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HBV S基因修饰树突状细胞疫苗诱导特异性CTL反应的探讨

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中华实验和临床病毒学杂志 2007年第2期21卷 108-110页

作者：雷春亮黄呈辉杨湛唐小平广州市第八人民医院深圳市宝安血站

目的分析腺病毒载体介导HBVS基因修饰树突状细胞（DCs）能否诱导抗HBV特异性CTL反应。方法制备携带HBVS基因的重组腺病毒，分别转染外周血诱导培养的DCs，观察腺病毒转染DCs效率和DCs中HBV抗原的表达；混合淋巴细胞反应测定HBV抗原基因... 详细信息

目的分析腺病毒载体介导HBVS基因修饰树突状细胞（DCs）能否诱导抗HBV特异性CTL反应。方法制备携带HBVS基因的重组腺病毒，分别转染外周血诱导培养的DCs，观察腺病毒转染DCs效率和DCs中HBV抗原的表达；混合淋巴细胞反应测定HBV抗原基因修饰DCs刺激同种异体T淋巴细胞增殖能力；乳酸脱氢酶释放法检测特异性CTL细胞对HepG2 22．1．5靶细胞的杀伤能力。结果腺病毒载体能够高效介导HBVS基因在DCs中表达，且DC细胞形态完整；HBVS基因修饰DCs具有刺激同种异体T细胞增殖能力，同时能诱导抗HBV特异性CTL反应。结论HBVS基因修饰DCs疫苗具有增强抗HBV特异性CTL效应的能力，可能发展为一种新型抗病毒疫苗。

关键词：肝炎表面抗原,乙型树突细胞 T淋巴细胞,细胞毒性腺病毒科

携带HSP70-HBsAg嵌合基因复制缺陷型重组腺病毒的制备

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中华实验和临床病毒学杂志 2008年第2期22卷 136-138页

作者：雷春亮黄呈辉杨湛唐小平广州市第八人民医院广州510060 深圳市宝安血站

目的构建表达乙肝病毒表面抗原（HBsAg）和热休克蛋白70（HSP70）嵌合基因的复制缺陷型重组腺病毒载体。方法扩增结核分枝杆菌HSP70基因片段，亚克隆到穿梭质粒pAdTrack-CMV-HBsAg上，与5型腺病毒骨架质粒pAdeasy-1共同电转化到大肠埃希... 详细信息

目的构建表达乙肝病毒表面抗原（HBsAg）和热休克蛋白70（HSP70）嵌合基因的复制缺陷型重组腺病毒载体。方法扩增结核分枝杆菌HSP70基因片段，亚克隆到穿梭质粒pAdTrack-CMV-HBsAg上，与5型腺病毒骨架质粒pAdeasy-1共同电转化到大肠埃希菌BJ5183内进行同源重组，经卡那霉素抗性筛选和酶切鉴定筛选出携带HBsAg-HSP70嵌合基因的重组腺病毒载体，用脂质体包裹PacI酶切线性化的重组质粒，转染到293细胞内进行重组腺病毒的包装。体外转染真核细胞．通过示踪基因绿色荧光蛋白表达的观察、RT-PCR和ELISA检测目的基因的表达。结果成功获得重组腺病毒质粒pAd-HBsAg-HSP70。重组质粒pAd-HBsAg-HSP70导入293细胞，经包装和二次扩大培养获得了具有感染能力的重组腺病毒颗粒Ad-HBsAg-HSP70，其病毒滴度达2×10^12pfu／L，并能在真核细胞中有效表达目的基因。结论成功构建表达HBsAg-HSP70复制缺陷型重组腺病毒载体，为进一步开展HBV基因治疗研究提供实验基础。

关键词：腺病毒科肝炎病毒乙型肝炎核心抗原乙型基因转染热休克蛋白70

慢性乙型肝炎抗病毒序贯治疗方案疗效的对比研究

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中华实验和临床病毒学杂志 2004年第1期18卷 69-72页

作者：雷春亮彭晓谋唐小平杨湛范慧敏袁小珍广州市第八人民医院 510060 中山大学附属第三医院传染病科

目的　建立抗病毒序贯治疗方案 ,并采用对比研究评价其治疗慢性乙型肝炎的效果。方法　 74例慢性乙型肝炎患者分成 3组。抗病毒序贯治疗组 30例 ,接受日达仙治疗 8周 ,1 6mg 次 ,皮下注射 ,2次周 ,于第 5周起加用α 干扰素 5 0 0MU ... 详细信息

