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IL-4基因修饰HL-60细胞增强CTL杀伤活性机制初探

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中华血液学杂志 2001年第1期22卷 17-19页

作者：李成荣付劲蓉深圳市儿童医院 518026

目的　进一步探讨IL 4基因修饰瘤苗增强细胞毒性T淋巴细胞 (CTL)杀伤活性的机制。方法　通过逆转录病毒载体PL IL 4 SN将人IL 4基因导入白血病细胞系HL 6 0细胞 ,以IL 4基因修饰瘤苗和野生型瘤细胞作刺激细胞诱导CTL反应 ,通过流式细胞... 详细信息

目的　进一步探讨IL 4基因修饰瘤苗增强细胞毒性T淋巴细胞 (CTL)杀伤活性的机制。方法　通过逆转录病毒载体PL IL 4 SN将人IL 4基因导入白血病细胞系HL 6 0细胞 ,以IL 4基因修饰瘤苗和野生型瘤细胞作刺激细胞诱导CTL反应 ,通过流式细胞仪检查肿瘤细胞表面MHC Ⅰ、MHC Ⅱ类抗原及B7 1、ZCAM 1等分子表达。结果　IL 4基因修饰诱导瘤细胞表达MHC Ⅱ类抗原、B7 1及ICAM 1等细胞表面分子 ,对MHC Ⅰ类抗原表达无影响 ,其瘤苗诱导的CTL杀伤活性为野生型瘤细胞的 7倍 (P <0 .0 1) ,加入抗IL 4单抗可完全阻断IL 4诱导的细胞表面MHC Ⅱ类抗原及B7 1、ICAM 1分子的表达 ,IL 4基因修饰瘤苗诱导CTL反应时培养上清可测及IL 2产生。抗IL 4或抗细胞MHC Ⅱ类抗原等表面分子单抗可降低IL 2产生及抑制CTL反应。结论　诱导MHC Ⅱ类抗原等表面分子表达 ,促进IL 2产生 ,可能是IL 4基因修饰增强CTL杀伤活性的作用机制之一。

关键词： IL-4 基因修饰细胞毒性T淋巴细胞杀伤活性

人IL-4基因修饰增强瘤细胞特异性CTL杀伤活性机制初探

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中华微生物学和免疫学杂志 2001年第3期21卷 292-295页

作者：李成荣付劲蓉深圳市儿童医院 518026

目的　探讨IL 4基因修饰瘤苗增强细胞毒性T淋巴细胞 (CTL)杀伤活性的机制。方法通过逆转录病毒载体pL IL 4 SN将人IL 4基因导入肝癌细胞系HepG2细胞 ,以IL 4基因修饰瘤苗和野生型瘤细胞作刺激细胞诱导CTL反应 ,通过流式细胞仪检查肿瘤... 详细信息

目的　探讨IL 4基因修饰瘤苗增强细胞毒性T淋巴细胞 (CTL)杀伤活性的机制。方法通过逆转录病毒载体pL IL 4 SN将人IL 4基因导入肝癌细胞系HepG2细胞 ,以IL 4基因修饰瘤苗和野生型瘤细胞作刺激细胞诱导CTL反应 ,通过流式细胞仪检查肿瘤细胞表面分子表达。结果　IL 4基因修饰诱导瘤细胞表达MHCⅡ类抗原、B7 1及ICAM 1等细胞表面分子 ,对MHCⅠ类抗原表达无影响 ,其瘤苗诱导的CTL杀伤活性为野生型瘤细胞的 7倍 (P <0 .0 1) ,加入抗IL 4单克隆抗体 (McAb)可完全阻断IL 4诱导的细胞表面分子表达 ,IL 4基因修饰瘤苗诱导CTL反应时培养上清可测及大量IL 2产生。抗IL 4或抗细胞表面分子的McAb可降低IL 2产生及抑制CTL反应。结论　IL 4基因修饰可能是通过诱导MHCⅡ类抗原等表面分子表达 ,促进IL 2产生而增强CTL杀伤活性。

关键词：白细胞介素4 基因修饰 CTL杀伤活性细胞表面分子肝癌免疫疗法

粘附分子在过敏性紫癜患者血管内皮细胞中的作用探讨

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中华微生物学和免疫学杂志 2002年第5期22卷 563-565页

