.缺血再灌注模型的制备及鉴定:小鼠双肾缺血30min恢复灌注24h,HE染色可见肾小管上皮细胞呈空泡样变性,部分细胞坏死脱落入管腔,基底膜暴露,肾小管腔内有大量透明管型,间质内出血伴炎性细胞浸润。电镜检查有超微结构的改变。由此证实缺血30min再灌注足以造成小鼠肾脏结构的损伤。 2.骨髓干细胞植入受体鼠骨髓的检测:骨髓移植后15d,PCR检测到受体雌鼠骨髓中有Sry基因表达。 3.骨髓干细胞在受体肾脏内分化的观察:骨髓移植后30d,I/R损伤肾脏内检测到Y+/CK18+及Y+/RCA+细胞,假手术组小鼠肾脏内未观察到上述细胞。 4.骨髓移植前后受体鼠肾功能检测:在本实验条件下,通过尾静脉移植同系小鼠骨髓单个核细胞对于改善肾脏I/R损伤小鼠的肾功能作用不明显。结论: 1.静脉移植的骨髓干细胞具有归巢能力,可植入受体鼠骨髓长期存活。 2.骨髓干细胞具有向肾小管上皮细胞分化的潜能。 3.肾脏内的局部微环境对骨髓干细胞发挥向肾小管上皮细胞分化的潜能起重要作用。干细胞的分化表现出很强的环境依赖性。 4.骨髓干细胞极强的可塑性有望在肾功能衰竭的细胞替代治疗中发挥重要作用。

关键词：缺血再灌注骨髓干细胞肾小管上皮细胞

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大鼠肾小管细胞基侧膜钾离子通道的初步探讨

基础医学与临床 2003年第2期23卷 216-219页

作者：叶本兰舒崇湘侯卫坪代静澜第三军医大学生理学教研室重庆400038 第三军医大学大坪医院放疗科重庆400038

本工作对肾小管细胞基侧膜上钾离子通道的活动进行初步的探讨。实验通过体视显微镜直视下从大鼠肾脏冠状切片中机械分离出肾小管 ,采用cell attached膜片单通道实验技术 ,观测肾小管细胞基侧膜钾离子通道活动及pH值对其的影响。结果表... 详细信息

本工作对肾小管细胞基侧膜上钾离子通道的活动进行初步的探讨。实验通过体视显微镜直视下从大鼠肾脏冠状切片中机械分离出肾小管 ,采用cell attached膜片单通道实验技术 ,观测肾小管细胞基侧膜钾离子通道活动及pH值对其的影响。结果表明 ,大鼠肾小管细胞基侧膜上广泛分布一类低电导的钾离子通道 ,该通道在超极化状态下表现为内向电流 ,斜率电导为 2 8 2± 1 7pS ,通道开放活动随极化程度的增大而增加。在反极化状态下表现为外向电流 ,且具有内向整流特性 ,其外向电流的弦电导为 5 6± 0 3pS。该通道对四乙胺不敏感 ,但可被优降糖所抑制。通道的活动受细胞外液pH值的影响。

关键词：肾小管细胞基侧膜钾离子通道大鼠

超声联合ABPM评估老年高血压患者早期肾损害的价值

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中国医学物理学杂志 2021年第3期38卷 331-336页

作者：代静澜华蕾李朵牟海刚中国人民解放军陆军第958医院心血管内科重庆400020

目的:探讨超声联合24 h动态血压监测(ABPM)评估老年高血压患者早期肾损害的临床价值。方法:选取102例老年原发性高血压患者,其中高血压合并早期肾损害55例为A组,高血压无早期肾损害47例为B组,健康体检老年人50例为C组。比较3组患者24 h... 详细信息

目的:探讨超声联合24 h动态血压监测(ABPM)评估老年高血压患者早期肾损害的临床价值。方法:选取102例老年原发性高血压患者,其中高血压合并早期肾损害55例为A组,高血压无早期肾损害47例为B组,健康体检老年人50例为C组。比较3组患者24 h动态血压、肾脏超声血流参数,并进行多元逐步回归分析和ROC曲线分析。结果:A组24 h平均收缩压(SBP)、24 h平均舒张压(DBP)、昼间平均SBP、昼间平均DBP、夜间平均SBP、夜间平均DBP、SBP负荷值、DBP负荷值均大于B组和C组(P<0.05)。A组SBP平滑指数、DBP平滑指数小于B组和C组(P<0.05)。A组SBP变异系数大于B组和C组(P<0.05)。A组中杓型血压百分率低于B组和C组(P<0.05),非杓型血压、反杓型血压百分率高于B组和C组(P<0.05)。A组肾段动脉、叶间动脉的超声血流阻力指数大于B组和C组(P<0.05)。回归分析中SBP平滑指数、SBP变异系数、非杓型血压、反杓型血压、肾段动脉阻力指数是高血压早期肾损害的独立影响因素。超声联合ABPM预测高血压早期肾损害的灵敏度为85.45%,特异度为90.72%,准确率为88.82%,与临床实际诊断的一致性较高(Kappa=0.759)。结论:超声联合ABPM预测高血压早期肾损害有重要价值,可根据肾脏超声血流阻力指数以及ABPM平滑指数与变异系数评估,非杓型血压、反杓型血压会增加早期肾损害的风险。

