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脐带间充质干细胞对CD34+祖细胞免疫反应的影响

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脐带间充质干细胞对CD34+祖细胞免疫反应的影响

作者：严晓晔天津医科大学

学位级别：硕士

目的探讨缺氧及非缺氧脐带来源的间充质干细胞(UC-MSCs)是否能有效抑制脐血CD34+祖细胞免疫反应,影响其反应过程中免疫细胞因子的分泌。方法通过胶原酶及胰酶消化法从脐带中分离获得MSCs,观察其生长形态,取传代培养至第3代的UC-MSCs流... 详细信息

目的探讨缺氧及非缺氧脐带来源的间充质干细胞(UC-MSCs)是否能有效抑制脐血CD34+祖细胞免疫反应,影响其反应过程中免疫细胞因子的分泌。方法通过胶原酶及胰酶消化法从脐带中分离获得MSCs,观察其生长形态,取传代培养至第3代的UC-MSCs流式细胞术检测其表面标志;淋巴细胞分离液分离外周血单个核细胞(PBMC);免疫磁珠分离脐血CD34+祖细胞;将不同数量的第三代UC-MSCs5×103、2×104、8×104分别加入脐血CD34+祖细胞、外周血单个核细胞共培养体系中,不加UC-MSCs的CD34+祖细胞、PBMC共培养体系为阴性对照;另设用Transwel1悬挂式小室将UC-MSCs和脐血CD34+祖细胞、PBMC共培养体系分隔培养;培养96 h后,分别收集上清液,ELISA检测IFN-y和IL-10分泌水平。氯化钴(COCl2)进行化学模拟缺氧,在UC-MSCs中加入氯化钴浓度为0、50、100、150、200、250μmol/L的细胞培养液,分别于12 h、1d、2 d、3d、4d、5d、6 d通过MTT法检测各组的OD值,从而确定各组细胞的增殖情况;将氯化钻浓度为150μmol/L的培养液缺氧处理脐带MSCs48h后,加到脐血CD34+祖细胞、PBMC共培养体系中,培养96 h后,收集上清液,ELISA检测IFN-y和IL-10分泌水平。结果脐带UC-MSCs高表达CD 105、CD90、CD29、CD49,不表达CD40、CD80、CD86、HLA-DR、CD34、CD45;加UC-MSCs组IFN-γ的分泌量减少(与阴性对照组比,P<0.05),IL-10的分泌量增多(与阴性对照组比,P<0.05),而且具有数量依赖性,即数量越多免疫抑制作用越强;Transwell分隔培养组IFN-γ的分泌量减少(与阴性对照组相比,P<0.05),IL-10的分泌量增多(与阴性对照组相比,P<0.05);但与接触培养组相比,IFN-y的分泌量增多,IL-10的分泌量减少。经氯化钴模拟缺氧处理的UC-MSCs(150μmol/L)其对数生长期提前,对数期缩短,增殖速度加快,第3天之后减慢,提前达平台期,4-5 d后呈逐渐降低趋势,而经较高浓度(200、250μmol/L)CoCl2处理的UC-MSCs生长曲线趋于低平。缺氧的脐带MSCs能抑制共培养体系中淋巴细胞IFN-y的分泌(与阴性对照组比,P<0.05),同时促进IL-10分泌(与阴性对照组比,P<0.05),但与非缺氧脐带MSCs组相比,IFN-y的分泌量增多,IL-10的分泌量减少。结论通过酶消化法可从脐带中成功分离获得MSCs;氯化钴(浓度≤150μmol/L)对UC-MSCs增殖影响微弱,可用于其模拟缺氧预处理;缺氧／非缺氧UC-MSCs都能抑制脐血CD34+祖细胞的免疫反应中IFN-γ的分泌,同时促进IL-10分泌,并且这种作用部分依赖于细胞间的相互接触;缺氧处理后的UC-MSCs免疫调节功能下调;UC-MSCs与脐血CD34+祖细胞联合移植可有效减轻同种异体干细胞移植后的免疫排斥反应,提高干细胞的生存率,为治疗缺血性心肌病提供有效的方法。

关键词：脐带间充质干细胞 CD34+细胞脐血免疫调节缺氧

缺氧预处理对脐带间充质干细胞bFGF分泌的影响

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解放军医学杂志 2010年第3期35卷 297-300页

