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基于SecA基因的鰤鱼诺卡氏菌qPCR检测方法的建立及进化分析

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水生生物学报 2023年第10期47卷 1553-1560页

作者：周可欣潘晓艺蔺凌云黄雷穆雪姣王丛旭姚嘉赟劳顺健沈锦玉上海海洋大学水产与生命学院上海201200 浙江省淡水水产研究所农业农村部淡水渔业健康养殖重点实验室浙江省鱼类健康与营养重点实验室湖州313001 湖州市农业科技发展中心湖州313000

为对诺卡氏菌病进行快速早期诊断,建立了鰤鱼诺卡氏菌(Nocardia seriolae)TaqMan qPCR检测方法。以鰤鱼诺卡氏菌的管家基因SecA为靶标设计引物和探针,对反应条件进行优化,制作标准曲线,进行灵敏性、重复性和特异性测试,并将建立的方法... 详细信息

为对诺卡氏菌病进行快速早期诊断,建立了鰤鱼诺卡氏菌(Nocardia seriolae)TaqMan qPCR检测方法。以鰤鱼诺卡氏菌的管家基因SecA为靶标设计引物和探针,对反应条件进行优化,制作标准曲线,进行灵敏性、重复性和特异性测试,并将建立的方法应用于临床样品的检测。结果表明,优化后,引物和探针终浓度分别为0.3和0.1μmol/L,退火延伸温度60℃时,qPCR在9.85×1010—9.85×100copies内呈良好的线性关系,灵敏度最高达9.85 copies;重复性实验结果显示,组间和组内变异系数均小于1%;特异性结果表明,对无乳链球菌、弗氏柠檬酸杆菌和维氏气单胞菌等13种病菌均无扩增曲线;临床对42份大口黑鲈样品进行检测,结果表明,qPCR检出率比普通PCR提高14.24%;对发病大口黑鲈的组织及结节部位检测显示,结节部位菌载量大幅高于非结节部位,最高相差1000倍;SecA基因分析结果显示,SecA基因在传代中和种内高度保守,种间具有一定的离散性,是个很好的用于诺卡氏菌种鉴定的靶基因。研究建立的鰤鱼诺卡氏菌qPCR检测方法灵敏性高、特异性强、重复性好,可用于对鰤鱼诺卡氏菌病的早期诊断和定量检测,为诺卡氏菌病的早诊断早治疗提供了有效手段。

关键词：鰤鱼诺卡氏菌 qPCR 诺卡氏菌病大口黑鲈

中国人丁型肝炎病毒抗原编码区基因的cDNA克隆和序列分析

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病毒学报 1993年第1期9卷 15-22页

作者：刘善虑易炎杰丛旭詹美云中国预防医学科学院病毒学研究所北京100052

从我国四川一丁型肝炎病毒抗原(HDAg)、HDV RNA双阳性的HBsAg携带者血清中提取RNA,采用人工合成的引物进行4次逆转录和聚合酶链反应(PCR),获得了长度分别为707bp、414bp、876bp和274bp的4个HDV cDNA片段,并对其进行了克隆和序列分析。... 详细信息

从我国四川一丁型肝炎病毒抗原(HDAg)、HDV RNA双阳性的HBsAg携带者血清中提取RNA,采用人工合成的引物进行4次逆转录和聚合酶链反应(PCR),获得了长度分别为707bp、414bp、876bp和274bp的4个HDV cDNA片段,并对其进行了克隆和序列分析。其抗原编码区核苷酸序列与美国(Makino)、意大利(Wang)、英国(Saldanha)和我国台湾株(Chao)等株比较同源性,分别为99.4％、92.1％、94.3％和91.4％,由它推导的氨基酸序列的同源性分别为99.1％、87.9％、88.2％和89.3％,并发现了4个集中保守的区域。

