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拟除虫菊酯降解酶表面展示工程菌的构建及其应用研究

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拟除虫菊酯降解酶表面展示工程菌的构建及其应用研究

作者：陆柳萃广西大学

学位级别：硕士

拟除虫菊酯类农药是目前世界上使用最广泛的杀虫剂之一,在环境中的残留和积累,给人类健康和生态系统造成了巨大的威胁。生物降解因为其高效、安全、无二次污染,已成为农药残留修复的有效措施。本研究基于细胞表面展示技术,以来源于铜绿... 详细信息

拟除虫菊酯类农药是目前世界上使用最广泛的杀虫剂之一,在环境中的残留和积累,给人类健康和生态系统造成了巨大的威胁。生物降解因为其高效、安全、无二次污染,已成为农药残留修复的有效措施。本研究基于细胞表面展示技术,以来源于铜绿假单胞菌GF31的拟除虫菊酯降解酶(Aps)作为目的蛋白,尝试构建大肠杆菌和酿酒酵母表面展示工程菌,对其进行工程优化并应用于环境中残留拟除虫菊酯农药的去除。大肠杆菌具有清晰的遗传背景、简单成熟的遗传操作技术令其在表面展示系统中有着独特的优势。本研究通过筛选表达质粒、载体蛋白和宿主菌,最终获得六种具有活性的大肠杆菌表面展示工程菌,其中活性最高的是工程菌R-22b-InaKN-Aps,活性达到0.16 U/OD/mL。然后采用细胞分级分离电泳和免疫荧光分析等技术证明了融合蛋白InaKN-Aps准确定位在大肠杆菌的细胞表面,表明成功构建了拟除虫菊酯降解酶Aps的大肠杆菌表面展示工程菌。酿酒酵母菌因其生态安全性使其能够应用于食品及环境工业。本研究通过N端和C端融合的方式,构建了两种具有活性的酿酒酵母表面展示工程菌EBY100-pYD1-Aga2N-Aps和EBY100-pYD1-Aga2C-Aps,其酶活性分别为0.25 U/OD/mL和0.12 U/OD/mL。采用Western blot、免疫荧光分析和流式细胞分选等技术证明了融合蛋白Aga2-Aps准确定位在酿酒酵母的细胞表面,表明成功构建了拟除虫菊酯降解酶Aps的酿酒酵母表面展示工程菌。对构建的表面展示工程菌进行催化工艺优化,结果表明,三种表面展示工程菌(R-22b-InaKN-Aps、EBY100-pYD1-Aga2N-Aps和EBY100-pYD1-Aga2C-Aps)的最适反应温度为60℃,最适pH为9.0,且在最适条件下重复利用十个批次后,均能保持初始酶活性的70%以上,具有良好的可重复利用性;三种工程菌均能能降解五种常用的拟除虫菊酯农药,具有良好的底物广谱性,其中对高效氯氰菊酯的降解效果最好,降解速率分别为35.9μmol·L·d,33.16μmol·L·d和28.99μmol·L·d。进一步研究发现,工程菌EBY100-pYD1-Aga2N-Aps和EBY100-pYD1-Aga2C-Aps可作为洗涤剂去除生菜和樱桃番茄中残留的高效氯氰菊酯农药,为食品加工工业和家庭的果蔬农药残留去除提供一种新选择。本研究利用表面展示技术,以拟除虫菊酯降解酶Aps作为目的蛋白,构建了细菌和真菌两种表面展示系统,获得三种新型的表面展示工程菌,具有比原始菌株GF31更高的降解活性。与直接利用降解酶相比,表面展示工程菌可重复使用,且价格更低廉。本研究为拟除虫菊酯类农药的原位生物修复提供理论基础,也为其它疏水性有机污染物的环境生物修复提供有益的借鉴。

关键词：细胞表面展示大肠杆菌酿酒酵母拟除虫菊酯降解酶农药降解

急性冠脉综合征患者冠脉介入治疗前后左心功能改变随访分析

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急性冠脉综合征患者冠脉介入治疗前后左心功能改变随访分析

作者：陆柳伊广西医科大学

学位级别：硕士

目的随访急性冠脉综合征患者行经皮冠状动脉支架置入术（PCI）前后左心功能改变状况，了解其心功能改善情况。方法选取33例急性心肌梗死合并左心功能不全患者（MI组），行冠状动脉支架置入术，并于术前和术后9个月行彩色多普勒超声心... 详细信息

