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作者：丁庆莉第二军医大学

学位级别：硕士

Mosmann等人早在20年前即提出:接受抗原刺激后,初始CD4T辅助细胞(Th)细胞可分化为Th1和Th2两个细胞亚群,Th1主要分泌IL-2、IL-3、IFN-γ,与调控体内细胞免疫息息相关;Th2主要分泌IL-4、IL-5、IL-13等细胞因子,促进B细胞活化与类型转换,... 详细信息

Mosmann等人早在20年前即提出:接受抗原刺激后,初始CD4T辅助细胞(Th)细胞可分化为Th1和Th2两个细胞亚群,Th1主要分泌IL-2、IL-3、IFN-γ,与调控体内细胞免疫息息相关;Th2主要分泌IL-4、IL-5、IL-13等细胞因子,促进B细胞活化与类型转换,从而调控机体体液免疫。由IL-12P35和IL-12P40两个亚单位构成的细胞因子IL-12,可通过活化STAT4,刺激下游转录调节子T-bet的表达,从而促进Th1细胞的分化;相反,IL-4可通过活化STAT6,刺激GATA-3的表达而促进Th2细胞的分化。近来,一群新的Th细胞亚群—Th17细胞的发现,促使人们对许多疾病的认识有了新的看法。Th17细胞是一类不同于Th1、Th2而独立存在的CD4T细胞亚群,主要分泌IL-17A、IL-17F、IL-6、TNF-α及GM-CSF,不分泌IL-4、IFN-γ。TGF-β、IL-6、IL-1β和TNF-α可促进Th17细胞的分化;IL-23则在Th17细胞的增殖和存活,以及招募Th17细胞向炎症部位聚集中具有重要作用。影响Th17细胞分化的关键性转录因子为孤儿核受体RORγt,而GATA3、T-bet、Smad7在控制其转录过程中均无作用。目前研究认为,Th17细胞分泌产生的主要效应因子IL-17可刺激IL-8、单核细胞趋化蛋白(MCP)-1和生长调节因子(Gro)-α等趋化因子的产生,招募中性粒细胞和单核细胞到达炎症部位;亦能通过刺激IL-6、一氧化氮(NO)、前列腺素(PGE)2以及其他促炎因子IL-1β、TNF-α、IFN-γ和CD40L的表达,从而扩大和加重局部炎症反应。IL-17还可作为机体天然免疫与获得性免疫反应的桥梁,促进T和B细胞的活化增殖,在机体的炎症反应、自身免疫损伤等具有重要的调节作用。慢性乙型肝炎(Chronic Hepatitis B,CHB)在中国是发病率很高的疾病,全国现有1.3亿乙型肝炎病毒(Hepatitis B virus,HBV)携带者,3000万乙型肝炎患者。HBV在机体持续性感染以致CHB发生的病理机制尚未完全阐明。HBV是一种非细胞毒性病毒,当其进入机体后常可引起一系列复杂的免疫反应,而机体产生的免疫应答的强弱又与HBV感染所致的不同临床结果密切相关。在这一系列免疫应答中,细胞免疫应答又是决定HBV感染机体后转归的最重要因素,不同的T细胞亚群对病毒抗原的反应状态也不同,即对临床过程的轻重及转归的影响不同。目前很多研究认为Th1/Th2细胞失衡可能是HBV感染慢性化的机制之一;那些最终从急性HBV感染恢复的人表现为Th1型反应,而慢性HBV感染者则以Th2型反应占优势。然而,新发现的Th17细胞亚群是否参与CHB疾病的病理过程,与肝脏炎性损伤是否存在内在关系目前均未见文献报道。本研究采集我院感染性疾病科93例CHB患者(其中CHB患者轻度21例,中度37例,重度35例)及28例健康体检者外周血各7ml,通过检测不同疾病程度CHB患者组与正常对照组外周血中CD4T细胞IL-17的表达,及与Th17细胞分化相关的细胞因子的表达情况,并分析其表达与肝脏损伤标志物的关系,从而进一步探讨Th17细胞与CHB患者肝脏病理损伤所可能存在的关系。首先,我们主要采用三种研究方法对疾病组和健康对照组外周血Th17细胞/IL-17的表达水平进行检测。采用的检测方法主要包括流式细胞术(FACS)、荧光实时定量聚合酶链反应(Real time PCR)和酶联免疫吸附分析(ELISA)。 1、流式细胞术检测各组外周血Th17细胞的表达。我们取各组EDTA抗凝全血100μl,用100μl含10%小牛血清1640培养基稀释后,同时加入50ng/ml PMA、1μg/mlIonomycin和1μl/ml Golgi plug,37度5%CO孵箱刺激培养5h后标记抗人CD4流式抗体,随后按照BD公司流式穿膜试剂盒操作步骤对细胞内细胞因子IL-17、IFN-γ染色,并进行流式细胞仪检测。结果提示:与正常对照组相比,中重度CHB患者组外周血CD4IFN-γIL-17T细胞(Th17细胞)比例均明显升高(P＜0.05),而中度与轻度组、轻度与正常对照组间差异不明显;各组之间CD4IFN-γIL-17T细胞(Th1细胞)比例无明显区别。重度CHB患者CD4IFN-γIL-17T细胞比例虽高于正常对照,但差异统计学上无显著意义。 2、Real time PCR方法检测各组外周血CD4T细胞内IL-17及Th17细胞分化重要转录因子RORγt的mRNA表达水平。我们利用外周血CD4T细胞富集试剂盒和淋巴细胞分离液分离出各组外周血CD4T细胞,在不经任何刺激培养和经抗人CD3抗体及PMA刺激4h的情况下分别

