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利用贝莱斯芽孢杆菌提高红曲米发酵生产中抗黄曲霉污染的能力

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食品与发酵工业 2022年第20期48卷 204-209页

作者：李昱涵付瑞燕安徽农业大学茶与食品科技学院安徽合肥230036

红曲米发酵生产中的污染问题不容忽视,因为这会影响红曲的产量和质量。实验中发现,在用纯种红曲霉发酵红曲米的过程中较易污染黄曲霉,然而,在用市售红曲米作为曲种发酵的过程中污染情况却不经常出现,推测市售红曲米的开放式生产可能给... 详细信息

红曲米发酵生产中的污染问题不容忽视,因为这会影响红曲的产量和质量。实验中发现,在用纯种红曲霉发酵红曲米的过程中较易污染黄曲霉,然而,在用市售红曲米作为曲种发酵的过程中污染情况却不经常出现,推测市售红曲米的开放式生产可能给红曲米的发酵过程引入了某种能抑制黄曲霉的菌种。为提高红曲米生产过程抗黄曲霉污染能力,该研究从市售红曲米中分离筛选出1株能够抑制黄曲霉孢子生长的贝莱斯芽孢杆菌Y5菌株,并优化了利用该菌株提高红曲米发酵过程抗污染能力的工艺条件。验证性实验结果表明,在发酵前期微量接种该菌株能够有效减少粗放条件下红曲米发酵过程中黄曲霉污染率,且不会影响红曲霉产色素。因此,在红曲米发酵中可将该菌株作为辅助菌株,以保证发酵的顺利进行。

关键词：贝莱斯芽孢杆菌红曲米红曲菌黄曲霉污染色价

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分光光度计比浊法测定乳酸杆菌胁迫存活率

食品与发酵工业 2021年第12期47卷 257-261页

作者：徐倩付瑞燕安徽农业大学茶与食品科技学院安徽合肥230036

乳酸杆菌胁迫抗性通常是用稀释平板菌落计数法来测定活菌数量从而计算存活率来表征的,该法存在检测周期较长和人为操作造成的误差较大的问题,该研究探究用分光光度计比浊法测定乳酸杆菌胁迫存活率的可行性。结果显示,在存活率为0.06~0.8... 详细信息

乳酸杆菌胁迫抗性通常是用稀释平板菌落计数法来测定活菌数量从而计算存活率来表征的,该法存在检测周期较长和人为操作造成的误差较大的问题,该研究探究用分光光度计比浊法测定乳酸杆菌胁迫存活率的可行性。结果显示,在存活率为0.06~0.85时,发酵乳杆菌415酸胁迫存活率和取样时间点的生物量比之间的相关系数可达到0.9971,并且这条酸胁迫标准方程可用于测定其他类型的胁迫(H 2O 2胁迫、胆盐胁迫、冷冻胁迫等)存活率,拟合存活率与真值之间的误差率均小于10%。以植物乳杆菌LGD为研究对象,验证了该比浊法也可以应用于测定其他乳酸杆菌胁迫存活率。分光光度计比浊法操作简单,测定结果与稀释平板菌落计数法所得结果存在良好的线性相关,检测时间较少,误差较小,有利于实现乳酸杆菌胁迫存活率的快速准确检测。

关键词：比浊法乳酸杆菌生物量比胁迫存活率稀释平板菌落计数法

一株具有谷胱甘肽合成能力的乳酸乳球菌的分离与初步研究

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微生物学通报 2007年第6期34卷 1057-1065页

作者：付瑞燕陈坚李寅江南大学工业生物技术教育部重点实验室江南大学生物工程学院中国科学院微生物研究所北京100101

基于gshB基因同源性分析设计引物,从采集的菜园地土壤中分离到1株具有谷胱甘肽(GSH)合成能力的乳酸乳球菌菌株CCSYU10100。测定了该菌株的16S rDNA序列并根据16S rDNA序列构建了系统发育树,结果显示该菌株与乳酸乳球菌乳脂亚种在进化关... 详细信息

基于gshB基因同源性分析设计引物,从采集的菜园地土壤中分离到1株具有谷胱甘肽(GSH)合成能力的乳酸乳球菌菌株CCSYU10100。测定了该菌株的16S rDNA序列并根据16S rDNA序列构建了系统发育树,结果显示该菌株与乳酸乳球菌乳脂亚种在进化关系上的地位最近。电镜分析表明,菌株CCSYU10100与乳酸乳球菌的形态特征基本一致。因此认为菌株CCSYU10100属于乳酸乳球菌乳脂亚种,命名为乳酸乳球菌乳脂亚种CCSYU10100。HPLC法鉴定出该菌株胞内除GSH外,还存在半胱氨酸-甘氨酸。乳酸乳球菌CCSYU10100的部分gshB基因与假单胞菌属的gshB基因高度同源,这是gshB基因在乳酸乳球菌中、甚至是革兰氏阳性菌中的首次发现。