关键词：丁型肝炎病毒逆转录聚合酶链反应

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元代花鸟画笔法理论研究

艺术评鉴 2021年第4期 48-50页

作者：丛旭大连东软信息学院

文章主要介绍了元代花鸟画笔法理论的相关研究内容,先简单分析了相关笔法研究,随后介绍了元代花鸟画笔法理论和实践,包括元代花鸟画笔法代表作以及元代笔法特征。

关键词：元代花鸟画笔法理论笔法特征

体外传代对大口黑鲈蛙虹彩病毒毒株毒力的影响

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大连海洋大学学报 2023年第4期38卷 623-629页

作者：王丛旭潘晓艺周可欣穆雪娇姚嘉赟蔺凌云赵建华沈锦玉湖州师范学院生命科学学院浙江湖州313001 浙江省淡水水产研究所农业农村部淡水渔业健康养殖重点实验室浙江省鱼类健康与营养重点实验室浙江湖州313001

为研究不同代次大口黑鲈蛙虹彩病毒(Largemouth bass ranavirus,LMBV)的病毒特性变化及毒力差异,采用攻毒试验、qPCR、TCID 50及二代测序的方法,对LMBV分离株(LMBV-ZJDSS)F5、F35和F65进行致病性、组织中病毒载量变化、病毒滴度和不同... 详细信息

为研究不同代次大口黑鲈蛙虹彩病毒(Largemouth bass ranavirus,LMBV)的病毒特性变化及毒力差异,采用攻毒试验、qPCR、TCID 50及二代测序的方法,对LMBV分离株(LMBV-ZJDSS)F5、F35和F65进行致病性、组织中病毒载量变化、病毒滴度和不同代次病毒基因组测序,在LMBV全基组中筛选出4个毒力基因,并对不同地区毒株的毒力基因进行分析。结果表明:攻毒浓度为108.5 TCID 50/mL时,F5、F35和F65代毒株15 d内引起大口黑鲈(Micropterus salmoides)的死亡率分别为60%、25%和5%;F65代毒株最早产生细胞病变效应(cytopathic effect,CPE);大口黑鲈肝脏、脾脏和肠的病毒载量较高,不同代次毒株在各组织中均有分布,96 h内F65代毒株在各器官组织的病毒载量呈上升趋势,48 h内F5代毒株在各器官组织的病毒载量呈上升趋势;对F5和F65代毒株的全基因组测序分析显示,E3、TNFR和ICP18基因编码区未发生突变,遗传稳定性较高,ICP46基因编码区有一处氨基酸由天冬氨酸突变为酪氨酸。研究表明,通过病毒的连续传代,病毒致细胞病变的速度加快,病毒对大口黑鲈的致病性减弱,病毒的毒力有所下降,毒力下降的原因可能是编码ICP46蛋白的氨基酸发生突变,且不同地区LMBV毒株毒力基因差异主要集中在TNFR上。

关键词：大口黑鲈大口黑鲈蛙虹彩病毒体外传代毒力基因

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南四湖夏秋季鱼类群落结构特征研究

水产学杂志 2023年第3期36卷 60-67页

作者：丛旭日董贯仓李秀启客涵王亚楠孙鲁峰马汝芳王晴晴山东省淡水渔业研究院山东省淡水水产遗传育种重点实验室农业农村部黄河下游渔业资源环境科学观测实验站山东济南250013

2020年7月和11月,在淮河流域的南四湖即南阳湖、独山湖、昭阳湖和微山湖(34°60'~35°14'N,116°68'~117°23'E)的上级湖(鲁桥)、湖中(二级坝)和下级湖(韩庄)设置3个采样点,用多网目复合刺网、地笼网、网箔、拦网采集鱼类样本,并定期走... 详细信息

