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氧化苦参碱对Con A诱导小鼠肝损伤的保护作用及机制初探

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氧化苦参碱对Con A诱导小鼠肝损伤的保护作用及机制初探

作者：韩延忠承德医学院

学位级别：硕士

乙型病毒性肝炎(乙肝)是由乙型肝炎病毒(HBV)感染引起的疾病,在我国广泛流行,随着科学家对乙肝致病机制的深入研究,人们逐渐认识到乙肝相关肝损伤与宿主免疫应答密切相关。山豆根是豆科植物越南槐Sophora tonkinensis Gapnep.的干燥根... 详细信息

乙型病毒性肝炎(乙肝)是由乙型肝炎病毒(HBV)感染引起的疾病,在我国广泛流行,随着科学家对乙肝致病机制的深入研究,人们逐渐认识到乙肝相关肝损伤与宿主免疫应答密切相关。山豆根是豆科植物越南槐Sophora tonkinensis Gapnep.的干燥根及根茎,是临床上治疗慢性乙肝的常用中药之一。前期研究表明,山豆根中主要化学成分氧化苦参碱(oxymatrine OMT)具有调节免疫、保肝降酶的作用,但是目前国内外对其保肝机制的研究还较少。为此本课题采用刀豆蛋白(Concanavalin A Con A)模型模拟乙肝相关免疫性肝损伤,从免疫调控和抗氧化应激两个角度探讨OMT对该模型的保护作用及可能机制,以期为阐释OMT治疗乙肝的机制提供前期数据支持。第一部分基于免疫调控的氧化苦参碱抑制Con A诱导小鼠肝损伤作用研究目的:从免疫调控角度研究氧化苦参碱(OMT)抑制Con A诱导小鼠肝损伤作用及其机制方法:*** A诱导小鼠急性肝损伤模型的建立:取5-6周龄,18-22g Balb/c小鼠,随机分成空白组,Con A 5 mg·kg-1组,Con A 10 mg·kg-1组,Con A 15 mg·kg-1组,Con A 20 mg·kg-1组,每组6只,空白组尾静脉注射生理盐水,其余组尾静脉注射Con A。8h后,小鼠摘眼球取血,检测血清丙氨酸转氨酶(ALT)活性;取肝组织大叶进行HE染色。***对Con A诱导的小鼠肝损伤的干预作用取5-6周龄,18-22 g Balb/c小鼠,随机分成空白组(A组),Con A15 mg·kg-1组(B组),双环醇(阳性药)156 mg·kg-1治疗组(C组),OMT60 mg·kg-1治疗组组(D组),OMT 120 mg·kg-1治疗组(E组),每组6只,B、C、D、E组分别尾静脉注射15 mg·kg-1的Con A,造急性肝损伤模型,同时d、e组分别腹腔注射检测omt进行干预,c组造模之前半小时灌胃给药,a组给相同剂量的生理盐水,8h后取样检测血清丙氨酸转氨酶(alt)和天门冬氨酸转氨酶(ast)活性以及血清总胆红素(tbil)的水平。取肝组织大叶进行he染色3.采用luminex多因子检测方法检测小鼠体内细胞因子的表达水平,筛选omt可能的免疫调控机制。4.采用流式细胞术检测脾淋巴细胞中th17细胞和treg细胞亚群的比例。结果:***诱导小鼠急性肝损伤模型的建立:结果显示随着cona剂量的增加,alt值逐渐增加,当造模剂量达到15mg·kg-1时,alt值升高到1032.08±85.62u·l-1,肝组织切片he染色显示,cona5mg·kg-1组,肝组织未出现严重的死亡灶,只是在肝窦有明显的充血现象,汇管区有较轻微的炎症细胞浸润;cona10mg·kg-1组,肝窦充血明显,肝组织出现较严重的死亡灶,并且有轻微的炎症细胞浸润;cona15mg·kg-1组,肝窦充血明显,汇管区出现大量的炎症细胞浸润,并且出现片状的肝组织坏死区域;cona20mg·kg-1组,小鼠全部死亡。综上所述,当给予cona的造模剂量达到15mg·kg-1时,小鼠alt值升高明显,肝组织出现明显的片状死亡区域,因此本课题组采用此浓度造模进行后续实验。***对cona诱导的小鼠急性肝损伤的治疗作用:2.1血清生化指标检测:与a相比,b组alt、ast、tbil值均显著升高(p0.05);d组alt和tbil值显著降低(p0.05);e组alt值显著降低(p<0.01),未降低到正常值水平,ast和tbil值均显著降低(p<0.05),未降低到正常值水平。2.2肝组织切片he染色结果:与a相比,b组肝细胞水肿,肝窦充血明显,汇管区出现大量的炎症细胞浸润,并且出现大面积肝组织坏死。与b组相比,c组肝窦充血未减轻,汇管区依然有大量的炎症细胞浸润,但组织坏死症状减轻;d组肝窦充血症状未减轻,汇管区炎症细胞浸润减轻,肝组织小灶样坏死;e组肝窦充血症状减轻,汇管区有少量炎症细胞浸润,肝组织小灶样坏死。***对小鼠血清细胞因子的影响:与a组比,b组血清中白细胞介素17(il-17)的水平显著升高(p<0.01),白细胞介素10(il-10)的水平显著升高(p<0.01);与b组相比,e组血清中il-17的水平显著下降(p<0.01),il-10的水平显著上升(p<0.05)。这说明omt可能对辅助性t细胞17(th17)和调节性t细胞(treg)的分化有影响。***对th17细胞和treg细胞的影响:与a相比,b组中与引起自身免疫

