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多浪羊Lin28B基因在初情期启动过程中的功能及转录调控研究

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多浪羊Lin28B基因在初情期启动过程中的功能及转录调控研究

作者：隋志远塔里木大学

学位级别：硕士

初情期是雌性动物首次出现发情表现并排卵的关键时期,在动物生命周期中具有至关重要的作用,是雌性动物获得繁殖能力的一个重要标志,其发生时间直接影响着动物的繁殖能力。前期课题组初步探究了Lin28B基因与多浪羊的初情期启动有一定的... 详细信息

初情期是雌性动物首次出现发情表现并排卵的关键时期,在动物生命周期中具有至关重要的作用,是雌性动物获得繁殖能力的一个重要标志,其发生时间直接影响着动物的繁殖能力。前期课题组初步探究了Lin28B基因与多浪羊的初情期启动有一定的关系。所以本研究继续将Lin28B作为候选基因去探索Lin28B基因和初情期启动之间的关系。本研究将在前期课题组试验的基础上,通过所得到的多浪羊的CDS区序列构建了过表达的载体转染至绵羊卵巢颗粒细胞中,检测Lin28B基因过表达后对其相关通路基因的影响,从而初步分析Lin28B基因在绵羊卵巢颗粒细胞中的作用。其次,本研究克隆了Lin28B基因启动子区序列并进行生物信息学分析,构建了Lin28B基因启动缺失载体初步了解了启动子的结构与功能。最后,本研究通过分析多浪羊下丘脑甲基化状态与转录因子SP1、Egr1来进一步阐明对Lin28B基因的转录调控作用。本研究的主要结果如下:本研究通过构建多浪羊Lin28B基因CDS区序列的载体,并将其转染至绵羊卵巢颗粒细胞中,发现Lin28B过表达抑制了其通路基因Let7-b和Let7-g的表达,同时促进了雌二醇的分泌和绵羊卵巢颗粒细胞的增殖。本研究克隆了多浪羊Lin28B启动子区3?000 bp,并通过生物信息学分析发现,该序列中存在1个Cp G岛,存在4个转录起始位点,并且包含多个与初情期转录调控相关的转录因子。本研究还构建了启动子缺失片段载体,通过双荧光素酶检测发现,Lin28B基因的核心启动子区位于-837～-338 bp,同时核心启动子区存在SP1、Egr1等多个与初情期调控相关转录因子。通过亚硫酸氢盐测序(BSP)方法,本研究对多浪羊下丘脑Lin28B基因启动子区Cp G岛的甲基化进行了检测。采用荧光定量PCR方法检测了Lin28B在多浪羊下丘脑三个阶段初情期前、初情期和初情期后的表达量。结果表明,从初情期前到初情期后,甲基化水平增加,而Lin28B表达水平下降,表明Lin28B表达与启动子甲基化水平呈负相关。方差分析显示,在初情期前到初情期后,Cp G5、Cp G 7和Cp G9的甲基化状态存在显著差异(P<0.05)。本试验数据表明,Lin28B的表达通过启动子Cp G岛的去甲基化而增加,其中Cp G5、Cp G7和Cp G9被认为是关键的调控位点。本研究构建了SP1和Egr1点突变载体及Egr1过表达载体,通过双荧光素酶检测发现,缺失SP1或者Egr1单个转录因子,Lin28B启动子的转录活性显著降低,其中Egr1突变后转录活性下降的更为显著;通过过表达Egr1载体可以看出,Lin28B基因启动子的活性显著升高。因此,初步推断转录因子SP1和Egr1对Lin28B基因的转录调控具有重要的作用。综上所述,本研究表明了,Lin28B基因在绵羊卵巢颗粒细胞中过表达后对Let7-b、Let7-g及雌二醇有一定的影响。并且本研究也表明,甲基化状态和转录因子SP1、Egr1对可以直接影响Lin28B基因的转录。因此,本研究阐明了甲基化状态和转录因子SP1、Egr1参与调控Lin28B基因转录的调控机制,从而为绵羊Lin28B基因对初情期启动调控的机制提供理论基础。

关键词：多浪羊初情期 Lin28B启动子转录因子甲基化

多浪羊GnRHR基因克隆、初情期组织表达研究及生物信息学分析

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中国畜牧杂志 2022年第6期58卷 149-154页

作者：张继虎隋志远李庆瑾张志帅邢凤塔里木大学动物科学学院新疆阿拉尔843300 新疆生产建设兵团塔里木畜牧科技重点实验室新疆阿拉尔843300

本研究旨在克隆多浪羊GnRHR(Gonadotropin Releasing Hormone Receptor,GnRHR)基因编码区,并用得到的CDS序列进行生物信息学分析,同时测定与繁殖相关组织中GnRHR基因的表达情况。利用RT-PCR和TA克隆的方法获得多浪羊GnRHR基因的编码区域... 详细信息

