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大肠杆菌BL21(DE3)氨基葡萄糖代谢调控相关基因的敲除及glmS在其中的表达研究

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复旦学报（自然科学版） 2012年第6期51卷 796-802页

作者：涂宇鹏何京桦乐科易严维耀复旦大学生命科学学院微生物学与微生物工程系上海200433

氨基葡萄糖(Glucosamine,GlcN)是一类广泛使用的保健品,对于人类软骨再生及关节炎的临床治疗都具有良好的疗效.为构建以代谢工程为基础的氨基葡萄糖生产菌株,采用λRed同源重组系统将大肠杆菌BL21(DE3)中甘露糖—磷酸转移酶系统操纵子(m... 详细信息

氨基葡萄糖(Glucosamine,GlcN)是一类广泛使用的保健品,对于人类软骨再生及关节炎的临床治疗都具有良好的疗效.为构建以代谢工程为基础的氨基葡萄糖生产菌株,采用λRed同源重组系统将大肠杆菌BL21(DE3)中甘露糖—磷酸转移酶系统操纵子(manXYZ)和乙酰氨基葡萄糖(GlcNAc)转运和代谢特异性系统操纵子(nagBACD-nagE)进行双剔除.随后构建含新型氨基葡萄糖合成酶基因(glmS)的表达载体pETG,并将它转化该双操纵子剔除菌株.结果表明,改造后的菌株不能以GlcN或GlcNAc作为碳源进行代谢生长.表达GlmS菌株的上清液经Ni-NTA亲和层析纯化,其酶活性达8.63U/mg,表明该菌株已具备发酵生产GlcN的初步特性.

关键词：大肠杆菌BL21(DE3) 氨基葡萄糖 λRed同源重组氨基葡萄糖合成酶代谢工程

利用CRISPR/Cas9系统敲除大肠杆菌tnaA基因

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生物学杂志 2019年第6期36卷 17-19页

作者：何京桦乐科易复旦大学生命科学学院

大肠杆菌的tna A基因编码色氨酸酶,该基因的失活有利于大肠杆菌积累更多的L-色氨酸。利用CRISPR/Cas9系统介导的基因编辑技术对大肠杆菌tna A基因进行敲除。首先针对tna A基因设计CRISPR/Cas9作用靶点,构建gRNA表达质粒;随后人工设计同... 详细信息

大肠杆菌的tna A基因编码色氨酸酶,该基因的失活有利于大肠杆菌积累更多的L-色氨酸。利用CRISPR/Cas9系统介导的基因编辑技术对大肠杆菌tna A基因进行敲除。首先针对tna A基因设计CRISPR/Cas9作用靶点,构建gRNA表达质粒;随后人工设计同源修复供体基因序列,构建成完整的CRISPR/Cas9基因敲除系统;将该系统应用到大肠杆菌w3110-Δ中,经PCR和测序鉴定,证实目的基因tna A敲除成功,敲除效率75%。成功构建了大肠杆菌tna A基因敲除菌,为大肠杆菌L-色氨酸高产菌株的构建奠定了基础。

关键词： CRISPR/Cas9系统敲除大肠杆菌 tna A基因

神经酸对H_(2)O_(2)诱导PC12细胞氧化损伤的保护作用

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食品科学 2024年第9期45卷 116-123页

作者：玛依乐·艾海提刘垚杰李建科陕西师范大学食品工程与营养科学学院陕西西安710119

以PC12细胞作为研究对象、H_(2)O_(2)为诱导剂,用200μmol/L H_(2)O_(2)处理PC12细胞24 h,建立细胞氧化损伤模型。通过检测超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-Px)活性以及乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)和丙二醛(malondialdehyde,MDA)水平确定氧化应激程度,并对细胞凋亡和细胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平进行评估。采用蛋白免疫印迹和实时聚合酶链式反应检测B淋巴细胞瘤-2(B-cell lymphoma-2,Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白质(Bcl-2-associated X protein,Bax)、半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)、核因子E2相关因子2(nuclear factor erythroid 2-related factor 2,Nrf2)、kelch样ECH关联蛋白1(kelch-like ECH-associated protein 1,Keap1)和血红素加氧酶-1(heme oxygenase 1,HO-1)及其基因的表达水平。结果表明,使用200μmol/L H_(2)O_(2)处理PC12细胞24 h后,其存活率为60.12%;细胞毒性实验表明,神经酸能够显著降低H_(2)O_(2)诱导损伤细胞中LDH和MDA的含量,抑制ROS的过度产生,并增强SOD和GSH-Px活性,显著上调Bcl-2、Nrf2和HO-1的表达水平,下调Caspase-3、Bax和Keap1的表达水平。综上所述,神经酸对H_(2)O_(2)诱导的PC12细胞氧化损伤具有保护作用,且与激活Nrf2/HO-1信号通路有关。