关键词：山豆根氧化苦参碱 Con A 免疫性肝损伤双氧水氧化应激 NADPH

虎杖苷对2型糖尿病小鼠溃疡创面愈合影响的实验研究

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中国临床药理学杂志 2017年第19期33卷 1934-1937页

作者：韩延忠沈娟吴立蓉朱家勇广东药科大学基础学院药用生物活性物质研究所广州510006 广东药科大学中药学院广州510006 广东药科大学生命科学与生物制药学院广州510006

目的研究虎杖苷对2型糖尿病小鼠溃疡创面愈合的作用效果。方法 C57BL/6J雄性小鼠持续喂以高脂饲料4周后,禁食12 h,腹腔注射链脲佐菌素40 mg·kg^(-1)体重,连续注射5 d,1周后,测量随机血糖值高于16.67mmo L·L^(-1)的小鼠为2型糖尿病小... 详细信息

目的研究虎杖苷对2型糖尿病小鼠溃疡创面愈合的作用效果。方法 C57BL/6J雄性小鼠持续喂以高脂饲料4周后,禁食12 h,腹腔注射链脲佐菌素40 mg·kg^(-1)体重,连续注射5 d,1周后,测量随机血糖值高于16.67mmo L·L^(-1)的小鼠为2型糖尿病小鼠。在小鼠背部正中两侧各剪一个0.8 cm的圆形创面深至筋膜,造成小鼠溃疡创面模型。按照血糖值随机将小鼠分为3组:高低2个剂量实验组、对照组,每组15只。造模当天创面局部给药且为实验第1天(实验周期共14 d),实验组分别局部给与400,100μg·m L^(-1)虎杖苷100μL,每天给药一次,连续给药5 d,第6~14天停止给药;对照组给予等量0.9%NaCl。计算实验第3,5,7,10,14天的创面愈合率,统计完全愈合时间,以HE染色观察实验第7,14天时组织形态学变化;以噻唑蓝(MTT)法与划痕实验测定虎杖苷组与磷酸盐缓冲液(PBS)对照组对成纤维细胞增殖趋化效果。以流式细胞仪测定虎杖苷组、白细胞介素-4组、虎杖苷+白细胞介素-4联用组、PBS对照组这4组的原代巨噬细胞极化为M2型巨噬细胞量。结果实验后第14天,高剂量实验组与对照组的创面愈合率分别是(80.72±5.33)%,(95.93±1.01)%,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.001)。创面愈合时间:高剂量实验组与对照组分别为(16.6±1.1),(13.2±0.8)d,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.001)。实验后第14天,实验组的胶原纤维排列紧密整齐已愈合,对照组未愈合。实验组的促成纤维细胞增殖最佳浓度为0.5μg·m L^(-1)。实验第1天,实验组与PBS对照组的迁移率分别是(90.20±3.90)%,(76.8±4.87)%,与PBS对照组比较差异有统计学意义(P<0.01),说明虎杖苷明显具有促成纤维细胞迁移作用。极化为M2型巨噬细胞百分比:实验组与PBS对照组分别是(3.7±0.36)%,(1.97±0.23)%,与PBS对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论虎杖苷具有促进2型糖尿病小鼠溃疡创面愈合的作用。