目的随访急性冠脉综合征患者行经皮冠状动脉支架置入术（PCI）前后左心功能改变状况，了解其心功能改善情况。方法选取33例急性心肌梗死合并左心功能不全患者（MI组），行冠状动脉支架置入术，并于术前和术后9个月行彩色多普勒超声心动图检测，测量左心室收缩功能指标左心室舒张末内径(LVDd)、左心室收缩末内径(LVDs)、左心室缩短分数(FS)、左心室射血分数(EF)、每搏量（SV）、有效心输出量（CO）、左心室舒张末容积(EDV)，对比PCI术前后左心功能的改变;选取35例不稳定型心绞痛且无左心功能不全患者（UA组），行冠状动脉支架置入术（PCI），并于术前和术后9个月内行彩色多普勒超声心动图检测，测量左心室收缩功能指标，分别比较两组术前与术后左心功能指标的变化，了解两组患者心功能改善情况。结果68例成功实施PCI术的患者，术后9个月内左心收缩功均有不同程度的改善，LVDd较术前变小（P<0.05），EF值增大（P<0.05），EDV变小（P<0.05）;心肌梗死合并左心功能不全患者组，EF值明显提高（P<0.01）。结论PCI术可改善冠心病患者近期内的左室收缩功能,特别是心肌梗死合并左心功能不全患者，但仍需更大样本的证实。

关键词：急性冠脉综合征经皮冠状动脉冠脉介入超声心动图

天然产物荜拔酰胺和查尔酮类化合物的设计、合成和抗肿瘤活性研究

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天然产物荜拔酰胺和查尔酮类化合物的设计、合成和抗肿瘤活性研究

作者：陆芳柳上海应用技术大学

学位级别：硕士

荜拔酰胺是一种天然生物碱,查尔酮是一种荜拔酰胺类似物,它们都以独特的药理活性常作为药物先导化合物。本课题组前期研究合成活性优异的荜拔酰胺衍生物PL11和荜拔查尔酮衍生物ZM198。为了进一步探讨其构效关系、探究荜拔酰胺的内酰胺... 详细信息

荜拔酰胺是一种天然生物碱,查尔酮是一种荜拔酰胺类似物,它们都以独特的药理活性常作为药物先导化合物。本课题组前期研究合成活性优异的荜拔酰胺衍生物PL11和荜拔查尔酮衍生物ZM198。为了进一步探讨其构效关系、探究荜拔酰胺的内酰胺扩环或缩环对活性的影响、提高ZM198稳定性等,本论文分别对荜拔酰胺和查尔酮进行结构优化。1.保留荜拔酰胺Michael受体关键活性位点C2-C3、C7-C8,对内酰胺环部分进行扩环或缩环改造,合成了15个饱和或不饱和荜拔酰胺衍生物,并对四种肿瘤细胞株Panc-1(人胰腺癌细胞)、Miacapa-2(人胰腺癌细胞)、PC3(人前列腺癌细胞)、Bel7404(人肝癌细胞)进行体外抗肿瘤活性测试。测试结果表明,含不饱和内酰胺衍生物(PL10、PL11、PL12、PL13、PL14、PL15)对四种肿瘤细胞株(Miacapa2、PC3、Bel7404、Panc1)的活性都优于荜拔酰胺;含饱和内酰胺荜拔衍生物(PL1、PL2、PL3、PL4、PL5、PL6、PL7、PL8、PL9)对四种肿瘤细胞株未显示出明显抑制活性。其中,不饱和七元环内酰胺衍生物的活性最好,比荜拔酰胺活性提高2-53倍,不饱和六元环内酰胺衍生物的活性提高2-12倍,不饱和八元环内酰胺衍生物的活性提高1-20倍。不饱和六元、七元内酰胺环C2位上氯取代都要优于溴取代;八元内酰胺环C2位上溴取代都要优于氯取代;饱和内酰胺衍生物活性丧失,验证了C2-C3位是此类结构抗肿瘤活性关键药效团。此外,不饱和荜拔酰胺衍生物Miacapa-2(人胰腺癌细胞)较敏感,对Bel7404(人肝癌细胞)敏感性较弱。2.荜拔查尔酮衍生物ZM198进行氘代结构优化,合成了6个氘代-硝基吲哚查尔酮衍生物。体外抗肿瘤活性测试表明,它们对结肠癌HCT116活性出色,均小于1μM,特别是化合物FC141(IC=12.5 nM)和FC144(IC=13.4 nM)活性优于ZM198(IC=23.9 nM)。