目的　建立抗病毒序贯治疗方案 ,并采用对比研究评价其治疗慢性乙型肝炎的效果。方法　 74例慢性乙型肝炎患者分成 3组。抗病毒序贯治疗组 30例 ,接受日达仙治疗 8周 ,1 6mg 次 ,皮下注射 ,2次周 ,于第 5周起加用α 干扰素 5 0 0MU 次 ,肌内注射 ,隔日 1次 ,疗程 6个月 ;HBeAg阴转 2个月或α IFN结束后 ,使用拉米夫定 ,10 0mg d ,用至 18个月以上。IFN联合日达仙组 14例 ,接受日达仙和α 干扰素治疗 ,用法同抗病毒序贯治疗组 ,疗程为 6个月。拉米夫定组 30例 ,接受拉米夫定治疗 ,用法同抗病毒序贯治疗组 ,疗程 18个月以上。结果　抗病毒序贯治疗组、α 干扰素 (α IFN)联合日达仙组和拉米夫定组的短期ALT复常和HBeAg阴转率 (有效率 )分别为 76 7%、78 6 %和 13 3%。抗病毒序贯治疗组与α IFN联合日达仙组的效果相当 ,均高于拉米夫定组 ,差异有显著意义 (P <0 0 1)。持续有效率分别为 76 7%、5 7 1%和 16 7%。抗病毒序贯治疗组高于α IFN联合日达仙组和拉米夫定组 ,治疗费用仅约为IFN联合日达仙组的 6 0 %。抗病毒序贯治疗组和α IFN联合日达仙组中肝损敏感期出现率为 4 7 7% ,出现时间为IFN治疗开始后的 2～ 8周 ,较文献中单用IFN治疗引起的肝损敏感期的出现时间 (6～ 8周 )早。

关键词：慢性乙型肝炎抗病毒序贯治疗拉米夫定日达仙 α-干扰素

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SARS患者的护理现状及进展

中华实验和临床病毒学杂志 2005年第1期19卷 97-98页

作者：万秀兰高玲玲雷春亮广州市第八人民医院感染科 510060 中山大学护理学院

严重急性呼吸综合征(severe acute respiratory syndrome,SARS)国内称为"传染性非典型性肺炎".2003年4月16日世界卫生组织将新型变异的冠状病毒确定为引起SARS的病原体[1].它的主要传播途径是通过人体呼出的飞沫、排出的体液(分泌物、... 详细信息

严重急性呼吸综合征(severe acute respiratory syndrome,SARS)国内称为"传染性非典型性肺炎".2003年4月16日世界卫生组织将新型变异的冠状病毒确定为引起SARS的病原体[1].它的主要传播途径是通过人体呼出的飞沫、排出的体液(分泌物、汗液、唾液、呕吐物、尿液)及被污染的物品进行传播.它发病迅速,传染性强,尤其对医务人员的健康造成了极大的威胁(医护人员是主要的易感者).SARS患者的护理是一个崭新的课题.因此,护理人员不仅要做好患者的护理工作,还要做好感染预防控制工作,防止SARS的蔓延。

关键词： SARS患者护理呕吐物飞沫易感者传染性非典型性肺炎严重急性呼吸综合征排出分泌物变异

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药物性肝病的回顾性分析

中国医院药学杂志 2003年第6期23卷 382-383页

作者：关玉娟冼建中唐小平雷春亮广州市第八人民医院传染病医院广州510060

目的 :指导临床医生更合理用药及对药物性肝病的及时、正确的诊治。方法 :对我院 7年里收治的 191例DILD患者进行回顾性调查研究。结果 :①合并其他肝病者易发生DILD。②涉及 16类药物的病因 ,前五位依次是抗结核药、抗肿瘤药、激素类... 详细信息

目的 :指导临床医生更合理用药及对药物性肝病的及时、正确的诊治。方法 :对我院 7年里收治的 191例DILD患者进行回顾性调查研究。结果 :①合并其他肝病者易发生DILD。②涉及 16类药物的病因 ,前五位依次是抗结核药、抗肿瘤药、激素类药、中草药及中枢神经系统药。③潜伏期差异大。④临床表现不同。⑤病理类型呈多样性 ,包括从肝实质细胞到胆管细胞损害的各种肝病 ;急性多见 ,占 76 .5 %。⑥停药后保肝治疗 ,80 %以上预后较好 ;死亡率 11%。结论 :DILD是临床中较常见和易被忽视的疾病 ,应引起临床医务工作者的重视。