关键词：虎杖苷 2型糖尿病小鼠溃疡创面创面愈合率迁移率

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对油田档案有效保护的几点浅见

黑龙江史志 2013年第16期 77-77,81页

作者：韩延忠中国石油伊拉克公司

大庆油田档案经历了一个较长时期的形成和积累过程，随着时间的延续，档案保护问题已经提上日程。为最大限度的延长油田档案的寿命，使其更好地为大庆油田长期稳产与繁荣服务，为大庆的子孙后代服务，必须提高对档案的保护意识，认真研... 详细信息

大庆油田档案经历了一个较长时期的形成和积累过程，随着时间的延续，档案保护问题已经提上日程。为最大限度的延长油田档案的寿命，使其更好地为大庆油田长期稳产与繁荣服务，为大庆的子孙后代服务，必须提高对档案的保护意识，认真研究解决当前档案保护方面出现的新情况、新问题，认真研究有效保护档案的方法和手段，不断采用新技术，提高保护水平。

关键词：档案保护大庆油田有效保护保护问题保护意识保护水平新技术服务

木犀草素对对乙酰氨基酚诱导的L02肝细胞损伤的保护作用

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中国中药杂志 2016年第22期41卷 4234-4239页

作者：贺兰芝孟雅坤韩延忠张振芳尹萍桑秀秀肖小河柏兆方湖南中医药大学药学院湖南长沙410208 解放军302医院全军中医药研究所北京100039 江西中医药大学药学院江西南昌330004

探讨木犀草素(luteolin,Lut)对对乙酰氨基酚(acetaminophen,APAP)诱导的L02肝细胞损伤的保护作用。CCK-8法检测Lut对L02细胞活性的影响;筛选APAP诱导L02细胞损伤的浓度及作用时间;细胞形态学、CCK-8实验和流式细胞术检测分析Lut对APAP... 详细信息

探讨木犀草素(luteolin,Lut)对对乙酰氨基酚(acetaminophen,APAP)诱导的L02肝细胞损伤的保护作用。CCK-8法检测Lut对L02细胞活性的影响;筛选APAP诱导L02细胞损伤的浓度及作用时间;细胞形态学、CCK-8实验和流式细胞术检测分析Lut对APAP诱导的L02细胞凋亡的影响;比色法检测细胞上清液中丙二醛(MDA)含量、谷胱甘肽(GSH)及超氧化物歧化酶(SOD)活性;RT-PCR检测凋亡相关基因Bax,Bcl-2,caspase-3的表达。结果显示Lut在2.5~40μmol·L^(-1)不影响L02细胞活性;12 mmol·L-1APAP作用于L02细胞12 h可用于建立肝细胞损伤模型。与模型组相比,Lut组细胞状态明显改善,胞体增大,贴壁能力恢复明显;细胞凋亡率明显下降;MDA含量显著下降(P<0.05或P<0.01),GSH和SOD活性显著提高(P<0.05或P<0.01),同时能够上调Bcl-2及下调Bax,caspase-3 mRNA的表达(P<0.05或P<0.01)。该实验证明了Lut对APAP诱导的L02细胞损伤有保护作用,其机制可能与其减轻氧化应激反应和抑制细胞凋亡有关。

关键词：木犀草素对乙酰氨基酚 L02细胞氧化应激细胞凋亡

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新时期国土空间规划存在的问题与对应措施

建材与装饰 2019年第27期 103-104页

作者：韩延忠张秀山东亿华天土地房地产评估勘测规划有限公司

目前,我国的国土规划在类型是包括很多,其中存在的关系很复杂,整体的规划中都有体系,其中内容上有重叠也没有互相协调等问题,无法适应当前的规划工作,同时和国家的相关标准和规划执行存在很大的差异。为此,就需要针对我国的国土空间规... 详细信息