本研究旨在克隆多浪羊GnRHR(Gonadotropin Releasing Hormone Receptor,GnRHR)基因编码区,并用得到的CDS序列进行生物信息学分析,同时测定与繁殖相关组织中GnRHR基因的表达情况。利用RT-PCR和TA克隆的方法获得多浪羊GnRHR基因的编码区域,采用实时荧光定量PCR方法检测GnRHR基因在多浪羊初情期前、初情期和初情期后下丘脑、垂体、子宫、卵巢和输卵管5种组织的表达情况。本研究成功克隆获得多浪羊GnRHR基因编码区域。多浪羊GnRHR基因CDS序列长987 bp,编码328个氨基酸,与绵羊的同源性最高;对该序列进行生物信息学分析显示该蛋白分子式为C_(1762)H_(2696)N_(432)O_(446)S_(20);理论等电点(pI)为9.39;不稳定指数为32.51,为稳定疏水性蛋白;具有7个跨膜区域;二级结构主要为α-螺旋及无规则卷曲。荧光定量PCR检测到多浪羊GnRHR基因在初情期及初情期前后3个时期5种组织均有表达,垂体和卵巢高表达;初情期时垂体相对表达量极显著高于初情期前及初情期后。本研究结果为进一步深入了解GnRHR基因在绵羊初情期启动过程中发挥的作用及其具体功能提供依据。

关键词：多浪羊 GnRHR 克隆组织表达生物信息学分析

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平泉县:“五个围绕”找准组织工作着力点

共产党员（河北） 2014年第11期 16-17页

作者：隋志远

平泉县围绕党员、干部、人才、组织、自身建设等工作,加强基层组织建设。围绕群众反映强烈的问题,开展群众路线教育活动。坚持边学边查边改,把学习教育贯穿始终、把正风肃纪贯穿始终、把解决问题贯穿始终、把建章立制贯穿始终,集中整治... 详细信息

平泉县围绕党员、干部、人才、组织、自身建设等工作,加强基层组织建设。围绕群众反映强烈的问题,开展群众路线教育活动。坚持边学边查边改,把学习教育贯穿始终、把正风肃纪贯穿始终、把解决问题贯穿始终、把建章立制贯穿始终,集中整治"四风"的突出问题,实施"十个专项整治";集中办好关系群众切身利益的问题。

关键词：学习教育工作着力点基层组织路线教育自身建设干部培养边查边改选人选拔任用机制党政正职

基于S2SH框架的BLOG系统的设计与实现

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计算机光盘软件与应用 2014年第2期17卷 257-258页

作者：隋志远中国海洋大学青岛山东266100 烟台工程职业技术学院山东烟台264006

本文介绍了博客网站设计的背景和意义,然后针对博客系统中的核心技术做了深入研究,并提出并设计了一个基于S2SH框架结构的网络博客系统,该系统整合了数据库技术、Java EE技术和网站开发技术。经测试,该系统比已有的博客系统有更好的安... 详细信息

本文介绍了博客网站设计的背景和意义,然后针对博客系统中的核心技术做了深入研究,并提出并设计了一个基于S2SH框架结构的网络博客系统,该系统整合了数据库技术、Java EE技术和网站开发技术。经测试,该系统比已有的博客系统有更好的安全性、模块开发性和跨平台性。

关键词： S2SH 博客系统功能设计

基于振动的土木工程结构损伤诊断识别方法研究

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江西建材 2017年第17期 14-15页

作者：隋志远甘肃华美工程咨询服务有限公司甘肃兰州730030

土木工程结构的安全性能检测和评判对于我国的建筑安全和道路安全显得十分重要。进入二十一世纪以来,我国城市的现代化步伐越来越快,但是国内仍有不少始建于上个世纪七八十年代的建筑和桥梁道路,这些交通办公设施经过几十年的使用,是否... 详细信息

土木工程结构的安全性能检测和评判对于我国的建筑安全和道路安全显得十分重要。进入二十一世纪以来,我国城市的现代化步伐越来越快,但是国内仍有不少始建于上个世纪七八十年代的建筑和桥梁道路,这些交通办公设施经过几十年的使用,是否已经存在较严重的安全隐患或者已经出现了安全问题,这些都和我们的生活息息相关。本文对于振动的土木工程结构损伤的诊断方法进行了介绍,并分析了这些诊断识别方法优点和不足,最后对这些诊断技术的发展前景进行了展望。

