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单宁酶基因在黑曲霉ST31中的克隆与表达

中国生物工程杂志 2005年第9期25卷 74-77页

作者：黄小凤韦宇拓韦传东杜丽琴庞宗文黄日波广西大学生命科学与技术学院南宁530005

利用PCR扩增得到米曲霉(Aspergillus oryzae)单宁酶(tannase)基因的编码序列,经DNA测序证实单宁酶基因已成功克隆,然后将其连接到黑曲霉的表达载体ANED2-SP2上构建单宁酶基因表达载体.将构建好的单宁酶基因表达载体通过原生质转化法导... 详细信息

利用PCR扩增得到米曲霉(Aspergillus oryzae)单宁酶(tannase)基因的编码序列,经DNA测序证实单宁酶基因已成功克隆,然后将其连接到黑曲霉的表达载体ANED2-SP2上构建单宁酶基因表达载体.将构建好的单宁酶基因表达载体通过原生质转化法导入黑曲霉菌株ST31中进行表达研究.结果表明重组菌株的单宁酶活力最高为104.02 U/ml发酵液,比原始出发菌株米曲霉提高2～3倍.研究构建了黑曲霉的高效转化体系,提高了黑曲霉表达系统的应用水平,为其它新酶的研究提供有价值的参考.

关键词：单宁酶黑曲霉克隆表达黑曲霉菌株酶基因基因表达载体 PCR扩增 DNA测序编码序列

克雷伯氏菌甘油脱水酶基因和1,3—丙二醇氧化还原酶基因的克隆及在大肠杆菌中的表达

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克雷伯氏菌甘油脱水酶基因和1,3—丙二醇氧化还原酶基因的克隆及...

甘蔗ACC氧化酶全长cDNA的克隆及序列分析

广西微生物学会2003年学术年会

作者：周文广韦宇拓黄鲲黄日波广西大学生命科学与技术学院发酵与酶工程研究所

1,β—丙二醇是一种重要的化工原料,可用作溶剂、抗冻剂或保护剂、精细化工原料以及新型聚酯—聚埘苯二甲酸丙二醇酯(PTT)和聚氨酯的单体。PTT是一种新型聚酯材料,具有优异的回弹性、染色性、抗污性、较好的抗紫外变色性能等特点,可用... 详细信息

1,β—丙二醇是一种重要的化工原料,可用作溶剂、抗冻剂或保护剂、精细化工原料以及新型聚酯—聚埘苯二甲酸丙二醇酯(PTT)和聚氨酯的单体。PTT是一种新型聚酯材料,具有优异的回弹性、染色性、抗污性、较好的抗紫外变色性能等特点,可用于地毯、工程塑料、膜及纺织业的服装材料等,因此被认为是本世纪最具有广阔应用前景的化工原料,越来越受到人们的重视。目前生产1,3—丙二醇的方法主要是化学法,由于化学法生产成本高,且对环境污染大,因此微生物法生产1,3—丙二醇成为当前研究的热点。本论文以克雷伯氏菌(Klebsiella pneumoniae)的总DNA为模板,PCR扩增Klebsiella pneumoniae中的甘油脱水酶基因(dhaB)和1,3—丙二醇氧化还原酶基因(dhaT),分别构建表达质粒pSE—dhaB和pSE—dhaT并在大肠杆菌JM109中表达。SDS—PAGE电泳分析表明:有表达分子量为63KD、61KD、22KD、16KD(DHAB)和43KD(DHAT)的蛋白质。因此可用于多顺反子表达质粒构建试验。将dhaB基因,含核糖体结合位点(RBS)的dhaT基因和终止子串联起来置于trc启动子控制下构成多顺反子表达质粒pSE—dhaB—dhaT-terminator,转入大肠杆菌JM109内,重组菌株在含0.8%甘油培养基中于37℃培养44小时,有1,3—丙二醇产生,产率为2.7g/L。而不含多顺反子表达质粒的对照菌株则没有1,3—丙二醇生成。本研究成功地将dhaB和dhaT基因引入大肠杆菌,在大肠杆菌中建立了一条新的代谢甘油生成1,β—丙二醇的途径,同类研究在国内尚无报道。

