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圈养与野生川金丝猴应激水平的比较研究

野生动物学报 2022年第3期43卷 623-628页

作者：王炎王娟娟杨静郭含星罗伟强王晓卫严兴荣陕西省动物研究所西安710032 陕西省野生动物保育重点实验室西安710043 西北大学生命科学学院西安710127 空军军医大学西京医院实验动物中心西安710032

为进一步探索川金丝猴(Rhinopithecus roxellana)应激水平和生殖激素的变化,以川金丝猴的粪便为试验材料,提取粪便中的肠道上皮细胞RNA和内固醇激素,检查样本皮质醇、睾酮和孕酮水平。结果显示:圈养(n=30)和野生(n=45)川金丝猴中,仅从3... 详细信息

为进一步探索川金丝猴(Rhinopithecus roxellana)应激水平和生殖激素的变化,以川金丝猴的粪便为试验材料,提取粪便中的肠道上皮细胞RNA和内固醇激素,检查样本皮质醇、睾酮和孕酮水平。结果显示:圈养(n=30)和野生(n=45)川金丝猴中,仅从3只圈养川金丝猴的粪便中提取出了RNA;圈养川金丝猴皮质醇质量分数显著高于野生川金丝猴(P<0.05);圈养雌性川金丝猴皮质醇和孕酮质量分数显著高于野生雌性川金丝猴(P<0.01);圈养成年雄性川金丝猴皮质醇和睾酮质量分数显著高于野生雄性川金丝猴(P<0.05)。说明圈养川金丝猴应激水平、睾酮和孕酮质量分数高于野生个体,结果可为后续川金丝猴的繁育研究奠定理论和实践基础。

关键词：川金丝猴粪便皮质醇孕酮睾酮 RNA

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昆白小鼠体细胞核移植

昆白小鼠体细胞核移植

作者：严兴荣西北农林科技大学

学位级别：硕士

自1998 年首例体细胞克隆小鼠成功后,克隆小鼠不仅在数量和品系上不断增多,而且供核细胞种类和也在增加。昆白小鼠体细胞克隆未见成功报道,昆白小鼠是我国自主繁殖的近交系小鼠,由于遗传背景清楚、生殖周期短、环境适应能力强等优点,是... 详细信息

自1998 年首例体细胞克隆小鼠成功后,克隆小鼠不仅在数量和品系上不断增多,而且供核细胞种类和也在增加。昆白小鼠体细胞克隆未见成功报道,昆白小鼠是我国自主繁殖的近交系小鼠,由于遗传背景清楚、生殖周期短、环境适应能力强等优点,是国内良好的实验动物模型。昆白小鼠的体细胞克隆不仅对克隆机理研究,而且对遗传学、胚胎学和分子生物学等领域都有重要的意义。本研究从4 个方面对昆白小鼠体细胞核移植进行了研究:供体细胞的采集、Spindle-view 对卵母细胞的去核效率的影响,活力检测和核型分析,不同注核方法对克隆效率的影响。 1. 通过对分离培养的1-6 代的供核细胞进行核型分析和活力测定,各代间核型正常,细胞活力无显著性差异(P>0.05),证明用1-6 代的细胞作为供核细胞是可行的。 2. Spindle-view 协助的卵母细胞去核。分别用Spindle-view 协助和盲吸法对注射hCG后10和12h的小鼠卵母细胞去核,用Spindle-view协助的去核率分别为95%和87%,用盲吸法为90%和22%。因此用Spindle-view 协助下对hCG后10h卵的去核不仅去核率高,而且对卵母细胞损伤小。 3. 培养液和激活方法的筛选。用正常胚胎筛选培养液,CZB 和M16 克服2 细胞阻滞的比率分别为76.9%、56.2%,经检验发现差异显著(P0.05),但CZB 比M16 稍高,因此选用CZB 培养重组胚。分别用电刺激,酒精, SrCl2 和钙离子载体4 种不同的激活方法对卵母细胞的激活,激活率分别为40.8%、90.1%、60.3%、88.4%,发现用酒精和SrCl2 激活效果较好,两组发育到桑椹胚的比率分别为16.4%和3.6%,经比较酒精激活比SrCl 激活效果好(P<0.05)。 4. 不同注核方法对克隆效率的影响。用卵周隙注射和卵胞质注射两种方法注核发现用电融合方法融合率34.8%,有13 枚重构胚卵裂,其中3 枚发育到3-4cell,1 枚发育到6-cell,卵胞质注射成功率8.2%,激活培养后没有卵裂的。因此卵周隙注射优于卵胞质注射。

