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朊病毒“类PCR”高灵敏度检测方法的研究进展

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中国生物制品学杂志 2012年第5期25卷 646-648页

作者：李莎万家余李忠义吉林大学畜牧兽医学院长春130062 军事医学科学院军事兽医研究所长春130122 吉林省人兽共患病预防与控制重点实验室长春130062

朊病毒是传染性海绵状脑病的感染因子,主要由错误折叠的朊蛋白(PrPS)c组成。朊病毒的复制就是在痕量PrPSc的催化下,正常朊蛋白(PrPC)向其错误折叠形式的转化。本文介绍的是朊病毒的新型检测方法,即蛋白质错误折叠循环扩增技术(类"PCR"... 详细信息

朊病毒是传染性海绵状脑病的感染因子,主要由错误折叠的朊蛋白(PrPS)c组成。朊病毒的复制就是在痕量PrPSc的催化下,正常朊蛋白(PrPC)向其错误折叠形式的转化。本文介绍的是朊病毒的新型检测方法,即蛋白质错误折叠循环扩增技术(类"PCR"高灵敏度检测方法),这种技术的概念是根据朊病毒的复制原理形成的,其方法类似于DNA通过PCR扩增的方法。本文针对朊病毒"类PCR"高灵敏度检测方法中几个具有代表性意义的技术作一综述。

关键词：朊病毒传染性海绵状脑病检测蛋白质错误折叠循环扩增

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日粮多不饱和脂肪酸对动物产品脂肪酸的影响

饲料工业 2001年第7期22卷 22-24页

作者：万家余高宏伟军需大学动物营养教研室吉林长春130062

近年来,对ω-6和ω-3多不饱和脂肪酸的生理作用和营养功能的研究十分活跃.据报道,摄入ω-3多不饱和脂肪酸(ω-3PUFA)可降低血浆三酰甘油和胆固醇水平,改善类二十烷的生成量和组成,改变细胞膜脂质的脂肪酸组成,从而达到抑制动脉粥样硬化... 详细信息

近年来,对ω-6和ω-3多不饱和脂肪酸的生理作用和营养功能的研究十分活跃.据报道,摄入ω-3多不饱和脂肪酸(ω-3PUFA)可降低血浆三酰甘油和胆固醇水平,改善类二十烷的生成量和组成,改变细胞膜脂质的脂肪酸组成,从而达到抑制动脉粥样硬化,抑制炎症,抗血栓形成,抑制肿瘤等效果.

关键词：动物产品脂肪酸日粮多不饱和脂肪酸分类来源

纳米花结合G-四链体对大肠杆菌的可视化检测方法的建立

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中国兽医学报 2020年第2期40卷 318-323页

作者：贾静沈明浩万家余吉林农业大学食品科学与工程学院吉林长春130200 军事医学研究院军事兽医研究所吉林长春130122

为建立一种新型、快速、可视化的病原菌检测方法,使用刀豆蛋白(ConA)-磷酸铜纳米花结合G-四链体对大肠杆菌(Escherichia coli,E.coli)进行可视化检测,通过纳米花中包含的铜离子(Cu2+)催化水解溶液中叠氮和G-四链体片段之间的点击化学反... 详细信息

为建立一种新型、快速、可视化的病原菌检测方法,使用刀豆蛋白(ConA)-磷酸铜纳米花结合G-四链体对大肠杆菌(Escherichia coli,E.coli)进行可视化检测,通过纳米花中包含的铜离子(Cu2+)催化水解溶液中叠氮和G-四链体片段之间的点击化学反应,最终形成完整G-四链体结构,简化传统检测方法中的固定及洗涤等步骤。在血红素(hemin)的作用下,激活DNAzyme,使其具有类似辣根过氧化物酶(HRP)的活性;利用四氮甲基联苯胺(TMB)作为底物产生肉眼可视的颜色变化,根据其颜色深浅可对靶标细菌的含量进行定性及定量的分析。结果表明,经过各种条件优化试验及灵敏性、特异性试验得出该病原菌纳米花结合G-四链体可视化检测方法稳定、快速、灵敏,且可以应用于多种病原的检测。

关键词：纳米花 G-四链体点击化学 E.coli O157∶H7

PTD-NPY融合基因的克隆及其在毕赤酵母中的分泌表达

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生物工程学报 2008年第9期24卷 1620-1624页