关键词：荜拔酰胺查尔酮化学合成药理活性构效关系

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紫薇雄性不育生理特性及相关基因表达分析

紫薇雄性不育生理特性及相关基因表达分析

作者：陆柳淑中南林业科技大学

学位级别：硕士

紫薇(Lagerstroemia indica)作为园林布景中重要的观花乔木,具有观赏价值。有学者选育出不育品种‘湘韵’紫薇,其不育主要表现为雄性不育和雌性败育,目前已有研究从细胞形态学上探明了‘湘韵’紫薇不育特征,但对紫薇不育品种花粉败育机... 详细信息

紫薇(Lagerstroemia indica)作为园林布景中重要的观花乔木,具有观赏价值。有学者选育出不育品种‘湘韵’紫薇,其不育主要表现为雄性不育和雌性败育,目前已有研究从细胞形态学上探明了‘湘韵’紫薇不育特征,但对紫薇不育品种花粉败育机理研究的报道较少,且在生理特性上的败育特征尚不清楚。本研究将对不育品种花粉败育做出进一步的探究,明确其雄性不育特征及时期,探索导致产生雄性不育的原因,为培育雄性不育系材料,提高紫薇杂交优势利用提供理论基础。本文以可育品种‘红叶’紫薇和不育品种‘湘韵’紫薇为研究对象,对其进行雄性不育表观形态、细胞组织结构、生理特性及相关基因表达研究。主要研究结果如下:(1)‘湘韵’紫薇花器官形态正常,花药可正常散粉,但多数花粉粒无活力,无法正常萌发。大多数长、短雄蕊花粉粒存在干瘪、畸形的情况,其花粉粒的大小、萌发沟长及萌发沟脊宽几个性状指标与‘红叶’紫薇存在显著差异。‘湘韵’紫薇减数分裂过程呈现异常,在四分体时期出现较多不规则的四分体结构,并且在单核晚期时药室内绒毡层细胞存在降解延迟的情况,单核晚期和花粉成熟期时花粉粒形态皱缩不够饱满,花粉内含物减少。(2)‘湘韵’紫薇蛋白质和脯氨酸含量随着花蕾的发育不断增加,而甘油三酯和可溶性糖含量都呈现先增加在减少的变化趋势。与‘红叶’紫薇相比,‘湘韵’紫薇四种营养物质的含量在整个发育过程中出现了不同程度的亏缺,且在单核晚期和花粉成熟期差异愈加显著。(3)在‘湘韵’紫薇活性氧代谢中,过氧化物酶(POD)、过氧化物歧化酶(SOD)及过氧化氢酶(CAT)三种酶活性变化趋势各不相同,总体呈现下降趋势。过低的POD和SOD活性打破了活性氧的平衡,导致膜质稳定性发生紊乱从而影响了育性,‘湘韵’紫薇CAT活性在四分体时期和单核早期大幅度减弱的变化使膜质过氧化受到进一步损害,其中过低的丙二醛含量可能是‘湘韵’紫薇做出的保护反应。(4)‘湘韵’紫薇茉莉酸和吲哚乙酸含量在花蕾发育过程中逐渐减少,而脱落酸和赤霉素含量则反之。在花蕾发育的整个过程中,‘湘韵’紫薇茉莉酸、脱落酸及赤霉素含量在不同时期均显著低于‘红叶’紫薇含量,而‘湘韵’紫薇吲哚乙酸含量在发育前两个时期高于‘红叶’紫薇含量。(5)6个CAT相关基因在‘湘韵’紫薇整个发育时期表达水平基本一致,均在‘湘韵’紫薇花粉发育后两个期有较高的表达量,与同时期在‘红叶’紫薇中的表达量存在显著差异。在花粉发育相关基因TPD1、NPU1、EFD1、NEF1、DEX1、RPG1的表达结果显示,.不同基因在‘湘韵’紫薇单核晚期均出现最大表达量,与对应时期可育品种表达量差异显著。