2020年7月和11月,在淮河流域的南四湖即南阳湖、独山湖、昭阳湖和微山湖(34°60'~35°14'N,116°68'~117°23'E)的上级湖(鲁桥)、湖中(二级坝)和下级湖(韩庄)设置3个采样点,用多网目复合刺网、地笼网、网箔、拦网采集鱼类样本,并定期走访采样点附近的渔船码头、跟随采样点附近的捕捞渔船等现场补充调查,分析和研究该水域鱼类群落的种类组成、生物量、优势种以及生物多样性,为填补南四湖鱼类研究的空白,完善南四湖生态保护内容和渔业持续发展提供基础数据。结果表明,夏秋季该水域共发现鱼类45种,隶属于7目14科34属,包括鲢(Hypophthalmichthys molitrix)、鳙(Aristichthys nobilis)、鲫(Carassius auratus)、鲤(Cyprinus carpio)、刀鲚(Coilia nasus)、翘嘴鲌(Culter alburnus)等主要经济种类,鲫为绝对优势种,其他优势种类因网具选择性而差异较大。二级坝附近水域多样性指数最高,鲁桥次之,韩庄最低。区域因子多重比较结果显示,二级坝湖区多样性指数显著高于其他湖区(P0.05)。7月CPUE高于11月,差异不显著(P>0.05)。根据主要物种的生物量聚类,南四湖鱼类群落可划分为2组,A组群(二级坝调查点)、B组群(鲁桥、韩庄调查点),这二个组群的平均相似率较高,达77.13%,刀鲚的差异贡献率较高。

关键词：南四湖群落结构聚类分析多样性优势种

互补引物/模板评价毕加酵母表达的丙型肝炎病毒RNA依赖的RNA聚合酶

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病毒学报 2002年第1期18卷 29-33页

作者：魏来陈红松陈勇封波丛旭王宇北京大学人民医院北京大学肝病研究所北京100044 徐州医学院附属医院

构建含有感染性克隆HCV非结构基因 5b区序列的酵母表达质粒 ,转化毕加酵母 ,获得持续、可溶性HCVRNA依赖的RNA聚合酶 (RdRp)的表达 ,纯化蛋白在SDS -PAGE及Westernblot中显示出特异性的 6 4 2kDHCVRdRp蛋白带 ,同聚引物 /模板测定显示R... 详细信息

构建含有感染性克隆HCV非结构基因 5b区序列的酵母表达质粒 ,转化毕加酵母 ,获得持续、可溶性HCVRNA依赖的RNA聚合酶 (RdRp)的表达 ,纯化蛋白在SDS -PAGE及Westernblot中显示出特异性的 6 4 2kDHCVRdRp蛋白带 ,同聚引物 /模板测定显示RdRp的活性极低 ,延长反应时间 ,RNA聚合活性仅轻度升高。采用合成的杂聚互补引物 /模板 ,未发现核苷酸在毕加酵母表达的RdRp作用下掺入模板 ,随时间延长 ,杂聚互补引物 /模板降解。

关键词：丙型肝炎病毒 RNA依赖 RNA聚合酶互补引物/模板评价表达

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干扰素γ对丙型肝炎病毒复制子的抑制作用

中华肝脏病杂志 2006年第1期14卷 7-10页

作者：贾因棠魏来蒋栋丛旭费然山西医科大学第一医院感染科太原030001 北京大学人民医院肝病研究所

目的研究干扰素(IFN)γ直接抑制丙型肝炎病毒(HCV)复制子的作用及其与IFN α联合用药的疗效,并对可能介导IFN γ抗HCV作用的干扰素刺激基因(ISG)的表达水平进行探讨。方法建立HCV复制子细胞模型,用IFN γ或IFN γ联合IFN α处理HCV复制... 详细信息

目的研究干扰素(IFN)γ直接抑制丙型肝炎病毒(HCV)复制子的作用及其与IFN α联合用药的疗效,并对可能介导IFN γ抗HCV作用的干扰素刺激基因(ISG)的表达水平进行探讨。方法建立HCV复制子细胞模型,用IFN γ或IFN γ联合IFN α处理HCV复制子细胞,通过半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)及实时定量PCR检测细胞中HCV RNA水平;western blot检测细胞中HCV非结构蛋白5A(NS5A)。结果 IFN γ对HCV RNA的复制及NS5A的表达有明显抑制作用,10 U／ml IFN γ可使 HCV RNA较对照组减少36％,25 U／ml减少80％;IFN γ对HCV RNA及NS5A蛋白的抑制作用与其剂量及作用时间呈正相关。用IFN γ预处理的细胞对IFN α抗HCV的作用更敏感,且细胞内干扰素调节因子 -l(IRF-1)、干扰素刺激基因因子3 γ(ISGF3 γ)和2’5’-寡腺苷酸合成酶(2’5’-OAS)呈明显的诱导性表达。结论 IFN γ能有效抑制HCV RNA的复制,并与IFN α有协同抗HCV的作用。IRF-1、ISGF3 γ和2’5’-OAS可能参与介导IFN γ抗HCV的作用。