目前,我国的国土规划在类型是包括很多,其中存在的关系很复杂,整体的规划中都有体系,其中内容上有重叠也没有互相协调等问题,无法适应当前的规划工作,同时和国家的相关标准和规划执行存在很大的差异。为此,就需要针对我国的国土空间规划所存在的问题进行分析,同时提出针对性的措施,给土地实现统一给予支持,让土地利用的总体规划发挥空间的作用,让区域的发展总体战略目标得到推进。

关键词：国土空间规划策略

自身免疫性肝炎、原发性胆汁性胆管炎及其重叠综合征的临床代谢组学表征及区分

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科学通报 2022年第21期67卷 2553-2564页

作者：周明曦程诚韩延忠牛明黄迎何娴刘尧肖小河王伽伯马志涛成都中医药大学药学院成都611137 解放军总医院第五医学中心肝病医学部北京100039 解放军总医院第五医学全军中医药研究所北京100039 首都医科大学中医药学院北京100069

自身免疫性肝炎(autoimmune hepatitis,AIH)、原发性胆汁性胆管炎(primary biliary cholangitis,PBC)及其重叠综合征(overlap syndrome,OS)是临床常见的3种自身免疫性肝病,由于其发病机制的复杂性和混杂性,给临床准确区分诊断带来了挑战... 详细信息

自身免疫性肝炎(autoimmune hepatitis,AIH)、原发性胆汁性胆管炎(primary biliary cholangitis,PBC)及其重叠综合征(overlap syndrome,OS)是临床常见的3种自身免疫性肝病,由于其发病机制的复杂性和混杂性,给临床准确区分诊断带来了挑战.本研究采用非靶向代谢组学方法,尝试对42例AIH、103例PBC和57例AIH-PBC OS患者血清筛选可辅助区分诊断3种肝病的代谢组学特征标志物.结果表明,在与AIH和PBC相关的所有变量中共鉴定出101个特征代谢物,并进一步筛选出富集于胆汁、磷脂和氨基酸代谢途径的29个代谢物,作为对AIH和PBC区分能力最强的指纹性代谢物.从指纹性代谢物中压缩降维得到的特征代谢物向量,显示出良好的区分诊断AIH与PBC的能力,受试者工作特征曲线下面积达到0.797(P<0.0001).基于指纹性代谢物主成分分析的可视化分布图,PBC和AIH样本呈现出3个区域:单纯PBC样本区、单纯AIH样本区和混合区.而将AIH-PBC OS样本放入该模型后发现,AIH-PBC OS样本在上述3个区域均有分布,提示目前诊断标准下的AIH-PBC OS患者实际上具有不同的代谢特征和病因倾向,需要更为精确的区分诊断.基于指纹性代谢物构建的区分诊断模型,可以辅助用于自身免疫性肝病患者的精确诊断和管理.

关键词：自身免疫性肝病代谢组学生物标志物胆汁酸脂质

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两种2型糖尿病小鼠溃疡创面愈合比较

中国比较医学杂志 2017年第8期27卷 6-11,93页

作者：韩延忠王玉芝刘如华沈娟广东药科大学基础学院药用生物活性物质研究所广州510006 广州军区广州总医院广州510006 广东药科大学生命科学与生物制药学院广州510006

目的比较目前常用的基因自发突变2型糖尿病小鼠C57BL/6J-db/db和STZ诱导的C57BL/6J小鼠的溃疡创面愈合特征,为应用稳定的糖尿病小鼠溃疡模型进行相关动物实验研究提供依据。方法建立糖尿病小鼠溃疡模型,统计0、3、5、7、10、14 d小鼠创... 详细信息

目的比较目前常用的基因自发突变2型糖尿病小鼠C57BL/6J-db/db和STZ诱导的C57BL/6J小鼠的溃疡创面愈合特征,为应用稳定的糖尿病小鼠溃疡模型进行相关动物实验研究提供依据。方法建立糖尿病小鼠溃疡模型,统计0、3、5、7、10、14 d小鼠创面动态愈合率及愈合时间;7、14 d取组织,HE染色和Masson染色,免疫组化(CD31和PCNA)观察创面病理组织变化;荧光定量测定愈合相关因子collagen-IIIα、α-SMA的基因表达。结果基因突变db/db小鼠较STZ诱导小鼠的创面愈合时间显著延迟,由(16.6±0.8)d延长至(20.2±1.3)d(P<0.001);db/db组较STZ组肉芽组织生长缓慢,新生上皮长度不足、胶原沉积紊乱,创面愈合较差;7 d,db/db组的CD31和PCNA显著性低表达(P<0.01);7、14 d,db/db组基因上调量的倍数明显低于STZ组。结论两种糖尿病小鼠创面均出现愈合延迟,但基因突变糖尿病db/db小鼠相比于STZ诱导组小鼠在创面愈合延迟的程度上和愈合难易程度上,更适合进行糖尿病溃疡创面的研究。