关键词： Th17 IL-17 慢性乙型肝炎(Chronic Hepatitis B,CHB) ALT 肝脏损伤

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可诱导共刺激分子诱导骨髓来源不成熟树突状细胞特异性分泌IL-6

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中国免疫学杂志 2011年第3期27卷 220-227页

作者：唐古生吴君丁庆莉沈茜第二军医大学附属长海医院实验诊断科上海200433

目的:分析可诱导共刺激分子(ICOS)可溶性融合蛋白(ICOSIg)能否向不成熟DCs传递逆向信号及其性质。方法:以流式细胞仪结合特异性抗体检测DCs表型分子改变;以ELISA检测培养上清细胞因子变化;以RT-PCR检测各组DCs细胞内细胞因子及受体、趋... 详细信息

目的:分析可诱导共刺激分子(ICOS)可溶性融合蛋白(ICOSIg)能否向不成熟DCs传递逆向信号及其性质。方法:以流式细胞仪结合特异性抗体检测DCs表型分子改变;以ELISA检测培养上清细胞因子变化;以RT-PCR检测各组DCs细胞内细胞因子及受体、趋化因子等mRNA表达水平。结果:ICOSIg或膜锚定ICOS作用于不成熟DCs,均可诱导其高表达MHC-Ⅱ、CD80、CD86和CD83等表型分子;促进DCs特异性分泌IL-6。结论:ICOS作用于不成熟DCs表面的ICOSL可以向DCs细胞传递逆向信号,诱导DCs细胞高分泌IL-6,同时其表面重要的表型分子也上调,可能参与了DCs细胞免疫功能的调节,其信号转导机制可能涉及p38-MAPK通路。

关键词：可诱导共刺激分子不成熟树突状细胞逆向信号 IL-6

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3种抗凝血剂对化学发光法定量检测乙肝标志物结果的影响

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现代预防医学 2013年第2期40卷 336-337页

作者：丁庆莉韩娟王海刚任传路解放军第100医院检验病理科

目的探讨肝素、EDTA-K2、枸橼酸钠抗凝血浆标本用于化学发光法定量检测乙肝标志物的可行性。方法采用博阳生物科技LICA系列光激化学发光免疫测定系统,分别对81例体检人员3种不同类型抗凝血浆和血清标本行乙肝标志物5项定量检测。结果肝... 详细信息

目的探讨肝素、EDTA-K2、枸橼酸钠抗凝血浆标本用于化学发光法定量检测乙肝标志物的可行性。方法采用博阳生物科技LICA系列光激化学发光免疫测定系统,分别对81例体检人员3种不同类型抗凝血浆和血清标本行乙肝标志物5项定量检测。结果肝素抗凝血浆的HBsAg、HBsAb定量检测结果均高于血清标本检测结果 ,差异有统计学意义(P﹤0.05)。EDTA-K2、枸橼酸钠抗凝血浆的HBsAg定量检测结果均高于血清标本检测结果 ,差异有统计学意义(P﹤0.05)。在其余检测项目上差异无统计学意义(P﹥0.05)。按照阴阳性判断标准,3种抗凝血浆的HBsAg阳性率均高于血清标本,本文中肝素抗凝血浆HBsAg阳性率差异有统计学意义(P﹤0.05),其余未检测到显著差异(P﹥0.05)。结论乙肝检测中,HBsAg的检测是重点,若运用抗凝血浆检测时,当其出现S/CO值在1～10之间的阳性结果 ,应当想到很有可能是抗凝血浆导致的假阳性结果。因此在乙肝标志物检测中,对于抗凝血浆的运用,一定要慎重。