关键词：药物性肝病病因病理回顾性调查

腺病毒介导HSP70-HBsAg嵌合基因转染树突状细胞及生物学特性分析

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中华实验和临床病毒学杂志 2009年第1期23卷 29-31页

作者：雷春亮欧阳玲杨湛唐小平广州市第八人民医院 510060 深圳市宝安血站

目的分析携带热休克蛋白70（HSP70）和乙肝表面抗原（HBsAg）嵌合基因的腺病毒表达载体感染人外周血诱导培养树突状细胞（DC）后其生物学特性的改变。方法从正常人外周血中分离单个核细胞，经Ad－HSPT0－HBsAg感染刺激后，在含细胞因子... 详细信息

目的分析携带热休克蛋白70（HSP70）和乙肝表面抗原（HBsAg）嵌合基因的腺病毒表达载体感染人外周血诱导培养树突状细胞（DC）后其生物学特性的改变。方法从正常人外周血中分离单个核细胞，经Ad－HSPT0－HBsAg感染刺激后，在含细胞因子粒细胞巨噬细胞集落刺激因子（GMCSF）、白介素-4（IL4）、肿瘤坏死因子（TNF—α）的培养液体中体外诱导培养DC；采用荧光倒置显微镜、RT-PCR、流式细胞仪（FACS）和混合淋巴细胞反应（MLR）试验对人外周血来源的DC进行生物学特性分析。结果Ad—HSP70－HBsAg感染后的DC能够有效表达示踪蛋白GFP和转录基因HSP70－HBsAg，病毒感染组和对照组的DC在细胞形态、DC细胞表面分子表达和刺激同种异体的人外周血幼稚型T细胞增殖能力的方面无明显差别。结论Ad—HSP70－HBsAg可有效转染DC，感染后的病毒对Dc的生长和生物学特性无显著影响。

关键词：热休克蛋白质70 肝炎病毒乙型树突细胞腺病毒人

干扰素诱导慢性乙型肝炎患者出现肝细胞损害敏感期的始动因素

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中华肝脏病杂志 2003年第8期11卷 467-469页

作者：彭晓谋雷春亮黄仰甦顾琳姚集鲁广东中山大学附属第二医院传染病科广州510630 广州市第八人民医院肝病科

目的探讨干扰素诱导慢性乙型肝炎患者出现肝细胞损害敏感期的始动因素。方法对44例乙型肝炎e抗原(HBeAg)和乙型肝炎病毒(HBV)DNA均阳性的慢性乙型肝炎患者进行干扰素治疗,定期检测血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)以及外周血中乙型肝炎表面... 详细信息

目的探讨干扰素诱导慢性乙型肝炎患者出现肝细胞损害敏感期的始动因素。方法对44例乙型肝炎e抗原(HBeAg)和乙型肝炎病毒(HBV)DNA均阳性的慢性乙型肝炎患者进行干扰素治疗,定期检测血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)以及外周血中乙型肝炎表面抗原(HBsAg)、HBeAg、抗-HBc和HBVDNA 含量,治疗前进行肝活体组织检查。结果干扰素治疗后第6个月的HBeAg阴转率为75.0％,随访1年后为68.2％。肝细胞损害敏感期出现率为47.7%,其平均出现时间(3.14±1.49)周,平均持续时间(8.24±3.52)周,ALT平均升幅为基础ALT的(1.73±1.13)倍。肝细胞损害敏感期出现有利于提高干扰素治疗显效(Fisher精确概率,P—0.028)。治疗前外周血中HBeAg水平较高、肝内炎症活动度适中及HBcAg表达活跃有利于肝细胞损害敏感期的出现。从发生时间分析,外周血中的HBeAg和抗-HBc水平下降与肝细胞损害敏感期的起始相吻合。结论肝细胞损害敏感期的始动因素可能为:干扰素治疗抑制了病毒蛋白的合成,导致外周血中HBeAg和抗-HBc水平快速下降,降低了对识别HBcAg的细胞毒性T淋巴细胞(CTL)的免疫封闭作用,从而激活了CTL细胞介导的乙型肝炎病毒感染肝细胞毒性作用。