关键词：高血压早期肾损害超声动态血压监测

大鼠肾脏近曲小管细胞基侧膜钾离子通道特性的离体研究

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第三军医大学学报 2003年第5期25卷 410-412页

作者：叶本兰舒崇湘代静澜侯卫坪万子兵第三军医大学基础医学部生理学教研室重庆400038 第三军医大学附属大坪医院野战外科研究所放疗科重庆400042

目的　探讨大鼠肾脏近曲小管细胞基侧膜钾离子通道生理学特性及其意义。方法　在体视显微镜直视下 ,从大鼠肾脏冠状切片中机械分离出肾小管 ,采用膜片钳单通道实验技术 ,探讨大鼠近曲小管基侧膜钾离子通道的生理学特性。结果　大鼠近曲... 详细信息

目的　探讨大鼠肾脏近曲小管细胞基侧膜钾离子通道生理学特性及其意义。方法　在体视显微镜直视下 ,从大鼠肾脏冠状切片中机械分离出肾小管 ,采用膜片钳单通道实验技术 ,探讨大鼠近曲小管基侧膜钾离子通道的生理学特性。结果　大鼠近曲小管细胞基侧膜上容易记录到一类低电导、有内向整流性的钾离子通道 ,该通道在多数膜片(81% )中自发性开放 ,无自发性开放的通道在压力增加时可被激活。在inside out膜片 ,通道活动出现run down现象。通道开放时间常数分别为 0 5 2 4ms与 5 0 87ms ,通道关闭的两个时间常数分别为 1 0 2 9ms与 16 5 0 0ms。结论　大鼠近曲小管细胞基侧膜广泛分布一类低电导的钾离子通道 ,具有牵张敏感性和化学敏感性双重特性。

关键词：肾脏钾离子通道生理学近曲小管细胞基侧膜

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高血压患者心房纤颤与左心结构改变的关系

四川医学 2011年第8期32卷 1282-1283页

作者：代静澜解放军324医院心内科重庆400020

目的探讨高血压病患者心房纤颤与左心结构改变的关系。方法对65例原发性高血压及67例原发性高血压合并心房纤颤患者行心脏超声和动态心电图检测,检测左房内径(LAD)、左心室舒张末期内径(LVEDd)、左心室收缩末期内径(LVESd)、室间隔厚度(... 详细信息

目的探讨高血压病患者心房纤颤与左心结构改变的关系。方法对65例原发性高血压及67例原发性高血压合并心房纤颤患者行心脏超声和动态心电图检测,检测左房内径(LAD)、左心室舒张末期内径(LVEDd)、左心室收缩末期内径(LVESd)、室间隔厚度(IVSTd)及心房纤颤(AF)的发生。结果 EH合并AF患者较单纯性EF患者LAD、IVSTd显著增大。EH合并持续性AF组LAD值显著高于EH合并阵发性AF组。结论高血压病患者左心结构改变与心房纤颤的发生密切相关。

关键词：高血压 LAD IVSTd 心房纤颤

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心率变异研究进展

实用心电学杂志 2000年第2期9卷 158-159页

作者：代静澜魏宗德四川泸州医学院附院综述 646000 四川泸州医学院附院审校 646000

心率变异(HRV)是心脏节律变化-心律不齐的新描述,通常是指窦性心律在一定时间内周期性改变的现象。作为一项无创性、定量检测植物神经系统功能的手段,近年取得了许多新进展。 1 HRV的生理学基础心血管活动受神经体液因素及自身因素的影... 详细信息

心率变异(HRV)是心脏节律变化-心律不齐的新描述,通常是指窦性心律在一定时间内周期性改变的现象。作为一项无创性、定量检测植物神经系统功能的手段,近年取得了许多新进展。 1 HRV的生理学基础心血管活动受神经体液因素及自身因素的影响,心率是副交感神经系统与交感神经系统在窦房结水平相互作用的反映。正常人静息状态下。

关键词：心率变异临床应用心电图生理学基础

左卡尼汀治疗缺血性心脏病心力衰竭的疗效及其对血脂的影响

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实用医学杂志 2007年第23期23卷 3752-3753页