关键词：谷胱甘肽乳酸乳球菌分离鉴定

谷胱甘肽/谷胱甘肽过氧化物酶系统在微生物细胞抗氧胁迫系统中的作用

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生物工程学报 2007年第5期23卷 770-775页

作者：付瑞燕陈坚李寅安徽农业大学茶与食品科技学院合肥230036 江南大学工业生物技术教育部重点实验室江南大学生物工程学院无锡214036 中国科学院微生物研究所北京100080

谷胱甘肽(GSH)/谷胱甘肽过氧化物酶(GPx)系统在不同微生物细胞抵抗氧胁迫中的生理功能不尽相同。该系统在真核模式微生物酿酒酵母中是必需存在的,在维持胞内氧化还原平衡和抵抗氧胁迫中发挥主要作用。然而,在原核微生物中,该系统只是条... 详细信息

谷胱甘肽(GSH)/谷胱甘肽过氧化物酶(GPx)系统在不同微生物细胞抵抗氧胁迫中的生理功能不尽相同。该系统在真核模式微生物酿酒酵母中是必需存在的,在维持胞内氧化还原平衡和抵抗氧胁迫中发挥主要作用。然而,在原核微生物中,该系统只是条件性的,即部分胞内存在谷胱甘肽还原酶和GPx的原核微生物,如流感嗜血杆菌和乳酸乳球菌,可通过从胞外吸收GSH,形成条件性的依赖于GSH的GPx系统,参与抵抗氧胁迫。

关键词：微生物细胞谷胱甘肽/谷胱甘肽过氧化物酶系统抗氧胁迫

一种白僵菌代谢产物中自由基清除剂发酵条件和提取工艺的研究

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一种白僵菌代谢产物中自由基清除剂发酵条件和提取工艺的研究

作者：付瑞燕安徽农业大学

学位级别：硕士

本文对一株白僵菌(Beauveria sp.)Ba02菌株自由基清除剂发酵和提取工艺进行了研究，主要内容包括：营养性因子和非营养性因子对自由基清除剂合成的影响;16 L机械搅拌发酵罐和7 L气升式发酵罐的深层发酵条件的初探;自由基清除剂提取工艺... 详细信息