作者：李成荣周玉峰付劲蓉深圳市儿童医院分子免疫研究室 518026

目的　探讨粘附分子在过敏性紫癜血管炎性损伤中的作用及可能的调节机制。方法建立人脐静脉内皮细胞 (humanumbilicalveinsendothelialcell,HUVEC)体外培养模型 ,ELISA双抗体夹心法检测过敏性紫癜患儿外周血单个核细胞 (PBMC)培养上清... 详细信息

目的　探讨粘附分子在过敏性紫癜血管炎性损伤中的作用及可能的调节机制。方法建立人脐静脉内皮细胞 (humanumbilicalveinsendothelialcell,HUVEC)体外培养模型 ,ELISA双抗体夹心法检测过敏性紫癜患儿外周血单个核细胞 (PBMC)培养上清液炎性细胞因子IL 6、IL 1β、TNF α的含量。采用流式细胞仪间接荧光免疫法检测PBMC及其所诱导的HUVEC粘附分子的表达 ;MTT生物活性检测法测定PBMC与HUVEC间的粘附率。结果　过敏性紫癜患儿PBMC及其培养上清可诱导内皮细胞表面粘附分子表达明显增强 ,PBMC与内皮细胞间的粘附率明显提高 ,上述粘附作用可被抗粘附分子抗体明显阻断。同时IL 6、IL 1β、TNF α等炎性细胞因子在过敏性紫癜患儿外周血中异常升高 ,用抗细胞因子的单克隆抗体可明显阻滞过敏性紫癜患儿外周血免疫活性细胞及其所诱导的局部血管内皮细胞上粘附分子的表达和内皮细胞与PBMC间相互粘附作用。结论　①粘附分子通过介导全身循环中的免疫效应细胞粘附于血管内皮细胞 ,在过敏性紫癜血管损伤的病理生理机制中起重要作用。②IL 6、IL 1β、TNF α等炎性细胞因子可能作为过敏性紫癜血管损伤的重要环节 ,在诱生免疫活性细胞及血管内皮细胞多种粘附分子的表达、介导免疫活性细胞向血管局部聚集及进一步向血管深?

关键词：过敏性紫癜内皮细胞粘附分子细胞因子

IL-4基因修饰增强脑胶质瘤细胞毒性T淋巴细胞杀伤活性机制的探讨

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中华儿科杂志 2002年第6期40卷 333-336页

作者：李成荣付劲蓉深圳市儿童医院分子免疫研究室 518026

目的　进一步探讨白细胞介素 4(IL 4)基因修饰瘤苗增强细胞毒性T淋巴细胞 (CTL)杀伤活性的机制。方法　通过逆转录病毒载体PL IL 4 SN将人IL 4基因导入神经胶质瘤系SHG44细胞 ,以IL 4基因修饰瘤苗和野生型瘤细胞作刺激细胞诱导CTL反应 ... 详细信息

目的　进一步探讨白细胞介素 4(IL 4)基因修饰瘤苗增强细胞毒性T淋巴细胞 (CTL)杀伤活性的机制。方法　通过逆转录病毒载体PL IL 4 SN将人IL 4基因导入神经胶质瘤系SHG44细胞 ,以IL 4基因修饰瘤苗和野生型瘤细胞作刺激细胞诱导CTL反应 ,通过流式细胞仪检查瘤细胞表面分子的表达。结果　 (1 )IL 4基因修饰诱导瘤细胞表达MHC Ⅱ类抗原、B7 1及ICAM 1等免疫刺激分子 ,对MHC I类抗原表达无影响 ,其瘤苗诱导的CTL杀伤活性为野生型瘤细胞的 7倍 (P <0 0 1 )。(2 )加入抗IL 4单抗可完全阻断IL 4诱导的细胞表面分子的表达 ,IL 4基因修饰瘤苗诱导CTL反应时培养上清可检测到大量IL 2的产生。抗IL 4或抗细胞表面分子单抗可降低IL 2产生及抑制CTL反应。结论　IL 4基因修饰可能是通过诱导MHC Ⅱ类抗原等表面分子表达 ,促进IL

关键词：脑胶质瘤白细胞介素4 T淋巴细胞细胞毒性基因修饰瘤苗基因治疗

人IL-4基因修饰诱导肝母细胞瘤细胞凋亡及分化的研究

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中华微生物学和免疫学杂志 2003年第2期23卷 148-151页