关键词：昆白小鼠体细胞核移植 Spindle-view

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羚牛骨髓间充质干细胞的分离培养与鉴定

西北农业学报 2022年第5期31卷 535-543页

作者：贾佳郭含星王娟娟罗伟强耿阳阳高梦溪王君建潘广林贾康胜严兴荣西北大学生命科学学院西部资源生物与现代生物技术教育部重点实验室西安710068 陕西省野生动物保育重点实验室西安710068 陕西省珍稀野生动物抢救饲养研究中心西安710402

分离鉴定羚牛骨髓间充质干细胞,为开展羚牛细胞治疗与体细胞核移植的深入研究提供有效载体。分离培养来源于羚牛骨髓的间充质干细胞;通过染色体G显带技术进行核型分析;利用流式细胞技术检测细胞表面标记物;通过定向诱导培养探究细胞的... 详细信息

分离鉴定羚牛骨髓间充质干细胞,为开展羚牛细胞治疗与体细胞核移植的深入研究提供有效载体。分离培养来源于羚牛骨髓的间充质干细胞;通过染色体G显带技术进行核型分析;利用流式细胞技术检测细胞表面标记物;通过定向诱导培养探究细胞的分化潜能。结果表明,羚牛骨髓间充质干细胞能够维持正常核型,对间充质干细胞特异性表面标记CD105、CD73、CD90、CD166、CD44呈阳性,对CD14(单核细胞和巨噬细胞标记物),CD19(b细胞标记物),CD34(造血干细胞标记物),CD45(泛白细胞标记物)和HLA-DR均呈阴性,具有成脂、成骨与成软骨多向分化潜能。表明成功分离羚牛骨髓间充质干细胞并对其表面抗原与分化潜能进行鉴定,为羚牛生物多样性保护与内源物种间充质干细胞的应用研究奠定基础。

关键词：羚牛间充质干细胞分离培养核型分析诱导分化

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林麝粪便孕酮提取方法的改进

经济动物学报 2022年第1期26卷 19-22+28页

作者：唐婕杨静索丽娟魏浩刘欣王娟娟严兴荣王艳陕西省动物研究所陕西省野生动物保育重点实验室西北大学生命科学学院

粪便孕酮水平是预测哺乳动物妊娠的重要激素之一，为了真实反映林麝粪便孕酮水平，提高妊娠检测的准确率，以林麝粪便为研究对象，用不同的方法进行抽提，并用酶联免疫吸附分析(ELISA)和高效液相色谱(HPLC)进行检测。结果表明：振荡可... 详细信息

粪便孕酮水平是预测哺乳动物妊娠的重要激素之一，为了真实反映林麝粪便孕酮水平，提高妊娠检测的准确率，以林麝粪便为研究对象，用不同的方法进行抽提，并用酶联免疫吸附分析(ELISA)和高效液相色谱(HPLC)进行检测。结果表明：振荡可显著提高孕酮的溶解效率(P0.05)。结果证明，改进后的方法可提高ELISA和高效液相色谱检测效率，为后续林麝和其他动物的孕酮检测提供参考。

