利用CRISPR/Cas9系统敲除大肠杆菌tnaA基因

作     者：何京桦 乐科易 HE Jing-hua;LE Ke-yi

作者机构：复旦大学生命科学学院 

出 版 物：《生物学杂志》 (Journal of Biology)

年 卷 期：2019年第36卷第6期

页      面：17-19页

学科分类：0710[理学-生物学] 07[理学] 08[工学] 09[农学] 071007[理学-遗传学] 0901[农学-作物学] 0836[工学-生物工程] 090102[农学-作物遗传育种] 

主　　题：CRISPR/Cas9系统 敲除 大肠杆菌 tna A基因 

摘      要：大肠杆菌的tna A基因编码色氨酸酶,该基因的失活有利于大肠杆菌积累更多的L-色氨酸。利用CRISPR/Cas9系统介导的基因编辑技术对大肠杆菌tna A基因进行敲除。首先针对tna A基因设计CRISPR/Cas9作用靶点,构建gRNA表达质粒;随后人工设计同源修复供体基因序列,构建成完整的CRISPR/Cas9基因敲除系统;将该系统应用到大肠杆菌w3110-Δ中,经PCR和测序鉴定,证实目的基因tna A敲除成功,敲除效率75%。成功构建了大肠杆菌tna A基因敲除菌,为大肠杆菌L-色氨酸高产菌株的构建奠定了基础。