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花生TRAP-PCR分析体系的建立

青岛农业大学学报（自然科学版） 2010年第1期27卷 42-45,51页

作者：徐磊王晶珊隋炯明王晓杰乔利仙青岛农业大学生命科学学院山东青岛266109 青岛市主要农作物种质创新与应用重点实验室

目标区域扩增多态性(target region amplified polymorphism,TRAP)是通过一个依据EST序列设计的固定引物和一个针对外显子或内含子特点设计的随机引物对开放阅读框(open reading frames,ORFs)进行扩增。本研究首次建立了适于花生TRAP分... 详细信息

目标区域扩增多态性(target region amplified polymorphism,TRAP)是通过一个依据EST序列设计的固定引物和一个针对外显子或内含子特点设计的随机引物对开放阅读框(open reading frames,ORFs)进行扩增。本研究首次建立了适于花生TRAP分析的PCR扩增体系:在15μl总反应体系中,模板DNA50ng,引物浓度1.0μmol/L,dNTPs浓度0.25mmol/L,Taq DNA聚合酶1U。利用该体系对24个花生品种DNA进行扩增,得到了清晰稳定的条带,且这些条带具有一定的多态性,说明所建立的体系可用于花生遗传多样性分析。

关键词：花生目标区域扩增多态性(TRAP) 分析体系

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花生AhACO基因的克隆及功能验证

花生AhACO基因的克隆及功能验证

基于转录组测序的紫色甘薯突变体中花青素合成相关基因的分析

中国作物学会油料作物专业委员会第八次会员代表大会暨学术年会

作者：孙明明房磊郭悦周文杰隋炯明王晶珊姜德锋乔利仙青岛农业大学生命科学学院/山东省高校植物生物技术实验室青岛农业大学农学院/山东省旱作农业重点实验室

ACC氧化酶是催化乙烯合成的关键酶之一,通过NCBI在线搜索和文献查找在花生中发现25个ACC氧化酶成员。RT-PCR分析结果表明:AhACO1和AhACO2成员在花生耐盐突变体m29及诱变亲本间表达量存在明显差异。根据AhACO1和AhACO2序列设计引物,以花... 详细信息

ACC氧化酶是催化乙烯合成的关键酶之一,通过NCBI在线搜索和文献查找在花生中发现25个ACC氧化酶成员。RT-PCR分析结果表明:AhACO1和AhACO2成员在花生耐盐突变体m29及诱变亲本间表达量存在明显差异。根据AhACO1和AhACO2序列设计引物,以花生耐盐突变体m29 cDNA为模板进行扩增,分别获得长度为963bp和1 319bp的序列。将AhACO1和4hACO2连接到psuper1300载体构建重组质粒psuper1300-AhACO1和psuper 1300-AhACO2,并通过花粉管注射法转化花生,收获后的荚果利用PCR扩增检测筛选出阳性籽粒。RT-qPCR检测到转基因植株目的基因的表达量明显高于非转基因对照植株;毛细管柱气相色谱法检测到转AhACO1基因植株的乙烯释放量非转基因植株的2.79倍,转AhACO2基因植株乙烯释放量为对照植株的1.87倍。对转基因植株及对照植株进行盐胁迫处理后观察其表型变化,发现转基因植株叶片萎蔫程度相对较轻,耐盐性有所增强。推测AhACO基因的过量表达提高了转基因花生的耐盐性。

关键词：花生 ACC氧化酶 ACO基因耐盐性乙烯

来源： cnki会议评论

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青岛农业大学学报（自然科学版） 2018年第1期35卷 27-31页

作者：王霞李恩广玄曼霖燕宝会王晶珊隋炯明青岛农业大学农学院/山东省旱作技术重点实验室山东青岛266109

花青素是一种水溶性色素,具有抗氧化和清除自由基等功能。利用1个紫色甘薯突变体和诱变亲本为材料,通过转录组测序,筛选出了在二者差异表达和花青素合成及调控相关的基因。转录组分析结果表明花青素合成相关的unigenes共80条,33.75%(27/... 详细信息