关键词：林麝粪便孕酮 ELISA HPLC

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丙戊酸钠对人胶质瘤干细胞增殖和凋亡的影响

基因组学与应用生物学 2017年第6期36卷 2235-2240页

作者：胡军程妮钟占强严兴荣冯华周建军解放军第四五一医院神经内科西安710054 西安市第五医院内一科西安710082 解放军第三二三医院疼痛科西安710054 西北大学生命科学学院西安710069 第三军医大学西南医院神经外科重庆710036

胶质瘤干细胞是胶质瘤起源和化疗抵抗的重要原因,也是胶质瘤治疗的重要靶点。丙戊酸钠是一种去乙酰化酶抑制剂,具有抗肿瘤活性。本研究主要探讨丙戊酸钠对胶质瘤干细胞生长的影响。我们使用无血清培养方法从A172胶质瘤细胞中,分离培养... 详细信息

胶质瘤干细胞是胶质瘤起源和化疗抵抗的重要原因,也是胶质瘤治疗的重要靶点。丙戊酸钠是一种去乙酰化酶抑制剂,具有抗肿瘤活性。本研究主要探讨丙戊酸钠对胶质瘤干细胞生长的影响。我们使用无血清培养方法从A172胶质瘤细胞中,分离培养胶质瘤干细胞,免疫荧光染色发现胶质瘤干细胞表达Nestin和CD133。使用不同浓度(0.5~1.5 mmol/L)丙戊酸钠连续处理胶质瘤干细胞7 d,CCK8检测细胞活力,从第4天起,就可观察到丙戊酸钠处理组细胞OD值显著低于正常组,并且随着丙戊酸钠浓度的增加和处理时间的延长,细胞OD值下降更为明显。检测胶质瘤干细胞克隆形成率,正常组胶质瘤干细胞在干细胞培养基中培养7 d后,克隆形成率为(21±2.03)%,给予0.5 mmol/L丙戊酸钠处理胶质瘤干细胞,克隆形成率明显下降到(13±3.86)%,继续增加丙戊酸钠浓度至1 mmol/L或1.5 mmol/L时,克隆形成率分别非常显著下降至(10±4.71)%和(8±3.66)%。此外,丙戊酸钠也可导致胶质瘤干细胞凋亡,并且细胞凋亡率随着丙戊酸钠浓度的增加而增加。本研究证实丙戊酸钠抑制胶质瘤干细胞增殖和凋亡,并且其抑制效应具有浓度依赖性。丙戊酸钠是一种非常有潜力的治疗胶质瘤的药物,本研究的完成将为它的临床运用提供坚实的理论基础。

关键词：丙戊酸钠胶质瘤干细胞细胞增殖细胞凋亡

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无血清分离昆明系小鼠胚胎干细胞

中国兽医学报 2008年第3期28卷 328-332页

作者：余树民严兴荣陈冬梅王晗窦忠英西北农林科技大学动物科技学院国家干细胞工程技术研究中心陕西分中心

以昆明系小鼠胚胎为研究材料,以丝裂霉素C处理的胎鼠成纤维细胞（Mouse embryonic fibroblasts,MEF）为饲养层,在胚胎干细胞（Embryonic stemcells,ESCs）培养液中添加血清替代物（Knockout serumreplacement,KSR）以替代胎牛血清（Fetal bovine serum,FBS）,并与添加FBS的培养液进行对比,研究了昆明系小鼠胚胎贴壁、ICM（Inner cell mass,ICM）集落形成以及ESCs分离的情况。结果表明,在添加KSR的培养液中,胚胎在培养3~5 d贴壁,胚胎贴壁率显著低于添加FBS的培养液;5~7 d形成ICM集落,集落未分化形态可维持2~3 d,培养10 d ICM集落仍可保持典型的未分化形态;ICM集落形成率和1代ESCs集落出现率与添加FBS的培养液相比差异不显著（P〉0.05）,但2~5代ESCs集落出现率显著高于添加FBS的培养液,其中有2株ESCs在添加KSR的培养液中传到7代;所分离细胞显示碱性磷酸酶染色强阳性,Oct-4、Nanog的免疫组化染色阳性,具有ESCs的特点。结论：在ESCs培养液中添加KSR比添加FBS更有利于维持ICM集落及ESCs的未分化状态。