作者：侯跃龙李彤严晓晔张臣高英堂朱争艳天津医科大学三中心临床学院天津300170 天津市第三中心医院心脏外科天津300170 天津市人工细胞重点实验室

目的探讨氯化钴(CoCl2)模拟缺氧预处理对人脐带间充质干细胞(UC-MSCs)碱性成纤维生长因子(bFGF)分泌的影响。方法分离、培养人UC-MSCs,显微镜观察其形态学特征,并运用流式细胞仪检测其表面标志物的表达;选取P3代健康人UC-MSCs,MTT法检... 详细信息

目的探讨氯化钴(CoCl2)模拟缺氧预处理对人脐带间充质干细胞(UC-MSCs)碱性成纤维生长因子(bFGF)分泌的影响。方法分离、培养人UC-MSCs,显微镜观察其形态学特征,并运用流式细胞仪检测其表面标志物的表达;选取P3代健康人UC-MSCs,MTT法检测不同浓度(0、50、100、150、200、250μmol/L)CoCl2对UC-MSCs活力及增殖的影响,然后将细胞分为4组,分别采用0、50、100、150μmol/L CoCl2处理,于24、48、72h后检测bFGF蛋白及mRNA的表达并分析各组间的差异。结果经适当浓度(≤150μmol/L)CoCl2处理后,UC-MSCs生长加快,平台期提前,而高浓度(>200μmol/L)CoCl2对细胞活力有负面影响。经50、100、150μmol/L CoCl2处理后,各组bFGF蛋白分泌水平均明显高于0μmol/L CoCl2处理组(P<0.05),且48、72h时点均高于24h时点(P<0.05),150μmol/L CoCl2处理组72h时点bFGF蛋白表达水平明显低于48h(P<0.05),100μmol/L CoCl2处理组72h时点bFGF蛋白表达水平明显高于48h(P<0.05),而50μmol/L CoCl2处理组72h时点与48h时点比较无显著差异。bFGF mRNA表达改变与蛋白基本相一致,但50μmol/LCoCl2处理组在各时点没有显著差异。结论适当浓度(≤150μmol/L)的CoCl2对UC-MSCs增殖能力影响较小,可用于细胞模拟缺氧;缺氧预处理对人UC-MSCs的bFGF分泌有一定促进作用。

关键词：成纤维细胞生长因子2 细胞低氧氯化钴

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人脐静脉血管内皮细胞的高效分离与培养

天津医药 2010年第7期38卷 605-607页

作者：张臣李彤侯跃龙严晓晔高英堂天津市第三中心医院天津市人工细胞重点实验室 300170

目的:建立人脐静脉内皮细胞(HUVEC)体外分离、培养、鉴定的高效方法。方法:胰酶消化法从脐静脉获得HUVEC,观察其形态并传代培养,检测其摄取Dil标记的乙酰化低密度脂蛋白(Dil-AcLDL)的情况,传3代流式检测内皮细胞特异性表达。结果:消化... 详细信息

目的:建立人脐静脉内皮细胞(HUVEC)体外分离、培养、鉴定的高效方法。方法:胰酶消化法从脐静脉获得HUVEC,观察其形态并传代培养,检测其摄取Dil标记的乙酰化低密度脂蛋白(Dil-AcLDL)的情况,传3代流式检测内皮细胞特异性表达。结果:消化分离的细胞呈小圆形且聚集成团;2h细胞开始贴壁,呈条索状;7d细胞增多呈漩涡样生长;此后细胞继续增多接近融合,呈铺路石样改变。流式检测细胞高表达血管内皮细胞特异性标志CD144、vWF、CD31,部分表达CD34,而白细胞共同抗原CD45为阴性表达。镜下发现贴壁细胞原代、第5代摄取Dil-AcLDL,胞浆呈现红色荧光,提示为有活性的内皮细胞。结论:利用胰酶消化法能从人脐静脉获得大量内皮细胞,体外培养后能成功增殖传代。

关键词：内皮细胞脐静脉细胞培养技术细胞分离连续传代

脐带间充质干细胞对脐血CD_(34)^+祖细胞免疫反应的影响

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中国现代医学杂志 2010年第1期20卷 34-37,41页

作者：严晓晔李彤张臣侯跃龙朱争艳王鹏天津医科大学三中心临床学院天津300170 天津第三中心医院心脏中心天津300170 天津第三中心医院再生医学天津300170

目的探讨脐带来源的间充质干细胞(UC-MSCs)是否能有效抑制脐血CD34+祖细胞的免疫反应,影响反应过程中免疫调节细胞因子的分泌。方法从脐带中分离、培养MSCs,观察其生长形态,流式细胞术检测表面标志;将不同数量的UC-MSCs加入脐血CD34+祖... 详细信息