关键词： 1,3—丙二醇甘油脱水酶 1,3—丙二醇氧化还原酶克隆大肠杆菌诱导表达 CLONING OF GLYCEROL DEHYDRATASE GENE AND 1,3-PROPANEDIOL OXIDOREDUCTASE GENE FROM Klebsiella pneumoniae and EXPRESSION IN Escherichia coli

来源： cnki会议评论

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广西植物 2006年第2期26卷 194-199页

作者：王爱勤杨丽涛王自章韦宇拓何龙飞李杨瑞广西大学农学院广西南宁530005 中国科学院植物研究所北京100093 广西大学生命科学与技术学院广西南宁530005

ACC氧化酶是高等植物乙烯生物合成途径中的限速酶。根据报道的植物ACC氧化酶基因序列设计特异引物，从甘蔗cDNA文库中克隆到-ACC氧化酶基因片段，命名为GZ-AC0，该基因长792bp，与甘蔗基因组文库中克隆的ACO基因片段仅18个碱基之差。根... 详细信息

ACC氧化酶是高等植物乙烯生物合成途径中的限速酶。根据报道的植物ACC氧化酶基因序列设计特异引物，从甘蔗cDNA文库中克隆到-ACC氧化酶基因片段，命名为GZ-AC0，该基因长792bp，与甘蔗基因组文库中克隆的ACO基因片段仅18个碱基之差。根据该cDNA片段序列，设计两对末端扩增的特异引物，利用RACE-PCR技术，获得GZ-ACO片段的5’端和3’端序列。用VectorNTI7．0软件对三个序列进行拼接和分析，结果得到全长的甘蔗GZ-ACO氧化酶基因。GZ-ACO cDNA核苷酸序列长1307bp，具有一个972bp完整的读码框，启动子ATG位于126bp，终止子TAA位于1097bp，推导编码323个氨基酸。系统进化分析表明，GZ-ACO基因氨基酸序列与其它植物已报道的ACC氧化酶基因具有65％～86％的同源率，且与单子叶禾本科植物首先聚类，其次与单子叶芭蕉科、兰科植物聚类，最后与双子叶植物聚类，与植物形态的系统进化结果一致。该基因已在DDBJ／EMBL／GenBank基因数据库注册，注册号为AY521566。

关键词： ACC氧化酶 cDNA克隆甘蔗基因

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广西象州温泉嗜热菌的分离与鉴定

广西科学 2006年第4期13卷 327-329,333页

作者：苏龙韦宇拓黄日波玉林师范学院化学与生物系广西玉林537000 广西大学生命科学与技术学院

采集广西象州温泉水样，用常规的稀释涂布法分离和纯化嗜热菌，并选择其中1株编号为XZ2K2的菌株进行形态观察、生理生化鉴定和16SrDNA序列分析。结果从温泉水中分离得到9个菌株，XZ2K2菌株的革兰氏染色阳性，无芽孢，细胞呈杆状，最适... 详细信息

采集广西象州温泉水样，用常规的稀释涂布法分离和纯化嗜热菌，并选择其中1株编号为XZ2K2的菌株进行形态观察、生理生化鉴定和16SrDNA序列分析。结果从温泉水中分离得到9个菌株，XZ2K2菌株的革兰氏染色阳性，无芽孢，细胞呈杆状，最适生长温度为70-75℃，最适的生长pH值为7．0～7．5．初步鉴定该菌株为布氏栖热菌（Thermus brockianus）。

关键词：嗜热菌分离鉴定温泉

酿酒酵母3-磷酸甘油脱氢酶和3-磷酸甘油酯酶基因双表达盒的产甘油工程菌的构建

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酿酒酵母3-磷酸甘油脱氢酶和3-磷酸甘油酯酶基因双表达盒的产甘油...

嗜热菌XZ2K2葡聚糖蔗糖酶基因的克隆与表达

广西微生物学会2003年学术年会

作者：杜丽琴韦宇拓黄鲲黄日波广西大学生命科学与技术学院发酵与酶工程所

甘油是一种广泛用于化妆品、沐浴露、食品、抗冷冻剂、润滑剂等的化工产品。二十世纪早期,甘油是从动物脂肪等物质中提取,费时且效率低。八十年代工业上也利用能天然产甘油的酵母等微生物发酵产甘油,但是甘油的得率仍然不高。1997年,Mic...