作者：孙玉成周凤秋万家余高宏伟军事医学科学院军事兽医研究所长春130062

应用重叠延伸PCR方法扩增HIV-1TAT蛋白转导结构域(PTD)与鼠源神经肽Y(NPY)的融合基因,克隆目的片段并插入酵母表达载体pPICZαA,构建成重组表达质粒pPICZα-PTD-NPY。PCR和酶切鉴定及测序正确后,经限制性内切酶SacI线性化重组表达质粒... 详细信息

应用重叠延伸PCR方法扩增HIV-1TAT蛋白转导结构域(PTD)与鼠源神经肽Y(NPY)的融合基因,克隆目的片段并插入酵母表达载体pPICZαA,构建成重组表达质粒pPICZα-PTD-NPY。PCR和酶切鉴定及测序正确后,经限制性内切酶SacI线性化重组表达质粒并通过电转化整合到巴斯德毕赤酵母菌GS115的染色体基因组中。阳性重组酵母菌用含1%甲醇的培养基诱导其分泌表达。经过120h的诱导,取上清浓缩除盐后进行SDS-PAGE电泳,表明该系统成功表达了PTD-NPY融合蛋白,Western blotting实验证实表达产物具有特异性。获得真核表达的PTD-NPY融合蛋白,为下一步的应用研究提供了物质基础。

关键词：蛋白转导神经肽Y(NPY) 融合基因克隆分泌表达

基于杂化纳米花、试纸条的大肠杆菌检测方法的建立及评价

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黑龙江八一农垦大学学报 2022年第3期34卷 90-96,122页

作者：马丽卜胜君张文广万家余陈志宝黑龙江八一农垦大学生命科学技术学院大庆163319 军事科学院军事医学研究院军事兽医研究所广东海洋大学滨海农业学院

建立一种的对病原菌大肠杆菌O157的比色生物传感器检测方法。特异性识别大肠杆菌O157抗体的磁珠作为识别及富集元件,功能性葡萄糖氧化酶纳米花作为信号输出方式,形成“抗体-靶标-纳米花”三明治夹心结构,通过可视化过氧化氢试纸条进行... 详细信息

建立一种的对病原菌大肠杆菌O157的比色生物传感器检测方法。特异性识别大肠杆菌O157抗体的磁珠作为识别及富集元件,功能性葡萄糖氧化酶纳米花作为信号输出方式,形成“抗体-靶标-纳米花”三明治夹心结构,通过可视化过氧化氢试纸条进行定量定性分析。在10~106 CFU·mL^(-1)检测大肠杆菌O157具有良好的线性关系,最低检测限(LOD)为10 CFU·mL^(-1),实际样品回收率可达93%~102%,符合国家食品理化检测的检测方法确认的技术要求中的加标检测回收率范围,且具有良好特异性。成功建立了一种定性定量的可视化比色传感器用于病原菌大肠杆菌O157的检测,灵敏度可达10 CFU·mL^(-1),与传统病原菌的检测方法相比,具有可视化、操作简便、灵敏性高的优点。

关键词：大肠杆菌O157 纳米花传感器快速检测可视化

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5种中草药对肉仔鸡血液生化指标的影响

畜牧与兽医 2003年第11期35卷 8-10页

作者：万家余高宏伟王玉平段明军需大学军事兽医系吉林长春130062

选用 2 1 6只 1日龄AA鸡 ,随机分为 6组 ,每处理 3个重复 ,每重复 1 2只。试验期为 8周 ,基础日粮为玉米豆粕型。对照组采食基础日粮 ;试验组日粮分别为基础日粮添加 1 %陈皮、 1 %山楂、 1 %决明子、 1 %绞股蓝和 50mg/kg大蒜素。观... 详细信息

选用 2 1 6只 1日龄AA鸡 ,随机分为 6组 ,每处理 3个重复 ,每重复 1 2只。试验期为 8周 ,基础日粮为玉米豆粕型。对照组采食基础日粮 ;试验组日粮分别为基础日粮添加 1 %陈皮、 1 %山楂、 1 %决明子、 1 %绞股蓝和 50mg/kg大蒜素。观察 3期 (0～ 3、 3～ 6、 6～ 8周龄 )的血液生化指标。结果表明 :山楂、决明子和大蒜素对降低血清总胆固醇、甘油三酯、极低密度脂蛋白和低密度脂蛋白 (TC、TG、VLDL和LDL)及升高血液高密度脂蛋白 (HDL)作用显著 (P 0 0 5)。 5种中草药均有降低血糖和尿素氮及升高血清总蛋白的趋势。