关键词：振动结构土木工程结构损伤诊断识别方法

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一种基于FPGA的雷达视频信号的模拟方法

硅谷 2008年第15期 25-25页

作者：隋志远邱军海烟台工程职业技术学院

雷达信号视频信号对于雷达信号处理系统的调试、标校、性能检测有重要的意义。采用基于FPGA的DDS软件编程实现了雷达视频信号的模拟,并以雷达相参视频信号和雷达非相参视频信号的模拟为例,详细分析了该方法实现雷达信号模拟的原理及具... 详细信息

雷达信号视频信号对于雷达信号处理系统的调试、标校、性能检测有重要的意义。采用基于FPGA的DDS软件编程实现了雷达视频信号的模拟,并以雷达相参视频信号和雷达非相参视频信号的模拟为例,详细分析了该方法实现雷达信号模拟的原理及具体过程。最后给出了雷达视频信号模拟的部分实验结果。

关键词：雷达信号模拟 FPGA DDS

QoS模型参数与Internet网络性能研究

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软件工程师 2009年第10期 37-39页

作者：陈娅冰隋志远烟台工程职业技术学院山东烟台264006

Internet优秀的可测量性和鲁棒性部分的源于Internet拥塞控制中端到端的本质。但是,单独的端到端的拥塞控制却无法阻止拥塞崩溃和网络应用中非响应流的不公平行为,从而在网络内部节点中产生了一种新的机制,主动队列管理(AQM)。这种包调... 详细信息

Internet优秀的可测量性和鲁棒性部分的源于Internet拥塞控制中端到端的本质。但是,单独的端到端的拥塞控制却无法阻止拥塞崩溃和网络应用中非响应流的不公平行为,从而在网络内部节点中产生了一种新的机制,主动队列管理(AQM)。这种包调度机制成功的使IP层参与到拥塞控制中来,通过主动早期标记"尽力传输"网络拥塞状况,改善了网络质量并使延迟和丢包率降低。

关键词：拥塞控制主动队列管理服务质量

多浪羊CNP基因克隆及其在初情期组织表达特性分析

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中国畜牧兽医 2022年第4期49卷 1402-1412页

作者：张志帅隋志远张继虎李庆瑾邢凤塔里木大学动物科学学院阿拉尔843300 新疆生产建设兵团塔里木畜牧科技重点实验室阿拉尔843300

【目的】克隆多浪羊C型利钠肽(CNP)基因,并进行生物信息学分析,探讨其在多浪羊初情期启动前后下丘脑、垂体、输卵管、卵巢、子宫中的表达规律,以期为研究CNP基因在多浪羊初情期启动过程中的作用机制提供参考。【方法】参考GeneBank中绵... 详细信息

【目的】克隆多浪羊C型利钠肽(CNP)基因,并进行生物信息学分析,探讨其在多浪羊初情期启动前后下丘脑、垂体、输卵管、卵巢、子宫中的表达规律,以期为研究CNP基因在多浪羊初情期启动过程中的作用机制提供参考。【方法】参考GeneBank中绵羊CNP基因的序列(登录号:XM_027974523.1)设计引物,以初情期前、初情期、初情期后的多浪羊为试验对象,采用RT-PCR技术扩增多浪羊CNP基因并进行克隆测序;用DNAMAN软件同其他物种进行相似性比对,并使用Mega 5.0构建系统发育树。用生物信息学软件分析CNP基因的核苷酸序列及其编码蛋白的疏水性、信号肽、磷酸化位点、跨膜结构域等理化性质和二级结构、三级结构信息;用实时荧光定量PCR技术检测多浪羊下丘脑、垂体、输卵管、卵巢、子宫中CNP基因的表达量。【结果】多浪羊CNP基因序列大小为2227 bp,其中包括5′-UTR 50 bp、3′-UTR 914 bp和CDS区1263 bp。相似性比对和系统发育树结果显示,多浪羊与山羊的亲缘关系最近,与鸡的亲缘关系最远;多浪羊CNP基因共编码420个氨基酸,其编码蛋白是亲水性蛋白质,无跨膜结构域和信号肽。多浪羊CNP蛋白的二级结构主要是α-螺旋和无规则卷曲;三级结构预测显示CNP蛋白无配体结构;实时荧光定量PCR结果显示,在初情期启动的3个发育阶段,下丘脑中CNP基因表达量显著高于其他组织(P<0.05);初情期下丘脑中CNP基因的表达量显著低于初情期前(P<0.05);子宫中初情期前CNP基因的表达量显著高于初情期和初情期后(P<0.05)。【结论】本研究成功克隆了多浪羊CNP基因,其主要在下丘脑和子宫中表达;在初情期前、初情期、初情期后的发育过程中,下丘脑组织中CNP基因的表达量先降低再升高,提示CNP基因可能在初情期的启动过程中参与调控。

关键词：多浪羊 C型利钠肽基因克隆

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平泉民主生活会出实招见实效开出新气象 007

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