关键词：紫薇雄性不育花粉发育物质代谢活性氧代谢

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基于离群检测的学生学习状态分析

基于离群检测的学生学习状态分析

作者：陆柳生华中科技大学

学位级别：硕士

教育数据挖掘在我国目前尚处在理论探索阶段,大部分研究都是理论描述和可行性分析,应用研究很少。本文立足于所研究课题,从教育数据挖掘的应用研究入手,探索数据挖掘技术在学生学习状态分析中的应用。在我国高校存在学生工作者与学生比... 详细信息

教育数据挖掘在我国目前尚处在理论探索阶段,大部分研究都是理论描述和可行性分析,应用研究很少。本文立足于所研究课题,从教育数据挖掘的应用研究入手,探索数据挖掘技术在学生学习状态分析中的应用。在我国高校存在学生工作者与学生比例失衡的问题,导致教育管理资源得不到有效利用,本文旨在解决一个实际的问题:给哪些学生分配稀缺的个性化学习指导的教育管理资源,以助其顺利升学毕业,让有限的教育管理资源发挥更大的价值。本文使用基于离群点检测的学生学习状态分析找出学习状态异常的学生,为教育管理资源的分配提供依据。为获取离群学生,针对本问题设计了混合两阶段离群点检测算法,首先使用基于密度的局部离群点检测算法计算出每名学生的局部离群点因子,再使用基于统计的离群点检测算法进行二元判断以获取离群学生,该算法获取的离群学生中绝大部分是学习状态异常的学生,但学习状态异常的学生的总数偏少。针对该算法存在的不足从多方面进行改进,从数据角度,添加人工属性扩大知识库;从算法角度,使用缩减迭代对不断减小的数据集进行迭代离群点检测;最后将添加人工属性和缩减迭代融合形成一种综合的改进。在本问题中,丢失学习状态异常的学生的代价很大,相比混合两阶段离群点检测算法,改进后的算法找出了更多学习状态异常的学生,在覆盖人数上实现了对原始算法的优化。实例分析表明,使用混合两阶段离群点检测算法或其改进算法,基于离群点检测的学生学习状态分析都能有效地找出学习状态异常的学生,其结果可以辅助高校学生工作者更加科学、高效地管理。

关键词：教育数据挖掘学习状态分析离群点检测考试成绩

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特殊侵权中第三人侵权责任研究

特殊侵权中第三人侵权责任研究

作者：陆柳卿南京师范大学

学位级别：硕士

特殊侵权包括了适用过错责任中的过错推定责任(为《中华人民共和国侵权责任法》(以下简称《侵权责任法》)第6条第2款)和无过错责任(《侵权责任法》第7条)的侵权行为,第三人是相对于侵权责任中起间接辅助作用的第二人这一概念而确立的。... 详细信息