作者：付劲蓉李成荣周玉峰周雅德深圳市儿童医院 518026 重庆医科大学附属儿童医院

目的　研究人白细胞介素 4(IL 4)基因修饰对肝母细胞瘤细胞凋亡及分化的影响及可能机制。方法　以逆转录病毒为载体将人IL 4基因导入人肝母细胞瘤细胞系 (HepG2 )细胞。台盼蓝拒染、瑞氏染色、放射免疫测定、流式细胞仪细胞周期分析、... 详细信息

目的　研究人白细胞介素 4(IL 4)基因修饰对肝母细胞瘤细胞凋亡及分化的影响及可能机制。方法　以逆转录病毒为载体将人IL 4基因导入人肝母细胞瘤细胞系 (HepG2 )细胞。台盼蓝拒染、瑞氏染色、放射免疫测定、流式细胞仪细胞周期分析、原位杂交等方法检测人IL 4基因修饰后细胞形态、甲胎蛋白合成以及原癌基因c fos、c jun、c myc表达的变化。流式细胞仪AnnexinⅤ /PI双染色法及间接免疫荧光染色法检测凋亡细胞及凋亡调控基因p5 3、bcl 2的蛋白表达。结果　 (1)人IL 4基因修饰较空载体修饰及野生型HepG2细胞的细胞周期发生G0 /G1期阻滞 ,甲胎蛋白分泌量及原癌基因c fos、c jun、c myc表达降低 (P <0 .0 0 1)。细胞在形态及功能上趋向正常肝细胞转化 ;(2 )较空载体修饰及野生型HepG2细胞 ,IL 4基因修饰后部分细胞形态上出现核固缩等典型凋亡细胞的特征 ,流式细胞仪亦检测到 18.5 %± 4.7%的凋亡细胞 ;(3)人IL 4基因修饰增加p5 3而抑制bcl 2表达 (P <0 .0 5 )。结论　人IL 4基因修饰可诱导肝母细胞的凋亡及分化 ,诱导凋亡细胞可能与上调p5 3蛋白及抑制bcl 2蛋白表达有关。

关键词：人白细胞介素4 基因修饰肝母细胞瘤细胞凋亡细胞分化人IL-4

Cloning and polymorphism analysis of IL-4 proximal promoter in asthmatic children

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Chinese Medical Journal 2002年第11期115卷 1624-1627,146页

作者：周玉峰付劲蓉李成荣吴健民深圳市儿童医院儿科研究所分子免疫学实验室深圳518026 华中科技大学同济医学院附属协和医院检验科分子生物学实验室武汉430022

OBJECTIVE: To clone and study the polymorphism within interleukin-4 (IL-4) proximal promoter of asthmatic children. METHODS: The IL-4 proximal promoter segments were amplified and selected by polymerase chain reaction (PCR) and single strand conformation polymorphism (SSCP) with genomic DNA from ten healthy children and forty patients with dominantly allergic familial histories as templates. The selected PCR segments were cloned into recombinant plasmids pIL-4-Jx2. The PCR inserts were sequenced by dideoxy chain termination method. RESULTS: Seven aberrant bands were found in SSCP analysis from forty asthmatic patients. The sequencing results showed that four variant sites were found within or adjacent to the known IL-4 regulatory element. A C to A transversion located at -229 position was just within the positive regulatory element-I (PRE-I) in one patient. A C to T transition adjacent to the negative regulatory element-II (NRE-II) and an extra G adjacent to TATA box were found in two patients. A five base nucleotide deletion was found near signal transducers and activators of transcription-6 responsive element (STAT-6 RE) in one patient. CONCLUSION: There were polymorphisms within the IL-4 proximal promoter of allergic asthmatic patients and these polymorphisms might result in aberrant expression of IL-4 gene and asthma.