关键词：抗凝血化学发光法乙肝标志物乙肝两对半

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稳定表达可诱导共刺激分子CHO细胞株的筛选及其生物学活性鉴定

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第二军医大学学报 2008年第3期29卷 254-258页

作者：丁庆莉刘梦蕾龙宪连沈茜第二军医大学长海医院实验诊断科上海200433

目的:构建携带人可诱导共刺激分子(inducible costimulator molecule,ICOS)基因的重组逆转录病毒载体,筛选稳定表达ICOS蛋白的CHO细胞株,并对其生物学活性进行鉴定。方法:RT-PCR法从人PBMC中获取ICOScDNA,定向克隆到逆转录病毒载体上,... 详细信息

目的:构建携带人可诱导共刺激分子(inducible costimulator molecule,ICOS)基因的重组逆转录病毒载体,筛选稳定表达ICOS蛋白的CHO细胞株,并对其生物学活性进行鉴定。方法:RT-PCR法从人PBMC中获取ICOScDNA,定向克隆到逆转录病毒载体上,制备逆转录病毒重组体pMSCV-ICOS;经病毒包装细胞包装后抗性筛选出产高滴度病毒的细胞株,用高滴度病毒上清感染CHO细胞,抗性筛选出稳定表达细胞株。将CHO-ICOS细胞和PBMC以不同比例(1:1、1:2、1:5、1:10)共培养,加入亚刺激剂量(200ng/ml)的抗人CD3抗体,采用3H-TdR掺入法检测PBMC的增殖,流式细胞仪检测T细胞表面活化分子CD25表达情况,并以CHO-pMSCV细胞和PBMC以1:1比例共培养作为阴性对照以及未处理的PBMC作为空白对照。结果:成功构建逆转录病毒重组体pMSCV-ICOS,筛选出稳定表达ICOS蛋白的CHO细胞株。3H-TdR掺入法和流式细胞仪检测结果表明,与阴性对照及空白对照相比,CHO-ICOS细胞与PBMC共培养能抑制CD3抗体诱导的PBMC增殖及活化(P<0.05或P<0.01),细胞比例为1:1时抑制率最大,分别为(68±5.9)%、(44.08±3.26)%。结论:成功建立具有生物学活性的膜稳定表达人ICOS蛋白的CHO细胞株,为今后研究奠定了基础。

关键词：可诱导共刺激分子重组逆转录病毒载体转染

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医保基金监管中临床药物使用的常见违法违规问题

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世界临床药物 2024年第3期45卷 341-344页

作者：丁庆莉龚波上海市医疗保障局监督检查所上海200040

通过国谈创新药准入和药品目录更新,越来越多有效的治疗药物被纳入医保基金支付,在满足参保患者用药需求的同时减轻医疗费用负担,但在监管中发现药物临床使用中滋生一些医保违法违规行为。同时,随着药品集采、“双通道”药品、医保支付... 详细信息

通过国谈创新药准入和药品目录更新,越来越多有效的治疗药物被纳入医保基金支付,在满足参保患者用药需求的同时减轻医疗费用负担,但在监管中发现药物临床使用中滋生一些医保违法违规行为。同时,随着药品集采、“双通道”药品、医保支付方式改革等新政策的落地,以及“互联网+医疗”等医疗新业态的发展,监管中也发现一些新问题。现结合医保监管典型案例,对临床药物使用的常见违法违规问题作一综述。

关键词：医保监管临床用药违法违规典型案例

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便携式血糖仪质量管理检测分析

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国际检验医学杂志 2016年第9期37卷 1285-1286页

作者：黄寨荣丁庆莉江苏省苏州市吴江区第五人民医院检验科江苏苏州215211 中国人民解放军一○○医院检验病理科江苏苏州215007

目的对苏州市吴江区第五人民医院便携式血糖仪的临床使用进行质量检测和管理,规范血糖仪的质量管理体系。方法对便携式血糖仪进行品牌内一致性评价、稳定性评价及正确性验证。科室检测人员参加全院的培训学习,参加苏州市检验中心室间质... 详细信息