特殊侵权包括了适用过错责任中的过错推定责任(为《中华人民共和国侵权责任法》(以下简称《侵权责任法》)第6条第2款)和无过错责任(《侵权责任法》第7条)的侵权行为,第三人是相对于侵权责任中起间接辅助作用的第二人这一概念而确立的。《侵权责任法》中,特殊侵权行为涉及第三人侵权的条文有第40、43、44、68、75、83、85条,上述规定形成了特殊侵权行为的法律适用体系。然而,仔细推敲其原理,却存在难以自圆其说的情形,如过错推定中第三人侵权承担垫付责任违反法理,补充责任违背现代侵权法中过错责任的基本精神。这不仅导致司法实践中,在法律适用上的困惑,更造成立法上空白时适用体系解释上的难题,如高度危险责任与第三人过错责任的竞合时,两种责任之间关系的处理,从而导致司法中判例存在完全不同的判决。国内理论界鲜有学者将特殊侵权中第三人侵权情况进行系统性的探讨,司法界也少见有人对此进行过梳理。值此民法典即将付诸审议之时,笔者不揣冒昧,认为应在过错推定责任中,回归责任基础,统一适用过错责任归责原则下的构成要件,针对第三人侵权问题,成立过错推定与第三人过错侵权责任的竞合侵权行为,理应依《侵权责任法》第8条至第14条规定予以处理,根据具体案情,确立双方各自对受害人的责任及其内部责任分配。当过错推定责任人能够证明损害系完全因第三人过错行为所致时,过错推定责任主体因欠缺因果关系和过错要件而不能成立侵权行为。对《侵权责任法》第40条规定的侵权责任应按竞合侵权行为的处理规则统一处理;而《侵权责任法》第85条规定中,在因第三人过错导致的损害赔偿时,物件所有人、管理人的责任因其无过错应予以排除。而《侵权责任法》第43条、第44条、第83条规定的不真正连带适用规则应统一适用于所有无过错责任与过错责任竞合的情形来填补立法的空白。因此,更应当对特别法中涉及第三人侵权相关的条款进行修改。在不真正连带责任的诉讼上程序上,如果原告坚持将两者同时诉至法院,不愿进行选择诉讼时,为节约司法资源,应予以受理,并在裁判时判决两者的责任为无过错责任人或过错责任人向原告承担赔偿责任。若无过错责任人先行赔偿的,有权在赔偿后向有过错的第三人追偿。若两者的责任范围根据各自的构成要件不一致的,无过错责任人仅在重合的范围内向过错责任人追偿。在无过错责任人同时也存在过错行为时,原告有选择诉由的权利,如果原告未明确的,应在法院释明后予以选择。原告选择过错责任诉讼的,其与第三人的过错责任应依《侵权责任法》第8条至第14条规定,视具体情形进行处理;若原告选择无过错责任追究其责任的,应依不真正连带责任的处理方式处理其与第三人过错责任之间的关系。

关键词：特殊侵权第三人侵权不真正连带

农业银行G分行养老金融业务客户需求调查研究

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农业银行G分行养老金融业务客户需求调查研究

作者：陆颖柳广西大学

学位级别：硕士

“银发时代”的到来加快国家养老保障体系的建设步伐,习近平总书记要求全社会要齐心协力投入解决全生命周期养老供需矛盾工作中。为积极响应国家号召,我国金融业深化金融供给侧改革,在养老金融领域提前布局、加快发展,切实为推动养老服... 详细信息

“银发时代”的到来加快国家养老保障体系的建设步伐,习近平总书记要求全社会要齐心协力投入解决全生命周期养老供需矛盾工作中。为积极响应国家号召,我国金融业深化金融供给侧改革,在养老金融领域提前布局、加快发展,切实为推动养老服务事业发展提供必要的金融支持。中国农业银行作为大型国有商业银行,明确提出养老金融为新兴发展业务,要求各分行以服务“三农”为宗旨,振兴乡村养老金融市场,将养老金融纳入业务发展规划中。基于上述研究背景,本文在总结国内外相关研究成果的基础上提出农业银行G分行养老金融业务需求及影响因素这一研究问题,对布局所在经营区域内养老金融业务市场发展具有重要意义。为此,本文首先在梳理商业银行养老金融业务发展相关文献基础上对G分行养老金融发展概况进行阐述;其次将马斯洛需求层次理论、养老储蓄生命周期等理论联系实际,运用调查统计法深入实地调查研究G分行客户养老金融业务需求情况并剖析其需求特征;经过Logistic回归分析法研究分析影响三大业务板块中需求最大的养老金融业务影响因素;最后根据研究结果结合农业银行G分行实践,提出针对G分行健康发展养老金融业务的对策和建议。经调查研究得出如下结论:第一,客户对农业银行G分行养老金融业务需求意愿较大,存在一定市场需求。第二,客户养老金融需求呈现多样化,且不同的个人特征、认知特征和养老投资理财偏好特征对养老金融业务需求不同。三大业务板块中,养老储蓄、“健康管家”增值服务和养生健康类养老消费贷款3种业务需求最大。第三,通过Logistic模型回归分析发现,养老储蓄类业务需求意愿受存款储蓄、银行等养老投资理财方式等4个因素显著影响;“健康管家”养老增值服务需求受到存款储蓄、理财产品、支付宝等网络平台等6个因素显著影响;养生健康类养老金融消费贷款业务需求则受到学生、认知程度、养老投资理财现状等5个因素显著影响。因此,建议农业银行G分行统筹整合三大养老金融板块零碎业务,结合调研和回归分析结果针对不同养老金融业务板块改进和优化G分行养老金融业务发展策略。