花青素是一种水溶性色素,具有抗氧化和清除自由基等功能。利用1个紫色甘薯突变体和诱变亲本为材料,通过转录组测序,筛选出了在二者差异表达和花青素合成及调控相关的基因。转录组分析结果表明花青素合成相关的unigenes共80条,33.75%(27/80)的unigenes在两种材料中差异表达。紫色甘薯突变体和诱变亲本中差异表达的基因相比,81.48%(22/27)的unigenes上调表达,其中编码PAL、C4H、CHS、CHI、F3H和DFR的所有unigenes均上调表达,这些unigenes可能与紫色甘薯突变体中花青素的合成有关。本研究为高花青素甘薯分子育种奠定了基础。

关键词：紫色甘薯突变体转录组测序花青素合成基因

花生AhLEA-Dehydrin基因的克隆及功能验证

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花生AhLEA-Dehydrin基因的克隆及功能验证

中国作物学会油料作物专业委员会第八次会员代表大会暨学术年会

作者：姜平平潘雷雷赵杨姜亚男隋炯明王晶珊姜德锋乔利仙青岛农业大学生命科学学院/山东省高校植物生物技术实验室青岛农业大学农学院/山东省旱作农业重点实验室

利用前期构建的花生转录组数据库,筛选到1个在耐盐突变体及诱变亲本间存在差异表达的LEA基因家族成员AhLEA-Dehyrin。为了进一步探讨AhLEA-Dehyrin参与花生抗逆响应的相关机制,根据AhL EA-Dehydrin序列设计引物,以花生耐盐突变体cDNA为... 详细信息

利用前期构建的花生转录组数据库,筛选到1个在耐盐突变体及诱变亲本间存在差异表达的LEA基因家族成员AhLEA-Dehyrin。为了进一步探讨AhLEA-Dehyrin参与花生抗逆响应的相关机制,根据AhL EA-Dehydrin序列设计引物,以花生耐盐突变体cDNA为模板进行扩增,获得520 bp目标片段。构建AhLEA-Deh-yin基因与GFP基因的融合表达载体,利用农杆菌介导法转化烟草,激光共聚焦显微镜下观察结果表明AhLEA-Dehyrin基因定位在细胞核内。构建pCambia1301-AhLEA-Dehyrin过表达载体,并通过花粉管注射法转化花生,获得转基因植株,根据PCR鉴定结果筛选转基因阳性植株。RT-qPCR荧光定量分析结果表明,转基因植株AhLEA-Dehydrin基因的相对表达量高于非转基因对照植株3～5倍。用250mM的NaCl进行盐胁迫的处理后5天,对照植株叶片出现明显的萎蔫现象,而转基因植株无明显变化。生理生化指标测定结果显示,转基因植株中SOD、POD、CAT酶活性均高于非转基因对照植株。推测AhLEA-Dehydrin基因的过量表达提高了转基因花生的耐盐性。

关键词：花生 AhLEA-Dehydrin 基因克隆遗传转化盐胁迫

来源： cnki会议评论

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不同基因型对花生胚小叶植株再生的影响

中国农学通报 2012年第27期28卷 45-48页

作者：隋炯明乔利仙赵明霞徐丽娟王晶珊青岛农业大学生命科学学院/山东省高校植物生物技术重点实验室山东青岛266109

以不同类型18个花生品种成熟种子的胚小叶为外植体,对不定芽诱导及植株再生进行了研究,旨在为花生遗传转化和离体诱变等提供培养方法。将胚小叶外植体培养在添加1mg/LNAA和6mg/LBAP的诱导培养基上,4周后转移到添加4mg/LBAP的培养基上进... 详细信息

以不同类型18个花生品种成熟种子的胚小叶为外植体,对不定芽诱导及植株再生进行了研究,旨在为花生遗传转化和离体诱变等提供培养方法。将胚小叶外植体培养在添加1mg/LNAA和6mg/LBAP的诱导培养基上,4周后转移到添加4mg/LBAP的培养基上进行培养。结果表明,所有的供试品种芽点诱导率均高于60%,但5大类型间及品种间（62.2%~95.5%）存在显著差异,龙生型平均诱导率最高（87.2%）,其次是珍珠豆型（81.5%）,多粒型最低（63.1%）。将形成芽点的外植体转移到添加4mg/LBAP的培养基上后,部分外植体从芽点上分化出不定芽,继续培养不定芽伸长并再生植株。植株再生率也存在显著性差异,最高的是珍珠豆型（83.5%~97.1%）,最低是多粒型（14.8%~22.0%）。