目的对苏州市吴江区第五人民医院便携式血糖仪的临床使用进行质量检测和管理,规范血糖仪的质量管理体系。方法对便携式血糖仪进行品牌内一致性评价、稳定性评价及正确性验证。科室检测人员参加全院的培训学习,参加苏州市检验中心室间质量评价,与未参加室间质量评价的科室仪器比对验证正确度。结果 3家参加品牌内一致性评价的便携式血糖仪,检测结果一致性较高。对选择的1家公司提供的10台便携式血糖仪进行检测后稳定性评价合格,与生化仪比对结果后验证合格。参加苏州市检验中心便携式血糖仪室间质量评价3年,结果均合格,以此为标准比对在用其他血糖仪时除一台不合格遭淘汰其余均合格。结论经过几年的各项严格管理,各科室间的便携式血糖仪检测结果具有了可比性,管理质量有了显著提高,收效明显。

关键词：便携式血糖仪生化仪质量管理比对

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巨噬细胞抑制因子-1、恶性肿瘤生长因子与CA19-9联合检测对胰腺癌的临床诊断价值

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检验医学与临床 2015年第2期12卷 215-216页

作者：陶光丽任传路丁庆莉江苏省昆山市花桥人民医院检验科 215332 解放军100医院检验病理科苏州215007

目的通过检测巨噬细胞抑制因子-1(MIC-1)和CA19-9在胰腺癌患者血清中的表达水平,并结合经典标志物CA19-9的联合检测结果,评价其在疾病中的临床诊断价值。方法收集86例胰腺癌患者和90例健康体检者血清,速率法检测恶性肿瘤生长因子(TSGF)... 详细信息

目的通过检测巨噬细胞抑制因子-1(MIC-1)和CA19-9在胰腺癌患者血清中的表达水平,并结合经典标志物CA19-9的联合检测结果,评价其在疾病中的临床诊断价值。方法收集86例胰腺癌患者和90例健康体检者血清,速率法检测恶性肿瘤生长因子(TSGF),化学发光法检测CA19-9,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测MIC-1表达水平。结果胰腺癌患者血清中,3项肿瘤标志物检测结果均较健康对照组明显上升。单一标志物检测时,MIC-1的敏感性明显高于CA19-9,差异有统计学意义(P0.05)。当将3项指标进行联合检测时,较单独检测CA19-9,联合检测对胰腺癌诊断的敏感性及准确性均得到提高,差异有统计学意义(P0.05)。结论 MIC-1与CA19-9联合检测可以提高CA19-9诊断胰腺癌的敏感性,提高MIC-1诊断的特异性;而将MIC-1、TSGF、CA19-9联合检测时,则不仅提高了CA19-9诊断的敏感性,还提高了其诊断胰腺癌的准确性。因此,将此3项肿瘤标志物联合检测可有效提高胰腺癌的诊断效率。

关键词：胰腺癌巨噬细胞抑制因子-1 恶性肿瘤生长因子 CA19-9

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检测时间对速率法检测恶性肿瘤特异性生长因子结果的影响

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国际检验医学杂志 2013年第22期34卷 3001-3002页

作者：文静任传路丁庆莉淀山湖人民医院检验科江苏昆山215345 中国人民解放军第一〇〇医院检验科江苏苏州215007

目的探讨采血后不同检测时间对采用速率法检测恶性肿瘤特异性生长因子(TSGF)结果的影响。方法采用比色法和速率法分别对85例恶性肿瘤患者和90例健康者于外周血血清分离4h内、12h、24h、48h、72h分别进行TSGF检测,同时采用速率法对-20℃... 详细信息

目的探讨采血后不同检测时间对采用速率法检测恶性肿瘤特异性生长因子(TSGF)结果的影响。方法采用比色法和速率法分别对85例恶性肿瘤患者和90例健康者于外周血血清分离4h内、12h、24h、48h、72h分别进行TSGF检测,同时采用速率法对-20℃保存状态下2组血清不同时间复融后TSGF进行检测。结果分离外周血血清4h内,恶性肿瘤组和健康对照组相比,TSGF明显升高(P0.05)。4℃保存状态下,随着时间的推移,TSGF值呈现明显的下降趋势,尤其在24h后采用速率法检测,其值与4h内检测差异显著(P0.05)。结论采用全自动生化仪速率法检测TSGF时,标本应尽量在分离血清后4h内完成检测,或置于-20℃冰箱冷冻保存,否则可能会出现TSGF检测值显著下降而偏离真实结果的情况。