本文对一株白僵菌(Beauveria sp.)Ba02菌株自由基清除剂发酵和提取工艺进行了研究，主要内容包括：营养性因子和非营养性因子对自由基清除剂合成的影响;16 L机械搅拌发酵罐和7 L气升式发酵罐的深层发酵条件的初探;自由基清除剂提取工艺的改进。不同碳源因子试验显示：在供试的10种碳源中，白砂糖、蔗糖和甘油有利于自由基清除剂的形成，其中碳源以白砂糖最好。混合碳源试验结果表明，蔗糖与甘油搭配，有利于自由基清除剂产量的提高。通过不同氮源试验发现，在供试的8种氮源中，黄豆粉和酵母粉是较适宜的氮源，但从原料的来源、价格等经济因素来考虑，以黄豆粉最佳。在起始pH为8的条件下，在无机盐正交试验中针对7种无机盐和生长促进因子分别设置了3个水平，试验结果表明KHPO、MnSO·HO、麦芽汁对自由基清除剂的合成在99％置信度上有显著性影响。在培养基浓度配比试验中，针对已筛选出的碳、氮源和无机盐进行了正交试验，确定了Ba02菌株产生自由基清除剂的最佳培养基配比：蔗糖30g／L，甘油6ml／L，黄豆粉10g／L、KHPO1g／L、MnSO·HO 0.006g／L、麦芽汁20ml／L。非营养性因子中研究了pH、温度、种龄、接种量、装液量和搅拌速度等因子对自由基清除剂生成和生物量的影响，其中pH对自由基清除剂生成和生物量影响的试验结果表明：起始pH为8，在培养过程中，当pH值降至4.5时，用已灭菌的HC1(1M)或NaOH(1M)培养液(其营养浓度同培养所用的培养基浓度)调节pH至7.5，有利于自由基清除剂产量的提高。在温度对生物量和自由基清除率的影响试验中，设置了3个供试温度：20℃、25℃、30℃，结果表明25℃下有利于生物量和自由基清除剂的生成。针对种龄、接种量、装液量和搅拌速度四个因素，设置了3个水平，正交试验结果表明在250ml三角瓶中接种种龄7d的Ba02种子，以5％接种量接入发酵培养基中，在25℃条件下，以180rpm转速培养最有利于自由基清除剂产量的提高。比较了优化培养基与培养条件对Ba02菌株自由基清除率的影响，结果表明：从自由基清除剂生成的角度考虑，在相同的优化培养条件下，优化培养基使得自由基清除率提高了 24．14％;在待优化培养基与待优化培养条件下，Bacl菌株比 Ba02 菌株自由基清除率提高了 7．4％，表明 Baol菌株比 Ba02菌株更适宜于无氧发酵。总的看来，Ba02菌株在优化培养基与优化培养条件下于发酵第 6 d达到自由基清除剂产量最高峰58．55％，而Baol菌株在待优化培养基与待优化培养条件下于发酵第 17 d达到自由基清除剂产量最高峰 32刀5％;经过菌株筛选、营养性因子和非营养性因子的一系列优化，结果自由基清除剂产量最高峰值增加了 26．5％，发酵周期缩短了＊ d，故优化效果十分明显。在液体振荡培养试验的基础上，进行了16 L机械搅拌发酵罐和7 L气升式发酵罐的深层发酵条件的初探。结果表明Ba02菌株菌丝生长和自由清除剂的生成对氧气的需要量很大，对于机械搅拌罐来说，在通气量大于 1：0．9(V／V／In)，同时转速大于450 rpm时，对菌丝生长和自由清除剂的生成有利。为了寻找一种低能耗、低污染的提取工艺，以自由基清除率为指标，对温度、浓缩比例、抽提用溶剂、不同抽提方式和抽提时间和不同抽提比例进行了优化，结果表明最佳提取工艺为：将发酵液经孔径为0．8 pn的超滤膜处理后，在90 OC下浓缩至最小体积，浓缩液在静置条件下用乙酸乙酯以1：川的比例革取lh，将荤取液脱溶，冷冻干燥后得粗提物。将Ba02菌株发酵液乙酸乙酯粗提物与市售四种保健品的自由基清除作用做了比较，结果表明其有较强的清除DPPH作用，从生产周期和生产成本上来看，有较强的竟争力。同时，对该菌株产生的的单胺氧化酶抑制剂的抑制率作了初步测定，结果表明 Ba02菌株发酵液中有一定的单胺氧化酶抑制剂，其发酵生成曲线与自由基清除剂的不一致。根据体内(抗抑郁经典模型)试验结果，Ba02菌株发酵液中的单胺氧化酶抑制剂可能具有抑制单胺氧化酶A型的活性。

关键词：自由基清除剂液体振荡培养提取工艺

单亲灭活德氏乳杆菌和乳酸乳球菌原生质体融合条件优化

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食品科学 2012年第5期33卷 193-198页

作者：李丽房杰黄洁洁付瑞燕安徽农业大学茶与食品科技学院安徽合肥230036

利用单亲灭活原生质体技术对德氏乳杆菌FQ菌株和乳酸乳球菌FL菌株的原生质体进行融合,考察原生质体制备、再生和融合条件的影响因素。结果表明:制备德氏乳杆菌FQ菌株原生质体最适条件为温度37℃,在含有10μg/mL变溶菌素和1mg/mL溶菌酶... 详细信息

利用单亲灭活原生质体技术对德氏乳杆菌FQ菌株和乳酸乳球菌FL菌株的原生质体进行融合,考察原生质体制备、再生和融合条件的影响因素。结果表明:制备德氏乳杆菌FQ菌株原生质体最适条件为温度37℃,在含有10μg/mL变溶菌素和1mg/mL溶菌酶溶液中超声处理90min。在此条件下,原生质体再生率可达6.36%。乳酸乳球菌FL菌株添加1mg/mL甘氨酸处理后,用10mg/mL溶菌酶37℃恒温酶解90min,原生质体形成率可达99.97%。65℃处理乳酸乳球菌FL菌株原生质体120min,原生质体灭活率可达96.89%。融合实验结果表明,在PEG6000 400g/L(含0.02mol/L MgCl2和0.01mol/L CaCl2)、融合时间5min、融合温度20℃、pH6.5的条件下促融,德氏乳杆菌FQ菌株和乳酸乳球菌FL菌株原生质体的融合率可达2.72×10-6。