关键词：神经酸氧化损伤 PC12细胞信号通路

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煤泥基充填材料流动性与强度特性试验研究

煤炭科学技术 2024年第S1期52卷 13-21页

作者：安百富易巧梅赵祥余伟健王栋达王家乐湖南科技大学南方煤矿瓦斯与顶板灾害预防控制安全生产重点实验室湖南湘潭411201 新汶矿业集团有限责任公司山东泰安271233 彬县水帘洞煤炭有限责任公司陕西彬州713500 山东能源集团西北矿业有限公司陕西西安710018

为研究煤泥基充填材料的流动与强度特性,运用正交试验设计了以煤泥、高水、水泥、粉煤灰为组合的胶结充填材料,采用极差、方差分析及多元回归分析等方法,研究了煤泥水百分浓度(A)、高水添加比例(B)、水泥添加比例(C)、粉煤灰添加比例(D)... 详细信息

为研究煤泥基充填材料的流动与强度特性,运用正交试验设计了以煤泥、高水、水泥、粉煤灰为组合的胶结充填材料,采用极差、方差分析及多元回归分析等方法,研究了煤泥水百分浓度(A)、高水添加比例(B)、水泥添加比例(C)、粉煤灰添加比例(D)等4个关键因素对充填材料的初凝时间、扩散度及抗压强度、抗剪强度的影响机制。试验结果表明:①煤泥基充填材料的初凝时间为52~67 min,扩散度为42.0~76.5 cm,抗压强度为0.076~0.247 MPa,抗剪强度为0.033~0.139 MPa。对于初凝时间,影响显著性有B>C>A>D;对于扩散度,有A>D>B>C;对于抗压强度,有D>C>A>B;对于抗剪强度,有C>D>A>B。②拟合出了A、B、C、D与流动性指标及强度指标的数学关系式,初凝时间与A、B成二次函数关系、与C、D均呈指数关系;扩散度与A、B、C均呈指数关系,与D呈三角函数关系;抗压强度与A、D均呈指数关系,与B、C呈二次多项式关系;抗剪强度与A、B呈二次多项式关系、与C、D均呈指数关系;在A、B、C、D等4个因素与4个参数独立拟合方程的基础上,建立4因素共同影响下煤泥基充填材料流动性及强度特性参数预计模型,并进行了验证。

关键词：煤泥基充填材料流动性抗压强度抗剪强度

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铬污染土壤的电动修复研究

矿冶工程 2024年第3期44卷 124-129页

作者：徐全易乐麻洋冯涛湖南科技大学湖南湘潭411201 湖南省煤炭科学研究院有限公司湖南长沙410011 湖南工程学院湖南湘潭411104

通过调控电动修复阴极pH值及添加增强剂,提升电动修复技术对Cr污染土壤的总Cr去除率,并探究了电动修复工程的能耗变化及Cr迁移分布规律。结果表明,乙二胺四乙酸(EDTA)、柠檬酸和盐酸等增强试剂能显著提升电动修复过程的总Cr去除率。不... 详细信息

通过调控电动修复阴极pH值及添加增强剂,提升电动修复技术对Cr污染土壤的总Cr去除率,并探究了电动修复工程的能耗变化及Cr迁移分布规律。结果表明,乙二胺四乙酸(EDTA)、柠檬酸和盐酸等增强试剂能显著提升电动修复过程的总Cr去除率。不调控电动修复阴极pH值,电动修复土壤7d,向土壤分别添加EDTA、柠檬酸时,总Cr去除率分别为24.47%、23.24%;不调控阴极pH值,会发生较明显的偏极效应。控制电动修复阴极pH值,电动修复土壤7d,向土壤分别添加盐酸、柠檬酸时,总Cr去除率分别为44.20%(是空白电动修复组的4.9倍)、36.80%;控制阴极pH值,能有效阻止阴极区域Cr发生沉淀作用,提高Cr的去除率;控制阴极pH值不会显著增加电动修复过程能耗。该方法大幅提升了电动修复对土壤中总Cr的去除率,对重金属污染土壤的修复具有指导意义。

关键词：土壤修复铬污染土壤污染电动修复控制阴极pH值铬

人·物·景的情感交融——可谷先生渔舟题材作品比较研究

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影剧新作 2024年第1期 164-167页

作者：易乐江西省宜春市美术馆

可谷先生(1921-2006)是江西现代美术史上著名的艺术家、艺术教育家和艺术活动家,是江西新兴木刻运动的先驱者,江西版画最早的开拓者,他在版画、水彩、国画领域均有独特的创造,对江西版画的开创和发展做出过重要的贡献。可谷先生自20世... 详细信息

可谷先生(1921-2006)是江西现代美术史上著名的艺术家、艺术教育家和艺术活动家,是江西新兴木刻运动的先驱者,江西版画最早的开拓者,他在版画、水彩、国画领域均有独特的创造,对江西版画的开创和发展做出过重要的贡献。可谷先生自20世纪30年代起献身江西的革命美术事业。