关键词：干扰素Ⅱ型肝炎病毒,丙型复制子

胸横肌平面-胸部神经阻滞用于乳腺癌改良根治术的效果研究

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医药论坛杂志 2022年第8期43卷 95-99,105页

作者：牛全玉李晶丛旭辉张丽媛张加强河南省人民医院麻醉与围术期医学科郑州450003

目的探讨胸横肌平面-胸部神经阻滞(transversus thoracic muscle plane-pectoral nerves block, TTP-PECS)复合全身麻醉对乳腺癌改良根治术患者围术期的炎性应激、免疫功能及对肿瘤转移复发相关因素的影响。方法筛选择期行单侧乳腺癌... 详细信息

目的探讨胸横肌平面-胸部神经阻滞(transversus thoracic muscle plane-pectoral nerves block, TTP-PECS)复合全身麻醉对乳腺癌改良根治术患者围术期的炎性应激、免疫功能及对肿瘤转移复发相关因素的影响。方法筛选择期行单侧乳腺癌改良根治术的患者40例,ASA分级I、Ⅱ级,采用随机数字表法将患者分为两组:全身麻醉复合胸横肌平面-胸部神经阻滞组(TP组)和单纯全身麻醉组(GA组)。每组各20例,术后均采用舒芬太尼行患者自控静脉镇痛。记录术中血流动力学监测指标变化及丙泊酚及瑞芬太尼总消耗量;取入室、术毕、术后24 h、术后48 h各时间点的血样,测定T淋巴细胞亚群数量和肿瘤坏死因子a、血管内皮生长因子C浓度。记录围术期不良事件。结果与GA组相比,TP组切皮时刻血流动力学更稳定,术中的丙泊酚及瑞芬太尼总消耗量均显著减少(P0.05)。术前两组患者TNF-a及VEGF-C浓度的比较均无统计学差异(P>0.05)。术毕时刻,TP组的TNF-a浓度与GA组相比显著降低(P0.05);与GA组相比,TP组术毕、术后24h的VEGF-C浓度显著降低(P<0.05)。两组患者均未出现血肿、气胸等并发症。结论胸横肌平面-胸部神经阻滞复合全麻可减轻乳腺癌改良根治术患者的围术期炎性应激反应,调节免疫应答,同时降低促肿瘤生长及转移因子的表达,有益于术后康复转归。

关键词：胸横肌平面-胸部神经阻滞乳腺癌炎性应激免疫调节肿瘤转归

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物联网平台安全体系设计

工业信息安全 2022年第5期 17-23页

作者：李冰李陆张瑞张丛旭胡星蒯亮国家信息技术安全研究中心北京100085 中国电子信息产业集团有限公司第六研究所北京100083

随着物联网技术不断完善与发展,物联网规模越来越壮大,物联网连接设备数量也急剧增加。物联网设备由于缺乏充分安全考虑,日益成为攻击者利用的工具,物联网设备安全成为影响物联网信息安全的重要因素。为满足物联网设备接入的安全需求,... 详细信息

随着物联网技术不断完善与发展,物联网规模越来越壮大,物联网连接设备数量也急剧增加。物联网设备由于缺乏充分安全考虑,日益成为攻击者利用的工具,物联网设备安全成为影响物联网信息安全的重要因素。为满足物联网设备接入的安全需求,本文对物联网平台安全因素进行了研究,按照等级保护制度要求,从原有接入技术加入安全考虑着手,对相关的关键技术进行研究,提出了一种物联网平台安全体系结构设计,为物联网的安全发展提供支撑。

关键词：物联网物联网设备安全体系结构设备接入接入安全