关键词：昆明系小鼠胚胎胚胎干细胞(ESCs) 内细胞团(ICM)

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加强领导严格把关廉洁征兵 001

永州日报

作者：严兴荣

本报讯 10月11日上午，我市2007年征兵工作电视电话会议在冷水滩召开。军分区司令员朱礼生在会上要求，各级各部门要进一步认清形势，强化政治责任，高标准抓好征兵工作的落实。市委常委、副市长唐松成出席会议并讲话，市委常委、军分...

本报讯 10月11日上午，我市2007年征兵工作电视电话会议在冷水滩召开。军分区司令员朱礼生在会上要求，各级各部门要进一步认清形势，强化政治责任，高标准抓好征兵工作的落实。市委常委、副市长唐松成出席会议并讲话，市委常委、军分区政委杨南

关键词：

来源： cnki报纸评论

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确保高标准完成征兵任务 001

慢病毒介导的牛生长素基因对小鼠胚胎发育的研究

永州日报

作者：严兴荣

本报讯　10月9日下午，2006年全市征兵工作电视电话会议在军分区召开。会议强调，进一步认清形势，强化政治责任，高标准抓好征兵工作的落实。市委常委、常务副市长崔永平，市委常委、军分区政委杨南平，军分区司会员朱礼生出席会议。朱礼

关键词：

来源： cnki报纸评论

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基因组学与应用生物学 2013年第1期32卷 8-13页

作者：严兴荣丁向彬葛秀国郭宏张军林李永亮杨艳红西北大学生命科学学院西安710069 天津农学院动物科学系天津380004 武汉生物工程学院武汉410315 贵州省修文中学修文520020 第四军医大学唐都医院妇产科西安710038

生长素是促进动物生长发育所必需的激素之一。本研究探索牛生长激素(bovine growth hormone,bGH)对小鼠胚胎发育的影响。将牛生长激素基因连接到慢病毒载体(Lenti-CMV-EF1-eGFP)形成Lenti-CMV-bGH/EF1-eGFP,重组病毒经293T细胞包装后直... 详细信息

生长素是促进动物生长发育所必需的激素之一。本研究探索牛生长激素(bovine growth hormone,bGH)对小鼠胚胎发育的影响。将牛生长激素基因连接到慢病毒载体(Lenti-CMV-EF1-eGFP)形成Lenti-CMV-bGH/EF1-eGFP,重组病毒经293T细胞包装后直接感染小鼠胚胎和G1胚胎干细胞(embryonicstemcells,ESCs)。阳性表达的胚胎经体外培养,发育到囊胚期的胚胎进行胚胎移植,为直接感染组。感染的小鼠G1胚胎干细胞注射到正常昆明白小鼠囊胚制作嵌合胚胎后进行胚胎移植,为嵌合体组。分别解剖3只妊娠15d的直接感染组和嵌合组的小鼠,观察受体小鼠妊娠情况。结果发现,在1-细胞期感染胚胎,感染效率可达(74.7±6.7)%,在2-细胞期连续感染,感染效率为(79.4±5.7)%,两组感染方法的效率没有显著差异(P>0.05)。1次和2次感染胚胎发育和正常胚胎之间没有显著差异((87.6±3.5)%,(85.4±6.3)%VS(83.0±5.5)%,P>0.05)。所有移植的胚胎没有发育到足月,解剖妊娠15d的小鼠,发现直接感染组没有妊娠,嵌合组胎盘发育正常,但胚胎部分已经死亡和被吸收。因此,本研究证明bGH对小鼠附着前胚胎发育没有影响,但影响小鼠胚胎附着后的发育。这为后期bGH的研究提供参考。

关键词：小鼠牛GH基因胚胎发育转基因生长素