关键词： Polymorphism, Genetic Promoter Regions (Genetics) Asthma Base Sequence Child Child, Preschool Cloning, Molecular Humans Interleukin-4 Molecular Sequence Data Plasmids Polymerase Chain Reaction Polymorphism, Single-Stranded Conformational STAT6 Transcription Factor Trans-Activators

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基因工程肿瘤疫苗研究进展

重庆医学 1998年第1期27卷 18-20页

作者：付劲蓉重庆医科大学附属儿童医院 400014

IL-4基因修饰抗人脑胶质瘤效应的体外研究

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中华神经外科杂志 2000年第6期16卷 357-360页

作者：付劲蓉李成荣杨锡强王莉佳深圳市儿童医院 518026 重庆医科大学儿童医院

目的　探讨人IL 4基因修饰对人脑胶质瘤的抑瘤效应及可能机制。方法　以逆转录病毒载体将人IL 4基因导入人脑胶质瘤细胞系SHG4 4细胞 ,用3H掺入法及流式细胞仪分析IL 4基因转染对人脑胶质瘤细胞增殖及细胞周期的影响 ;3H掺入法、51Cr释... 详细信息

目的　探讨人IL 4基因修饰对人脑胶质瘤的抑瘤效应及可能机制。方法　以逆转录病毒载体将人IL 4基因导入人脑胶质瘤细胞系SHG4 4细胞 ,用3H掺入法及流式细胞仪分析IL 4基因转染对人脑胶质瘤细胞增殖及细胞周期的影响 ;3H掺入法、51Cr释放法检测IL 4基因修饰瘤苗对健康人外周血单个核细胞 (PBMC)增殖、细胞毒性T细胞 (CTL)反应的影响。结果　与野生型瘤细胞比较 ,IL 4基因修饰瘤细胞增殖明显被抑制 (P <0 0 5 ) ,79 2 9%的瘤细胞滞留于G0 /G1期细胞 ,IL 4基因修饰瘤苗所诱导的PBMC增值反应及CTL杀伤活性分别是野生型瘤细胞的 3倍及 7倍 (P <0 0 5 ) ,并能促进瘤特异性CTL及其前体细胞分泌IL 2。用抗IL 4单克隆抗体 (Mab)可明显阻断其诱导的CTL反应 ,抗IL 2Mab则完全阻断此诱导反应。加入IL 4基因修饰瘤苗培养上清至野生型肿瘤培养中也能抑制肿瘤增殖、诱导PBMC增殖和CTL反应。结论　IL 4基因修饰可通过直接抑制脑胶质瘤细胞增殖 ,诱导PBMC增殖及CTL杀伤活性而发挥抗瘤效应 ,其对CTL杀伤活性的促进作用可能与诱导CTL及其前体细胞分泌IL

关键词：脑胶质瘤基因修饰白细胞介素4 免疫疗法

哮喘患儿IL-4近侧启动子区克隆和多态性分析

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中华微生物学和免疫学杂志 2002年第5期22卷 555-558页

作者：周玉峰李成荣付劲蓉吴健民林伟基深圳市儿童医院儿科研究所华中科技大学附属协和医院香港中文大学威尔士亲王医院化学病理系

目的　对哮喘症患儿白细胞介素 4 (IL 4 )近侧启动子区进行克隆并分析其DNA序列的多态性。方法　对 4 0名有明显家族及过敏史的哮喘患儿和 10名正常儿童 ,以多聚酶链式反应(PCR)结合单链构象多态性 (SSCP )扩增、筛选IL 4近侧启动子片... 详细信息

目的　对哮喘症患儿白细胞介素 4 (IL 4 )近侧启动子区进行克隆并分析其DNA序列的多态性。方法　对 4 0名有明显家族及过敏史的哮喘患儿和 10名正常儿童 ,以多聚酶链式反应(PCR)结合单链构象多态性 (SSCP )扩增、筛选IL 4近侧启动子片段 ,进一步构建正常对照和异常条带PCR产物的重组质粒pIL 4 Jx2 ,并用双脱氧链终止法对重组质粒进行序列测定。结果　在对 4 0名患儿SSCP分析中发现了 7组异常条带。DNA测序结果显示有 4处变异位点位于已知的调控元件之内或毗邻位点 ,1名病人 2 2 9位C被A所替代 ,该变异恰好位于IL 4正性调节元件 Ⅰ (PRE Ⅰ )之内 ;2名病人负性调节元件 Ⅱ (NRE Ⅱ )毗邻C被T所替代 ,TATA框前增加 1个G ;1名病人STAT 6元件附近缺少了ATTTT五碱基核苷酸。结论　过敏性哮喘患儿IL 4近侧启动子区DNA序列存在多态性 ,这可能与IL

关键词：支气管哮喘白细胞介素4 启动子分子克隆序列测定儿童