关键词：单亲灭活德氏乳杆菌乳酸乳球菌原生质体融合

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食品中单增李斯特菌检测技术研究进展

安徽农业大学学报 2012年第6期39卷 940-943页

作者：付瑞燕周阳祝长青安徽农业大学茶与食品科技学院合肥230000 江苏出入境检验检疫局南京210001

单增李斯特菌是一种重要的人畜共患食源性致病菌,如何有效控制食品(尤其是即食食品)中的单增李斯特菌,是食品安全的重要任务,其中快速、准确的检测技术是关键因素之一。作者对单增李斯特菌的传统检测法、免疫学检测法和分子生物学检测... 详细信息

单增李斯特菌是一种重要的人畜共患食源性致病菌,如何有效控制食品(尤其是即食食品)中的单增李斯特菌,是食品安全的重要任务,其中快速、准确的检测技术是关键因素之一。作者对单增李斯特菌的传统检测法、免疫学检测法和分子生物学检测法进行综述,并对目前国内单增李斯特菌检测过程中所存在的问题进行探讨,以期为今后的研究提供参考。

关键词：单增李斯特菌传统检测法免疫学检测法分子生物学检测法

1株具广谱抑菌活性的乳酸乳球菌的分离鉴定与保鲜效果

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食品与发酵工业 2013年第4期39卷 53-57页

作者：倪萍黄洁洁纪文营祁克宗付瑞燕安徽农业大学茶与食品科技学院安徽合肥230036

为开发出新型冷却肉保鲜剂,从土壤中分离到1株具有较宽抑菌谱的乳酸菌,对冷却肉上7种常见的腐败和致病菌有明显的抑菌活性,包括热死环丝菌、单增李斯特菌、金黄色葡萄球菌、乳酸乳球菌、荧光假单胞菌、致病性大肠杆菌和沙门氏菌,并且排... 详细信息

为开发出新型冷却肉保鲜剂,从土壤中分离到1株具有较宽抑菌谱的乳酸菌,对冷却肉上7种常见的腐败和致病菌有明显的抑菌活性,包括热死环丝菌、单增李斯特菌、金黄色葡萄球菌、乳酸乳球菌、荧光假单胞菌、致病性大肠杆菌和沙门氏菌,并且排除了因产乳酸和过氧化氢而具备抑菌作用的可能性。根据细胞形态、菌落形态、生理生化反应特性和16Sr DNA序列和具菌株特异性的N-乙酰胞壁酸水解酶基因序列的比对分析,这株菌被鉴定为乳酸乳球菌乳酸亚种(Lactococcus lactis ***),命名为NFL。菌株NFL发酵液中的抑菌物质对热有极强的耐受性,在121°C的灭菌温度下处理90 min抑菌活性基本不变。经121℃下灭菌20 min的菌株NFL发酵上清液对托盘包装冷却猪肉具有明显的保鲜效果,尤其是可显著减少腐臭味。

关键词：广谱抑菌活性热死环丝菌荧光假单胞菌乳酸乳球菌分离鉴定保鲜效果

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分光光度计比浊法测定抗菌物质效价

食品与发酵工业 2015年第3期41卷 209-214页

作者：王凯旋卫兰兰洪婷付瑞燕安徽农业大学茶与食品科技学院安徽合肥230036

琼脂扩散法是测定抗菌物质效价常用的方法,但人为操作因素常常影响实验结果的准确性。实验旨在建立一种测定准确、操作简单、无需特殊设备的分光光度计比浊法来测定各种抗菌物质的效价。研究发现,以抑菌率最高时对应的培养时间为取样时... 详细信息

琼脂扩散法是测定抗菌物质效价常用的方法,但人为操作因素常常影响实验结果的准确性。实验旨在建立一种测定准确、操作简单、无需特殊设备的分光光度计比浊法来测定各种抗菌物质的效价。研究发现,以抑菌率最高时对应的培养时间为取样时间点,在中等接种量下,在实验浓度范围内,细菌素nisin、类细菌素NFL和抗生素硫酸庆大霉素这3种抗菌物质的浓度与抑菌率之间的线性关系良好,R2值均高于0.99,标准曲线成立。该法适用于设备条件简单的实验室准确测定各类抗菌物质效价。

关键词：分光光度计比浊法 nisin 类细菌素NFL 硫酸庆大霉素抗菌活性