关键词： 2型糖尿病小鼠难愈性创面动物模型

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基于遥感技术的密云县土地利用变化研究

潍坊工程职业学院学报 2014年第2期27卷 67-69页

作者：范明强韩延忠丁敏山东元鸿测绘科技有限公司济南250014

以密云县2006、2009及2011年的三期TM遥感影像为主要数据,结合遥感和地理信息系统技术,通过使用监督分类的方法,提取研究区各个土地利用类型信息,以此来分析2006、2009及2011年密云县各土地利用类型的分布及利用情况,并生成各年份土地... 详细信息

以密云县2006、2009及2011年的三期TM遥感影像为主要数据,结合遥感和地理信息系统技术,通过使用监督分类的方法,提取研究区各个土地利用类型信息,以此来分析2006、2009及2011年密云县各土地利用类型的分布及利用情况,并生成各年份土地利用的专题图。利用综合解译与GIS空间分析,研究密云县这几年间土地利用的数量结构变化特点和空间结构变化趋势。

关键词：密云县遥感监督分类土地利用

冬小麦生育期地下水补给量表征及水位阈值试验研究

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农业工程学报 2024年

作者：薛歆蔡甲冰于颖多张宝忠韩延安中国水利水电科学研究院流域水循环模拟与调控国家重点实验室国家节水灌溉北京工程技术研究中心陕西省交口抽渭灌溉中心

作物生育期地下水补给量精量表征可准确量化灌区农田地下水的利用情况，对促进地下水资源合理使用及区域农业生产可持续发展具有重要的意义。为构建冬小麦生育期地下水补给量估算模型，探究冬小麦各生育期地下水水位临界埋深和适宜阈值... 详细信息

作物生育期地下水补给量精量表征可准确量化灌区农田地下水的利用情况，对促进地下水资源合理使用及区域农业生产可持续发展具有重要的意义。为构建冬小麦生育期地下水补给量估算模型，探究冬小麦各生育期地下水水位临界埋深和适宜阈值，该研究通过群集式蒸渗仪开展不同地下水水位和不同灌溉处理下的冬小麦生长过程试验观测，利用率定和校核后的AquaCrop模型模拟了不同灌溉制度和地下水位埋深情景下的冬小麦生长发育和土壤水分动态变化过程。结果表明：1)不同处理冬小麦土壤含水率、冠层覆盖度、生物量和产量模拟值与实测值之间统计参数可同时达到决定系数不小于0.8、相对误差和标准化均方根误差均小于16%，可见AquaCrop模型能较好模拟冬小麦生长发育过程。2)利用校核后的AquaCrop模型模拟了52种不同灌溉处理和地下水位情景下冬小麦生长过程，构建了冬小麦生育期土壤储水量—地下水补给强度和地下水位埋深—土壤储水量的非线性回归方程；将地下水补给强度计算值与田间实测值对比验证，决定系数均在0.873及以上、相对误差不大于9.22%、均方根误差不大于0.316 mm/d、标准化均方根误差不大于11.89%。3)通过联立冬小麦生育期土壤储水量—地下水补给强度和地下水位埋深—土壤储水量的非线性回归方程，得到不同灌溉处理下冬小麦各生育期地下水水位临界埋深，可知灌溉越少地下水补给需求越强烈，临界埋深越深；分析52种模拟情景下冬小麦产量与地下水水位埋深之间的关系，可知其适宜生长的最优埋深阈值为2.0～2.5 m，此时冬小麦非充分灌溉处理（返青水+灌浆水）产量和水分利用效率均达到最优，分别为8.848 t/hm2和2.18～2.43 kg/m3。研究结果可为准确评估农田地下水贡献量以及精量灌溉决策与管理提供技术支撑。

关键词：冬小麦地下水补给量地下水临界埋深 AquaCrop模型