关键词：养老金融农业银行客户需求影响因素 Logistic回归

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水下机器人运动控制与路径规划研究

水下机器人运动控制与路径规划研究

作者：陆柳延扬州大学

学位级别：硕士

我国江河湖海水域众多、资源丰富,是最具有发展潜力的战略空间,我国政府已把海洋开发作为21世纪的国民经济与社会发展战略重点之一。由于水下环境的复杂性和不确定性,水下机器人被研究用于代替人类潜入水中完成某些操作。对水下机器人... 详细信息

我国江河湖海水域众多、资源丰富,是最具有发展潜力的战略空间,我国政府已把海洋开发作为21世纪的国民经济与社会发展战略重点之一。由于水下环境的复杂性和不确定性,水下机器人被研究用于代替人类潜入水中完成某些操作。对水下机器人进行运动控制和局部的路径规划,是使机器人在未知环境中通过手动或自动的控制,能够行驶到设定的目标位置完成水下观测任务的关键技术。本文研究对象为水底观测型有缆ROV,其外形设计为封闭式,且具有水动力性能优良的流线型外形,通过尾部螺旋桨提供水下机器人的推进动力,1对水平翼和1个垂直舵控制水下机器人的运动方向。本文首先参照鱼雷的数学建模思想,建立了水下机器人的空间运动学模型,并根据实际工作需求和控制特点进行简化,得出深度、艏向角和纵倾角等控制参数的控制模型。在此基础上,分别建立定深、定向和定纵倾角3个独立的运动控制系统模型,并采用经典PID控制算法完成了水下机器人的运动控制仿真,为后续控制器的设计提供了理论依据。同时根据仿真过程中加入扰动信号后体现出的系统抗干扰能力较薄弱的特点,提出采用模糊自适应PID控制算法对控制系统进行优化,最后通过仿真验证了该算法的有效性。其次,本文讨论了基于模糊算法的水下机器人局部路径规划,详细介绍了该路径规划算法的原理及具体实现过程。提出根据障碍物的不同特征对应采用不同的模糊控制规则库,优化机器人避障系统。通过Matlab仿真环境,模拟测距声呐对环境进行探测,得到一定范围内的障碍物与目标信息,经模糊控制器实时调整水下机器人的运动偏转角度,有效地避开障碍物,实现机器人准确到达预定目标点的目的,验证了该算法的可行性。最后,本文为实现水下机器人的实际工程运用,建立了水下机器人的运动控制平台。详细介绍了水面以及水下的软、硬件系统,编译了以PLC作为水下控制系统处理器的模块程序,实现了接收各类传感器信息以及控制水下运动的任务。并以Visual C#作为上位机开发工具设置监控界面并编写通信程序,实现人机交互控制。本文通过计算机和Matlab仿真平台得出的关于水下机器人的运动控制和路径规划的结论,为后续者进行水下机器人水域实验提供了理论基础。

关键词：水下机器人数学建模 PID控制局部避障模糊算法运动仿真

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斯蒂芬·金小说的电影改编

电影文学 2010年第18期 96-97页

作者：梁明柳陆松广西大学外国语学院广西南宁530004 中国移动通信集团广西有限公司广西南宁530022

斯蒂芬.金是现代惊悚小说大师,其作品高居历年美国畅销书排行榜的榜首。斯蒂芬.金的小说也是好莱坞制片商的抢手货,目前已有超过70部电影和电视节目改编自他的作品。本文对斯蒂芬.金小说的电影改编进行了多元解读,电影给小说中描述的荒... 详细信息

斯蒂芬.金是现代惊悚小说大师,其作品高居历年美国畅销书排行榜的榜首。斯蒂芬.金的小说也是好莱坞制片商的抢手货,目前已有超过70部电影和电视节目改编自他的作品。本文对斯蒂芬.金小说的电影改编进行了多元解读,电影给小说中描述的荒诞际遇赋予了现实的意蕴,通过挖掘人类的精神危机,反衬对人性深层次的思考,同时也从文化产业的角度,探讨斯蒂芬.金小说的电影改编所实现的经济效益。

关键词：斯蒂芬·金小说电影改编多元解读文化产业