甘油是一种广泛用于化妆品、沐浴露、食品、抗冷冻剂、润滑剂等的化工产品。二十世纪早期,甘油是从动物脂肪等物质中提取,费时且效率低。八十年代工业上也利用能天然产甘油的酵母等微生物发酵产甘油,但是甘油的得率仍然不高。1997年,Michnick等成功构建提高了3-磷酸甘油脱氢酶表达水平的啤酒酵母工程菌,发现甘油产量获得提高。王正祥通过对一株高产甘油的假

关键词：

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化学与生物工程 2006年第7期23卷 42-44,47页

作者：苏龙韦宇拓黄日波玉林师范学院生物化学系广西玉林537000 广西大学生命科学与技术学院广西南宁530005

提取嗜热菌XZ2K2的基因组DNA。通过对基因库中葡聚糖蔗糖酶基因序列进行分析比较,设计了两对引物。通过构建基因组文库,进行PCR筛选,扩增出4.5 kb的同源片段。DNA序列分析表明,该片段与已经报道的葡聚糖蔗糖酶编码基因(dex基因)具有90%... 详细信息

提取嗜热菌XZ2K2的基因组DNA。通过对基因库中葡聚糖蔗糖酶基因序列进行分析比较,设计了两对引物。通过构建基因组文库,进行PCR筛选,扩增出4.5 kb的同源片段。DNA序列分析表明,该片段与已经报道的葡聚糖蔗糖酶编码基因(dex基因)具有90%的同源。将该片段与载体pSE380连接,构建了重组质粒pSE380-dex。然后用化学方法将重组质粒转化到大肠杆菌JM109中,获得重组子pSE380-dex。进一步的实验表明,嗜热菌的dex基因可以在JM109中表达。

关键词：嗜热菌基因库葡聚糖蔗糖酶表达

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高密度培养基因工程菌的条件优化

广西农业生物科学 2002年第1期21卷 58-59页

作者：汪嵘赵颖怡张云开韦宇拓林莹广西大学生物技术实验中心广西南宁530005 广西大学生物技术与糖业工程学院广西南宁530004

高密度发酵是发酵工业的发展趋势之一。然而 ,随着发酵规模的扩大 ,诸多因素影响着基因工程菌的表达和产物形成量的高低。本文分析和介绍了宿主、营养、p H、温度、溶氧。

关键词：基因工程菌高密度发酵条件优化高密度发酵

β-葡聚糖酶杂合基因bglHAM的克隆及在***中的表达

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广西大学学报（自然科学版） 2002年第1期27卷 10-13页

作者：苏华波韦宇拓黄鲲赵颖怡黄日波广西大学生物技术实验中心广西南宁530005

采用 PCR的方法 ,以 Bacillus macerans总 DNA为模板 ,构建出β 1 ,3 1 ,4葡聚糖酶杂合基因bgl HAM,与巴斯德毕赤酵母表达载体 p PIC9K重组 ,得到重组质粒 p PIC9K HAM,电脉冲转化法转化酵母菌 GS1 1 5 ,KM71 .在 MM,MD平板上筛选表型 ,... 详细信息

采用 PCR的方法 ,以 Bacillus macerans总 DNA为模板 ,构建出β 1 ,3 1 ,4葡聚糖酶杂合基因bgl HAM,与巴斯德毕赤酵母表达载体 p PIC9K重组 ,得到重组质粒 p PIC9K HAM,电脉冲转化法转化酵母菌 GS1 1 5 ,KM71 .在 MM,MD平板上筛选表型 ,YPD G41 8平板上筛选多拷贝重组子 .重组菌株经甲醇诱导后 ,刚果红平板染色法检测到β葡聚糖酶活性 ,SDS PAGE证明表达产物的分子量约为 2 4k D,摇瓶诱导培养筛选到的重组菌株 ,胞外每 m L发酵液最高酶活达 2 40 U.

关键词： bglHAM P.pastoris β-1,3-1,4葡聚糖酶巴斯德毕赤酵母杂合基因基因克降基因表达 PCR扩增

一种快速、精确构建蔗糖酶基因高通量筛选体系的方法

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一种快速、精确构建蔗糖酶基因高通量筛选体系的方法