关键词：干扰素诱导慢性乙型肝炎肝细胞损害敏感期始动因素抗病毒治疗

严重急性呼吸综合征合并神经精神损害的临床研究

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中华神经科杂志 2004年第3期37卷 228-230页

作者：唐亚梅邢诒刚李建国丁彦青雷春亮唐小平中山大学附属第二医院神经科广州510120 中山大学附属第二医院呼吸科广州510120 第一军医大学南方医院病理科广州市第八人民医院传染科

目的　对严重急性呼吸综合征 (SARS)合并神经精神损害的临床特点进行分析总结。方法　回顾分析 32 5例SARS病例 ,其中 173例出现神经精神症状 ,总结分析其临床资料。结果　①SARS神经精神症状发生率约 5 3 2 % ,主要有以下几类 :头痛 11... 详细信息

目的　对严重急性呼吸综合征 (SARS)合并神经精神损害的临床特点进行分析总结。方法　回顾分析 32 5例SARS病例 ,其中 173例出现神经精神症状 ,总结分析其临床资料。结果　①SARS神经精神症状发生率约 5 3 2 % ,主要有以下几类 :头痛 116例 (6 7 1% ) ,头晕 5 0例 (2 8 9% ) ,意识障碍 18例 (10 4 % ) ,精神障碍 8例 (4 6 % ) ,伴神经系统局灶定位体征者 1例 (0 6 % ) ,抽搐 2例(1 2 % ) ,情感障碍 5 3例 (30 6 % ) ,其中焦虑 35例 (2 0 2 % ) ,抑郁 11例 (6 4 % ) ,自杀倾向 2例(1 2 % ) ,恐惧 13例 (7 5 % )。② 32 5例中 ,重症SARS 5 6例 ,伴发神经精神损害者 4 7例 ,其发生率明显高于轻症 (P <0 0 1)。③ 4例病例眼底检查显示视乳头边缘欠清晰 ,生理凹陷存在 ,静脉充盈。④2例死亡病例尸体解剖脑组织病理显示 :脑组织出现不同程度的水肿 ,局部神经纤维出现脱髓鞘现象。结论　SARS神经精神损害症状多样 ,与病情轻重显著相关。病理检查可见脑水肿及神经元脱髓鞘等损害。

关键词：严重急性呼吸综合征神经精神损害临床研究并发症

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重症急性呼吸综合征患者心肌损害的初步研究

中华内科杂志 2003年第7期42卷 458-460页

作者：关玉娟唐小平尹炽标洪文昕雷春亮广州市第八人民医院传染病研究所 510060

目的　通过对重症急性呼吸综合征 (SARS)患者心肌酶变化的研究 ,探讨SARS患者的心肌损害及其临床意义。方法　依据广东省传染性非典型肺炎病例临床诊断标准 (草案 ) ,选择SARS患者 37例和健康体检者 35例 ,检测血清肌酸激酶、乳酸脱氢酶... 详细信息

目的　通过对重症急性呼吸综合征 (SARS)患者心肌酶变化的研究 ,探讨SARS患者的心肌损害及其临床意义。方法　依据广东省传染性非典型肺炎病例临床诊断标准 (草案 ) ,选择SARS患者 37例和健康体检者 35例 ,检测血清肌酸激酶、乳酸脱氢酶、AST、肌钙蛋白Ⅰ、肌酸激酶同工酶、肌红蛋白。结果　SARS组肌酸激酶、乳酸脱氢酶、AST(单位均为U/L)明显高于对照组 (分别为 2 85 4 9± 2 6 6 2 1比 10 6 71± 4 3 38;388 5 6± 198 80比 2 0 0 83± 4 4 86 ;71 0 3± 36 14比 2 9 4 3± 8 89,P值均 <0 0 1) ;死亡者均值较存活者高。SARS组肌钙蛋白Ⅰ、肌酸激酶同工酶、肌红蛋白阳性率高于对照组 ,P <0 0 5。病理显示心肌细胞局部变性。结论　SARS患者易合并心肌损害 ,临床收治该病患者时应予以足够的重视。密切监测心脏功能 ,对减少并发症、降低病死率具有重要意义。

关键词：重症急性呼吸综合征心肌损害心肌酶心肌细胞心脏功能并发症病理机制