目的探讨脐带来源的间充质干细胞(UC-MSCs)是否能有效抑制脐血CD34+祖细胞的免疫反应,影响反应过程中免疫调节细胞因子的分泌。方法从脐带中分离、培养MSCs,观察其生长形态,流式细胞术检测表面标志;将不同数量的UC-MSCs加入脐血CD34+祖细胞、外周血单个核细胞(PBMC)共培养体系中作为实验组,不加UC-MSCs的CD34+祖细胞、PBMC共培养体系为阴性对照;另设用Transwell将UC-MSCs和脐血CD34+祖细胞、外周血单个核细胞共培养体系分隔培养,分别收集各组上清液,ELISA检测IFN-γ和IL-10水平。结果UC-MSCs高表达CD105、CD90、CD29、CD49;不表达CD40、CD80、CD86、HLA-DR;加UC-MSCs组与阴性对照组相比,IFN-γ的分泌量减少(19.30±0.78)vs(27.00±1.11),(P<0.05);IL-10的分泌量增多(50.28±1.29)vs(31.68±3.08),(P<0.05),而且具有数量依赖性;Transwell分隔培养组与阴性对照组相比,IFN-γ的分泌量减少(18.33±0.47)vs(27.00±1.11),(P<0.05);IL-10的分泌量增多(48.47±1.18)vs(31.68±3.08),(P<0.05);与接触培养组相比,IFN-γ的分泌量增多(18.33±0.47)vs(7.14±0.13),(P<0.05),IL-10的分泌量减少(85.19±2.36)vs(48.47±1.18),(P<0.05)。结论UC-MSCs能抑制脐血CD34+祖细胞的免疫反应中IFN-γ的分泌,同时促进IL-10分泌,并且这种作用部分依赖于细胞间的相互接触。UC-MSCs和CD34+祖细胞共移植可作为干细胞移植治疗缺血性心肌病的有效方式。

关键词：间充质干细胞脐带 CD34^+细胞脐血免疫调节

全科住院医师规范化培训毕业学员的岗位胜任力调查

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中华全科医师杂志 2023年第1期22卷 36-42页

作者：方林燕王燕严晓晔张志英殷兆芳吕晴黄岳青黄敏南京医科大学附属苏州医院、苏州市立医院全科医学科苏州215000

目的了解全科住院医师规范化培训(住培)毕业学员的岗位胜任力情况。方法该研究为问卷调查。于2022年1至3月采用单纯随机抽样的方法抽取于苏州市立医院完成全科住培的2009至2021届学员,对其进行问卷调查,进一步对其中仍从事全科医疗的学... 详细信息

目的了解全科住院医师规范化培训(住培)毕业学员的岗位胜任力情况。方法该研究为问卷调查。于2022年1至3月采用单纯随机抽样的方法抽取于苏州市立医院完成全科住培的2009至2021届学员,对其进行问卷调查,进一步对其中仍从事全科医疗的学员进行岗位胜任力调查。自行设计问卷,内容包括学员的基本情况,与岗位胜任力相关的临床、公卫、人文、科研教学能力的相关问题。每项能力满分100分,分为4个等级,即A级86~100分、B级70~85分、C级55~69分、D级0~54分,评分为A级者认为该项能力优秀。统计各项能力达优秀学员的占比。结果(1)基本情况:调查有效问卷回收率为96.3%(157/163)。纳入分析的157名毕业学员中男性62名(39.5%),毕业后工作单位属性主要是城市社区卫生服务机构[78名(49.7%)],所在岗位属性大部分仍为全科医疗[119名(75.8%)]。(2)临床诊疗能力:毕业学员的病史采集、基本药物使用、常见病多发病诊疗以及慢性非传染性疾病管理能力自评达优秀者占比均在半数以上,分别为58.8%(70/119)、57.1%(68/119)、54.6%(65/119)以及54.6%(65/119);基于循证的临床决策、体格检查、检查解读、转诊服务、家庭医疗服务、康复服务、急救以及初步的心理咨询与治疗能力达优秀者占比均偏低,分别为43.7%(70/119)、42.9%(52/119)、38.7%(46/119)、37.8%(45/119)、33.6%(40/119)、22.7%(27/119)、21.0%(25/119)以及16.8%(20/119)。(3)基本公共卫生服务能力:毕业学员的基本公共卫生服务相关能力自评优秀者均不足半数,达优秀学员占比从高到低依次为人群与个人健康教育能力[38.7%(46/119)]、疾病的预防控制与保健能力[33.6%(40/119)]、对签约患者的健康管理能力[33.6%(40/119)]、重点和特殊人群保健能力[26.1%(31/119)]、协助处理突发公共卫生事件能力[25.2%(30/119)]、临床相关传染病的处理能力[22.7%(27/119)]、基于流行病学的社区诊断能力[22.7%(27/119)]、领导社区健康的能力[21.0%(25/119)]。(4)人文素养能力:毕业学员人文素养的各项能力自评优秀者均达半数以上,达优秀学员占比从高到低依次为尊重患者及保护其隐私[82.4%(98/119)],对患者富有责任感[73.9%(88/119)],理解患者的需求[61.3%(73/119)],与患者、家属及照顾者的有效沟通能力[55.5%(66/119)],以及与患者的合作能力[52.1%(62/119)]。(5)科研教学能力:毕业学员达优秀者占比从高到低依次为持续学习创新能力[47.9%(57/119)]、全科住培带教能力[10.9%(13/119)]、查阅文献能力[10.1%(12/119)]。结论我院全科住培毕业学员岗位胜任力不同组分达优秀者占比不同,临床诊疗和人文素养能力较强,而基本公共卫生服务和科研教学能力尚有待加强。