关键词：花生胚小叶组织培养丛生芽诱导植株再生

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花生组培苗嫁接技术的研究

青岛农业大学学报（自然科学版） 2010年第2期27卷 110-113页

作者：郝世俊隋炯明乔利仙王晓杰王晶珊青岛农业大学生命科学学院青岛市主要农作物种质创新与应用重点实验室山东青岛266109

为解决花生组培再生苗及转基因苗驯化移栽成活率低的难题,本试验以花生实生苗作为砧木,对花生嫁接技术进行了研究。试验结果表明:超净台内无菌嫁接效果较好,以再生苗或实生苗为接穗进行无菌嫁接,其成活率均达90%以上,明显高于室内嫁接... 详细信息

为解决花生组培再生苗及转基因苗驯化移栽成活率低的难题,本试验以花生实生苗作为砧木,对花生嫁接技术进行了研究。试验结果表明:超净台内无菌嫁接效果较好,以再生苗或实生苗为接穗进行无菌嫁接,其成活率均达90%以上,明显高于室内嫁接成活率(71%～72%);无菌嫁接时12～15d苗龄的砧木效果最好;将无菌嫁接苗在培养基中培养3～5d后进行驯化移栽为最佳时期;不同花生基因型嫁接苗成活率在87%～95%;嫁接苗移栽田间后,其成活率高达94%,且100%结果。

关键词：花生实生苗再生苗嫁接成活率

花生与其近缘野生种间细胞融合及杂种愈伤组织的形成

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中国农学通报 2012年第33期28卷 71-74页

作者：乔利仙孙海燕隋炯明徐丽娟孙世孟王晶珊青岛农业大学生命科学学院/山东省高校植物生物技术重点实验室山东青岛266109

本研究旨在为体细胞杂交法在花生育种中的应用奠定基础。将花生栽培种Krapts和野生种***幼叶解离的原生质体,用PEG方法融合后,置于添加2mg/L毒莠定(Pic)、0.1mg/L苯基噻二唑基脲(TDZ)、2%的椰乳、5g/L聚乙烯吡咯烷酮(PVP)和0.1%2-吗啉... 详细信息

本研究旨在为体细胞杂交法在花生育种中的应用奠定基础。将花生栽培种Krapts和野生种***幼叶解离的原生质体,用PEG方法融合后,置于添加2mg/L毒莠定(Pic)、0.1mg/L苯基噻二唑基脲(TDZ)、2%的椰乳、5g/L聚乙烯吡咯烷酮(PVP)和0.1%2-吗啉乙磺酸(MES)的改良MSB5(MS无机盐+B5有机成分)液体培养基中进行浅层培养。5周后将形成的小愈伤组织转移到添加3mg/L玉米素(ZT)、0.2mg/L6-苄氨基嘌呤(BAP)、0.1mg/L萘乙酸(NAA)的固体培养基上进行培养,促使愈伤组织增殖。观察发现,融合处理的原生质体在液体培养基上培养4天后开始分裂,2周后形成直径约300μm的细胞团,5周后小愈伤组织直径可达2～3mm。当将小愈伤组织转移到固体培养基上后,愈伤组织迅速增殖,并获得大量愈伤组织。提取愈伤组织DNA进行PCR检测,部分愈伤组织扩增出了双亲特异的DNA条带或双亲都不具有的新条带,说明愈伤组织来自于融合细胞。

关键词：花生 A stenosperma 细胞融合愈伤组织 PCR检测

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花生ASR基因的扩增和生物信息学分析

花生学报 2011年第1期40卷 18-22页

作者：刘强李瑞王晶珊乔利仙赵春梅隋炯明青岛农业大学生命科学学院山东青岛266109 青岛市主要农作物创新与应用重点实验室山东青岛266109

ASR基因（脱落酸、胁迫、成熟诱导基因）是近年来从植物中发现的一类基因,该基因参与植物对低温、干旱、渗透压、脱落酸的胁迫应答。目前在多个植物中克隆了ASR基因,研究以番茄ASR1基因的序列为探针,从花生EST数据库中筛选同源序列并进... 详细信息