作者：代静澜古平解放军第324医院心内科重庆市400020

目的:探讨左卡尼汀治疗缺血性心脏病并发心力衰竭患者的疗效及其对血脂水平的影响。方法:将2005年3月至2007年3月收住的60例缺血性心脏病并发心衰患者分为左卡尼汀组和对照组各30例,对照组给予常规抗心衰治疗,左卡尼汀组在常规抗心衰治... 详细信息

目的:探讨左卡尼汀治疗缺血性心脏病并发心力衰竭患者的疗效及其对血脂水平的影响。方法:将2005年3月至2007年3月收住的60例缺血性心脏病并发心衰患者分为左卡尼汀组和对照组各30例,对照组给予常规抗心衰治疗,左卡尼汀组在常规抗心衰治疗基础上加用左卡尼汀静滴,3g/d,2周为1个疗程,间断应用5个疗程。记录用药前后患者心功能改善情况、超声心动图、血脂的变化情况。结果:左卡尼汀组患者心功能及超声心动图各项指标改善优于对照组,差异有显著性(P<0.05);左卡尼汀组患者总胆固醇、甘油三酯降低,高密度脂蛋白胆固醇升高,与对照组患者比较差异有显著性(P<0.01)。结论:左卡尼汀治疗缺血性心脏病并发心力衰竭有较好疗效,对血脂调节有效。

关键词：心肌缺血心力衰竭左卡尼汀血脂

PAR-1激活对小鼠内皮祖细胞CXCR4 mRNA表达及细胞增殖与迁移的影响

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重庆医学 2013年第33期42卷 4056-4058,4061页

作者：代静澜潘波古平牟海刚白家驷解放军第三二四医院心血管内科重庆400020 第三军医大学西南医院全军肝病中心实验室重庆400038

目的研究蛋白酶激活受体-1(PAR-1)活化后对小鼠内皮祖细胞(EPCs)CXC型趋化因子受体4(CXCR4)mRNA表达及细胞增殖、迁移的影响。方法分离鉴定小鼠EPCs,分别以不同浓度PAR-1激活剂SFLLRN加入培养的EPCs中,以PAR-1小干扰RNA(siRNA)转染EPCs... 详细信息

目的研究蛋白酶激活受体-1(PAR-1)活化后对小鼠内皮祖细胞(EPCs)CXC型趋化因子受体4(CXCR4)mRNA表达及细胞增殖、迁移的影响。方法分离鉴定小鼠EPCs,分别以不同浓度PAR-1激活剂SFLLRN加入培养的EPCs中,以PAR-1小干扰RNA(siRNA)转染EPCs,并设立空白对照组。采用荧光定量实时聚合酶链反应(RT-PCR)分析各组细胞PAR-1、CXCR4mRNA表达;MTT法检测各组EPCs增殖情况;Transwell小室共培养分析各组EPCs的迁移能力。结果 SFLLRN激活组EPCs增殖率、迁移率及PAR-1、CXCR4mRNA表达均较空白对照组、PAR-1特异siRNA转染组增高,差异有统计学意义(P<0.05)。CXCR4mRNA与PAR-1mRNA表达呈明显正相关(r=0.991)。结论 PAR-1可能通过促使CXCR4的表达增加,从而促进EPCs的增殖和迁移。

关键词：内皮祖细胞蛋白酶激活受体-1 CXC型趋化因子受体4 细胞增殖迁移

2型糖尿病患者C反应蛋白与颈动脉内膜中层厚度的关系

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四川医学 2010年第5期31卷 654-655页

作者：代静澜古平牟海刚解放军第324医院心内科重庆400020

目的探讨2型糖尿病(T2DM)患者C反应蛋白(CRP)与颈动脉内膜中层厚度(IMT)的相关性。方法以颈动脉内膜中层厚度(IMT)反应动脉粥样硬化程度,对60例T2DM患者及58例健康对照组分别测定CRP与IMT,并对结果进行相关性分析。结果 T2DM组CRP及IMT... 详细信息

目的探讨2型糖尿病(T2DM)患者C反应蛋白(CRP)与颈动脉内膜中层厚度(IMT)的相关性。方法以颈动脉内膜中层厚度(IMT)反应动脉粥样硬化程度,对60例T2DM患者及58例健康对照组分别测定CRP与IMT,并对结果进行相关性分析。结果 T2DM组CRP及IMT明显高于健康对照组(P<0.01),T2DM组IMT增厚者CRP高于无IMT增厚者(P<0.05)。相关性分析显示CRP与IMT呈正相关(r=0.439,P<0.05)。结论检测CRP与IMT对及早发现DM大血管病变有重要的临床意义。

关键词： C反应蛋白颈动脉内膜中层厚度 2型糖尿病