关键词：全科医师住院医师规范化培训岗位胜任力

支气管肺泡灌洗液细菌培养及药敏试验在重症监护病房的肺炎诊治中的价值

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中国血液流变学杂志 2015年第4期25卷 446-448页

作者：严晓晔吴允孚席与斌苏州市市立医院东区重症监护室江苏苏州215001

目的：探讨支气管肺泡灌洗液（BALF）细菌培养及药敏试验在重症监护病房（ICU）的肺炎诊治中的价值。方法选取2010年10月—2012年08月收住重症医学科ICU的肺部感染并行气管插管或气管切开机械通气的患者126例，经人工气道留取痰培养，... 详细信息

目的：探讨支气管肺泡灌洗液（BALF）细菌培养及药敏试验在重症监护病房（ICU）的肺炎诊治中的价值。方法选取2010年10月—2012年08月收住重症医学科ICU的肺部感染并行气管插管或气管切开机械通气的患者126例，经人工气道留取痰培养，同时行支气管肺泡灌洗，BALF及痰液做细菌培养和药敏试验。结果 BALF细菌培养阳性率为59.52%，常规痰培养阳性率46.03%。培养前3位细菌分别为鲍曼不动杆菌、铜绿假单胞菌、大肠埃希菌，其对头孢唑啉、氨苄西林的耐药率超过90%，鲍曼不动杆菌、铜绿假单胞菌对亚胺培南耐药率超过50%，氨基糖苷类药物仍保持较高的敏感性。结论经纤维支气管镜获取BALF培养，可获得相对更高的阳性结果，药敏结果对ICU的肺炎临床治疗具有指导意义。

关键词：细菌支气管肺泡灌洗液肺炎

CoCl_2缺氧处理对脐带间充质干细胞促血管生长因子表达的影响

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心脏杂志 2011年第1期23卷 59-64页

作者：侯跃龙李彤张臣严晓晔朱争艳高英堂吴鹏天津市第三中心医院心脏外科天津300170 天津市人工细胞重点实验室天津300170 天津医科大学第三中心临床学院天津300170

目的:探讨氯化钴(CoCl2)模拟缺氧预处理对人脐带间充质干细胞(UC-MSCs)中碱性成纤维生长因子(bFGF)和血管内皮生长因子(VEGF)基因表达及蛋白分泌的影响。方法:分离、培养UC-MSCs。取第3代的UC-MSCs,运用含150μmol/L的CoCl2培养液培养细... 详细信息