ASR基因（脱落酸、胁迫、成熟诱导基因）是近年来从植物中发现的一类基因,该基因参与植物对低温、干旱、渗透压、脱落酸的胁迫应答。目前在多个植物中克隆了ASR基因,研究以番茄ASR1基因的序列为探针,从花生EST数据库中筛选同源序列并进行拼接。根据花生的EST拼接序列设计引物进行RT-PCR扩增,获得一条大小为641bp的条带。与其它物种的氨基酸序列进行比对,同源性为46.41%~69.38%。

关键词：花生 ASR基因逆境胁迫同源序列

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花生AhLea-D基因的克隆及耐盐性验证

农业生物技术学报 2020年第5期28卷 811-822页

作者：姜平平潘雷雷黄建斌纪红昌唐艳艳于明洋朱虹隋炯明王晶珊乔利仙青岛农业大学农学院/山东省花生产业协同创新中心青岛农业大学生命科学学院/山东省高校植物生物技术重点实验室青岛福德隆食品有限公司

花生(Arachis hypogaea)属于中度耐盐作物,可在0.3%的盐碱地上正常生长,但产量会因盐胁迫造成的伤害而减产,挖掘花生耐盐基因、创制耐盐种质、选育耐盐品种成为花生在盐碱地有效利用的关键问题。本研究利用已构建的花生耐盐突变体及其... 详细信息

花生(Arachis hypogaea)属于中度耐盐作物,可在0.3%的盐碱地上正常生长,但产量会因盐胁迫造成的伤害而减产,挖掘花生耐盐基因、创制耐盐种质、选育耐盐品种成为花生在盐碱地有效利用的关键问题。本研究利用已构建的花生耐盐突变体及其诱变亲本转录组数据库,对花生中的胚胎发育晚期丰富蛋白(late embryogenesis abundant proteins, Lea)基因进行差异表达筛选,获得盐胁迫差异表达基因AhLeaD。为了进一步研究AhLea-D基因与花生耐盐性的关系,从花生耐盐突变体中克隆AhLea-D基因(GenBank No. MN393179)全长c DNA序列,该序列全长534 bp,编码的AhLea-D蛋白含有177个氨基酸,分子量为17.89 kD,等电点为5.78,为酸性蛋白。亲水性平均系数为-0.983,蛋白的不稳定指数小于40,属于稳定的亲水性蛋白。构建AhLea-D基因的过表达载体PCAMBIA1301-AhLea-D,并利用花粉管通道法转入花生受体品种’花育23’。收获所注射花蕾上的荚果,利用PCR扩增法对收获的籽粒进行分子鉴定,结果表明转基因籽粒阳性率为52%。q RT-PCR检测结果表明,转基因植株中AhLea-D基因的表达量是非转基因对照植株的7～12倍。利用250 mmol/L NaCl对转基因植株和非转基因对照植株进行盐胁迫处理,1周后对照植株叶片出现明显的萎蔫、发黄现象,而转基因植株无明显变化。转基因植株的净光合速率、气孔导度、蒸腾速率等均高于对照植株,而胞间CO2浓度低于对照植株。转基因植株中超氧化物歧化酶(superoxide dismutase, SOD)、过氧化物酶(peroxidase, POD)、过氧化氢酶(catalase, CAT)的酶活性均显著高于非转基因对照植株,而丙二醛(malonic dialdehyde, MDA)含量则显著低于非转基因对照植株(P<0.05)。本研究结果表明,AhLea-D基因的过量表达提高了转基因花生的耐盐性。本研究结果将为在花生中开拓新的抗逆育种途径提供理论依据,并为花生抗逆耐盐育种提供耐盐新基因。

关键词：花生花生胚胎发育晚期丰富蛋白基因(AhLea-D) 过量表达遗传转化耐盐性