关键词：中草药肉仔鸡血液生化指标饲料添加剂血清胆固醇甘油三酯极低密度脂蛋白高密度脂蛋白血糖尿素氮

朊蛋白(prp105-125缺失)酵母双杂交诱饵载体的构建和鉴定

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安徽农业科学 2009年第17期37卷 7909-7911页

作者：郝镯万家余沈景林徐静高宏伟吉林大学畜牧兽医学院吉林长春130062 军事医学科学院军事兽医研究所北京100850

对小鼠朊蛋白(prp105-125缺失)的基因片段进行扩增,并将扩增片段导入诱饵载体pSos中构建酵母双杂交诱饵载体pSos-prp朊蛋白(prp105-125缺失),用重组质粒转化感受态酵母菌cdc25H,检验其表达产物在酵母细胞中有无毒性及自激活作用。序列... 详细信息

对小鼠朊蛋白(prp105-125缺失)的基因片段进行扩增,并将扩增片段导入诱饵载体pSos中构建酵母双杂交诱饵载体pSos-prp朊蛋白(prp105-125缺失),用重组质粒转化感受态酵母菌cdc25H,检验其表达产物在酵母细胞中有无毒性及自激活作用。序列分析结果表明,该试验成功构建了小鼠朊蛋白(prp105-125缺失)酵母双杂交诱饵载体,且该诱饵质粒的表达产物对酵母菌cdc25H既无毒性也无自激活作用。

关键词：朊蛋白酵母双杂交系统诱饵载体自激活

接种不同毒力马立克氏病毒对鸡端粒酶活性和致病性的影响

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河南农业科学 2006年第9期35卷 111-114页

作者：韩烨张玉静万家余张蕾天津大学农业与生物工程学院天津300072 吉林大学畜牧兽医学院吉林长春130062

以MDV京-1株和GA株诱发的MD为肿瘤模型,跟踪测定了鸡生长过程中脾脏组织的端粒酶活性变化。结果表明,端粒酶活性在没有临床症状和可视病变出现之前便可检测到。随着MDV感染日龄的增加逐渐升高,在其相对活力达到最高值后,总体水平略有下... 详细信息

以MDV京-1株和GA株诱发的MD为肿瘤模型,跟踪测定了鸡生长过程中脾脏组织的端粒酶活性变化。结果表明,端粒酶活性在没有临床症状和可视病变出现之前便可检测到。随着MDV感染日龄的增加逐渐升高,在其相对活力达到最高值后,总体水平略有下降,但依然存在端粒酶活性;而疫苗株CVI988接种后,整个生长过程其端粒酶均呈阴性。发生MD病变的鸡生长迟缓,中枢性免疫器官胸腺和法式囊严重萎缩,并出现体内肿瘤。无论是病变程度,还是死亡个数和时间,京-1株的致病性均高于GA株。

关键词：马立克氏病毒端粒酶致病性鸡

HAV表位抗原与HBV核心抗原融合基因的原核表达

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吉林农业大学学报 2005年第4期27卷 461-463页

作者：张蕾张玉静万家余韩烨吉林大学农学部畜牧兽医学院长春130062

为探讨甲肝DNA疫苗的可行性,利用DNA重组技术将甲肝病毒(HAV)复合多表位抗原基因VPX插入到乙肝病毒核心抗原(HBcAg)基因中,得到CVPX融合基因。将CVPX克隆到原核表达载体pET-28a(+)中,并在大肠杆菌中进行表达,表达的蛋白进行Western Blot... 详细信息

为探讨甲肝DNA疫苗的可行性,利用DNA重组技术将甲肝病毒(HAV)复合多表位抗原基因VPX插入到乙肝病毒核心抗原(HBcAg)基因中,得到CVPX融合基因。将CVPX克隆到原核表达载体pET-28a(+)中,并在大肠杆菌中进行表达,表达的蛋白进行Western Blot及ELISA检测,结果表明:融合蛋白具有甲肝病毒表位抗原的反应原性。

关键词： HAV表位抗原 HBV核心抗原 E.coli表达