目的:探讨氯化钴(CoCl2)模拟缺氧预处理对人脐带间充质干细胞(UC-MSCs)中碱性成纤维生长因子(bFGF)和血管内皮生长因子(VEGF)基因表达及蛋白分泌的影响。方法:分离、培养UC-MSCs。取第3代的UC-MSCs,运用含150μmol/L的CoCl2培养液培养细胞72 h,用流式细胞仪检测缺氧对UC-MSCs表面标志物(CD34、CD45、CD90、CD105、CD29及CD49)的影响。依据CoCl2的浓度(0、50、100μmol/L及150μmol/L)将UC-MSCs分为4个组,即对照组、低、中、高CoCl2组,每个组处理24 h、48 h和72 h。用SYBRGREN荧光定量RT-PCR检测bFGF、VEGF mRNA的表达,用ELISA法检测bFGF和VEGF蛋白的表达。结果:经含150μmol/L CoCl2的培养液缺氧处理,没有改变细胞的形态和表面标记物。在缺氧培养时间相同的情况下,bFGF、VEGF基因的表达均随着CoCl2浓度的增加而增加,CoCl2为150μmol/L时达到峰值(P<0.05)。当CoCl2浓度为150μmol/L培养不同时间(24 h、48 h及72 h)时,随着缺氧预处理时间的延长,bFGF、VEGF基因的表达随之增加,于48 h时达到峰值(P<0.05),bFGF、VEGF基因的表达分别为8.15±0.10和16.67±0.17,延长缺氧培养的时间基因的表达减小(P<0.05);蛋白与基因表达的变化基本一致。在含150μmol/L CoCl2的培养液培养48 h,bFGF和VEGF的表达达到顶峰(P<0.05),分别为(69.63±7.90)ng/L和(89.55±5.45)ng/L。结论:适当浓度的CoCl2(<150μmol/L)对UC-MSCs的生物学功能影响轻微。CoCl2可用于细胞的模拟缺氧,缺氧对UC-MSCs bFGF、VEGF的分泌具有时间和剂量依赖性,以含150μmol/L CoCl2的培养液培养48 h,为促进bFGF、VEGF基因和其蛋白表达的最适条件。

关键词：缺氧脐带间充质干细胞血管内皮生长因子碱性成纤维生长因子

缺氧脐带间充质干细胞对脐血CD34^+祖细胞免疫反应的影响

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天津医科大学学报 2010年第1期16卷 18-21页

作者：严晓晔李彤侯跃龙张臣天津医科大学三中心临床学院天津300170 天津市第三中心医院

目的:探讨脐带来源的缺氧间充质干细胞(MSCs)是否能有效抑制脐血CD34+祖细胞免疫排斥反应,影响反应过程中免疫调节细胞因子的分泌。方法:从脐带中分离、培养MSCs,观察其生长形态,流式细胞术检测其表面标志;将缺氧处理后的脐带MSCs加到脐... 详细信息

目的:探讨脐带来源的缺氧间充质干细胞(MSCs)是否能有效抑制脐血CD34+祖细胞免疫排斥反应,影响反应过程中免疫调节细胞因子的分泌。方法:从脐带中分离、培养MSCs,观察其生长形态,流式细胞术检测其表面标志;将缺氧处理后的脐带MSCs加到脐血CD34+祖细胞、外周血单个核细胞(PBMC)共培养体系中,96h后收集上清液,ELISA检测IFN-γ和IL-10水平。结果:脐带MSCs不表达CD40、CD80、CD86、HLA-DR、CD34;缺氧的脐带MSCs能抑制共培养体系中淋巴细胞IFN-γ的分泌(与对照组比,P<0.05),同时促进IL-10分泌(与对照组比,P<0.05),但与非缺氧脐带MSCs组相比,IFN-γ的分泌量增多,IL-10的分泌量减少。结论:缺氧脐带MSCs能抑制脐血CD34+祖细胞的免疫排斥反应,抑制IFN-γ的分泌,同时促进IL-10分泌,但与非缺氧脐带MSCs相比,免疫调节功能下调。

关键词：间充质干细胞 CD34+祖细胞脐血细胞因子缺氧

机械通气重症患者行持续浅镇静目标导向调控方案的效果研究

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川北医学院学报 2019年第5期34卷 570-573页

作者：席与斌李佳张俊陆鹰严晓晔苏州市立医院东区重症医学科

目的:探讨机械通气重症患者行持续浅镇静目标导向调控方案的效果。方法:选取ICU收治的84例机械通气重症患者,按照随机数字表法分为两组,每组各42例。其中对照组采用标准镇静方案治疗,观察组采用持续浅镇静目标导向调控方案治疗,比较两... 详细信息

目的:探讨机械通气重症患者行持续浅镇静目标导向调控方案的效果。方法:选取ICU收治的84例机械通气重症患者,按照随机数字表法分为两组,每组各42例。其中对照组采用标准镇静方案治疗,观察组采用持续浅镇静目标导向调控方案治疗,比较两组患者的术中、术后疗效指标。结果:观察组入组48h内的浅镇静达标率(65.85%)显著高于对照组(52.92%)(P0.05)。结论:持续浅镇静目标导向调控方案可明显提高机械通气重症患者48h内的浅镇静达标率,显著改善预后。

关键词：机械通气重症患者浅镇静目标导向调控标准镇静