关键词：速率法生化仪恶性肿瘤特异性生长因子检测时间

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TuM2-PK、CK18-3A9联合CYFRA21-1在非小细胞肺癌诊断中的应用价值

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国际检验医学杂志 2014年第19期35卷 2634-2635页

作者：陶光丽任传路丁庆莉昆山市花桥人民医院检验科江苏昆山215332 中国人民解放军第一〇〇医院检验病理科江苏苏州215007

目的通过检测肿瘤型M2丙酮酸激酶(TuM2-PK)、细胞角蛋白18(CK18)-3A9和细胞角蛋白19片段(CYFRA21-1)在非小细胞肺癌(NSCLC)患者血清中的表达水平,评价其在NSCLC中的诊断价值。方法收集67例NSCLC患者(NSCLC组),72例肺部良性疾病患者(良性... 详细信息

目的通过检测肿瘤型M2丙酮酸激酶(TuM2-PK)、细胞角蛋白18(CK18)-3A9和细胞角蛋白19片段(CYFRA21-1)在非小细胞肺癌(NSCLC)患者血清中的表达水平,评价其在NSCLC中的诊断价值。方法收集67例NSCLC患者(NSCLC组),72例肺部良性疾病患者(良性组)和75健康体检者(对照组)的血清,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测TuM2-PK和CK18-3A9水平,采用电化学发光法检测CYFRA21-1水平。结果与对照组及良性组比较,NSCLC组TuM2-PK、CK18-3A9和CYFRA21-1水平明显升高(P<0.05)。单一指标检测时,TuM2-PK、CK18-3A9的敏感性明显高于CYFRA21-1(P<0.05),CYFRA21-1的特异性明显高于TuM2-PK、CK18-3A9(P<0.01)。3项指标联合检测,其敏感性和准确性均高于单独检测CYFRA21-1(P<0.05);3项指标联合检测,其敏感性、特异性和准确性均高于单独检测TuM2-PK和CK18-3A9(P<0.05)。结论 TuM2-PK、CK18-3A9和CYFRA21-1联合检测可有效提高NSCLC诊断的敏感性和准确性。

关键词：肿瘤型M 2丙酮酸激酶细胞角蛋白18 细胞角蛋白19片段联合检测非小细胞肺癌 cytokeratin-18

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联合检测血清HE4、SMRP、CEA与CA125在卵巢癌诊断中的应用价值研究

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检验医学与临床 2016年第8期13卷 1068-1070页

作者：石榴花任传路丁磊丁庆莉江苏省苏州市吴中区越溪卫生院检验科 215104 中国人民解放军第一OO医院检验病理科江苏苏州215007

目的检测卵巢癌患者血清人附睾蛋白4(HE4)、可溶性间皮素相关蛋白(SMRP)、癌胚抗原(CEA)、糖类抗原125(CA125)的表达水平,并对四项标志物单独和联合检测结果进行统计比较,探讨它们在卵巢癌诊断中的临床应用价值。方法收集65例卵巢癌患者... 详细信息

目的检测卵巢癌患者血清人附睾蛋白4(HE4)、可溶性间皮素相关蛋白(SMRP)、癌胚抗原(CEA)、糖类抗原125(CA125)的表达水平,并对四项标志物单独和联合检测结果进行统计比较,探讨它们在卵巢癌诊断中的临床应用价值。方法收集65例卵巢癌患者和70例健康体检者空腹静脉血清,ELISA法检测HE4、SMRP,化学发光法检测CEA、CA125。结果与健康对照组相比,卵巢癌组血清HE4、SMRP、CEA、CA125表达水平均较高,差异有统计学意义(P0.05),其中HE4和CA125诊断准确度高于其他指标。CA125与HE4组合联检时,敏感度提高,差异具有统计学意义(P0.05);同时准确度得到了提高,高达80.74%;CA125、HE4、SMRP、CEA联合检测各项诊断效率指标变化均无统计学意义(P>0.05)。结论联合检测CA125、HE4以及SMRP能有效提高单独检测时卵巢癌的诊断效率指标,临床工作中将HE4、CA125、SMRP这几项标志物进行联合检测有助于卵巢癌的筛查和早期诊断。

关键词：卵巢癌糖类抗原125 人附睾蛋白4 可溶性间皮素相关蛋白癌胚抗原

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