关键词：美术事业新兴木刻运动现代美术史艺术教育家情感交融水彩版画国画

酿酒酵母菌关键酶基因剔除对谷胱甘肽合成的影响

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安徽农业科学 2008年第17期36卷 7162-7165页

作者：梁伟东乐科易马怡静常城金建中兰州大学生命科学学院甘肃兰州730000 复旦大学生命科学学院上海200433

[目的]通过基因工程手段改良酿酒酵母菌以提高谷胱甘肽的产量。[方法]利用基因重组技术分别构建CYS3基因剔除菌和CYS4基因剔除菌,对比了野生菌与突变酵母菌的生长曲线,并定量检测2者中谷胱甘肽和氨基酸的含量,得出CYS3基因和CYS4基因剔... 详细信息

[目的]通过基因工程手段改良酿酒酵母菌以提高谷胱甘肽的产量。[方法]利用基因重组技术分别构建CYS3基因剔除菌和CYS4基因剔除菌,对比了野生菌与突变酵母菌的生长曲线,并定量检测2者中谷胱甘肽和氨基酸的含量,得出CYS3基因和CYS4基因剔除对谷胱甘肽和氨基酸代谢的影响程度。[结果]与野生菌株相比,CYS3基因剔除菌中谷胱甘肽含量降低了26.1%,CYS4基因剔除菌中谷胱甘肽含量提高了6.0%。[结论]综合CYS3和CYS4基因剔除和其他在谷胱甘肽代谢途径中关键酶基因剔除试验结果所得数据,可以建立酿酒酵母谷胱甘肽代谢网络系统生物学模型。

关键词：基因剔除 sFH个cR 1-胱硫醚裂解酶 p-胱硫醚合成酶谷胱甘肽合成

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构建音乐创作中人工智能技术运用的伦理框架

中央音乐学院学报 2024年第1期174卷 44-57页

作者： [英]兰贝托·科奇奥利陶倩(译) 乐未央(校) 英国皇家伯明翰音乐学院英国皇家伯明翰音乐学院音乐科技系英国皇家伯明翰音乐学院IntegraLab实验室中央音乐学院国际交流处中央音乐学院

近年来,人工智能技术在各种创意活动中的应用呈指数级增长,这给艺术家尤其是音乐创作者们提出了一些十分重大的问题。人工智能技术是否只是作曲家和演奏家们在相应技术范围内可以选用的另一套工具,还是它有可能重新定义并最终取代人类... 详细信息

近年来,人工智能技术在各种创意活动中的应用呈指数级增长,这给艺术家尤其是音乐创作者们提出了一些十分重大的问题。人工智能技术是否只是作曲家和演奏家们在相应技术范围内可以选用的另一套工具,还是它有可能重新定义并最终取代人类的音乐创造力?文章将考虑音乐家对人工智能的各种反应,从一个不受质疑的技术决定论极端到生存焦虑的另一个极端。面对一项将深刻影响音乐家工作的外源性技术,他们迫切须要理解人工智能,将其概念化为音乐本体论的一部分,其中包括了人类行动者和非人类行动者。在这个尚且陌生的领域,我建议建立一套伦理框架,以支持和保护人类的能动性和创造力。

关键词：生成式人工智能音乐创造性伦理原则

嗜酸乳杆菌和青春双歧杆菌对牙周致病菌的拮抗作用

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上海口腔医学 2011年第4期20卷 364-367页

作者：赵隽隽乐科易冯希平马丽上海交通大学医学院附属第九人民医院·口腔医学院口腔综合科上海市口腔医学重点实验室上海200011 复旦大学生命科学学院上海200433 上海交通大学医学院附属第九人民医院·口腔医学院El腔预防儿童科上海市口腔医学重点实验室上海200011

目的:研究体外共培养时,嗜酸乳杆菌(Lactobacillus acidophilus,La)、青春双歧杆菌(Bifidobacterium adolescents,Ba)对牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonas gingivalis,Pg)、具核梭杆菌(Fusobacteriurn nuclearum,Fn)生长的作用,为牙周病生态防治提供实验依据。方法:La、Ba为作用菌,Pg、Fn为指示菌。采用杯碟法抑菌实验,观察抑菌圈形成情况。将指示菌菌液与作用菌无细胞提取液共培养2、6、24和48h,记录不同时间点菌液OD560值,了解作用菌代谢产物对指示菌的生长抑制作用。采用SAS9.0软件包对数据进行单因素方差分析。结果:杯碟法抑菌实验中,La仅对Pg的生长产生抑制作用,形成明显的抑菌圈。La无细胞提取液也能显著抑制Pg的生长(P<0.001)。Ba对2种牙周致病菌无拮抗作用。结论:La代谢产物中存在有效的抑菌物质,对Pg生长有显著拮抗作用,可望用于牙周生态防治。

关键词：益生菌牙周致病菌拮抗作用嗜酸乳杆菌青春双歧杆菌