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诱导大鼠骨髓Thy-1^+ β_2M^-细胞分化为肝脏细胞

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中华血液学杂志 2005年第2期26卷 69-73页

作者：王韫芳南雪李艳华张锐闫舫岳文裴雪涛军事医学科学院输血医学研究所干细胞生物学研究室北京100850

目的探讨定向诱导大鼠骨髓来源的Thy1+β2M-细胞(bonemarrowderivedThy1+β2M-cell,BDTC)分化为成熟的、有功能的肝脏细胞及其可能的机制。方法分别采用Transwell培养板联合培养BDTC和丙烯醇(allylalcohol,AA)损伤的肝脏细胞,并用含有... 详细信息

目的探讨定向诱导大鼠骨髓来源的Thy1+β2M-细胞(bonemarrowderivedThy1+β2M-cell,BDTC)分化为成熟的、有功能的肝脏细胞及其可能的机制。方法分别采用Transwell培养板联合培养BDTC和丙烯醇(allylalcohol,AA)损伤的肝脏细胞,并用含有肝细胞生长因子和碱性成纤维细胞生长因子的条件诱导液单独培养BDTC,通过光镜和电镜观察BDTC的形态变化,免疫细胞化学和RTPCR检测BDTC诱导前后肝细胞特异性基因的表达;用靛青绿(indocyaninegreen,ICG)摄取、排泌实验及白蛋白、尿素分泌检测肝细胞的相关功能。结果联合培养及单独以条件诱导液培养7d,部分BDTC体积明显增大,出现大而圆的单个或多个细胞核,胞浆富含线粒体、内质网和糖原颗粒等;这些细胞表达幼稚或成熟肝细胞特异性的AFP、OV6、CK18等基因,并具有靛青绿摄取、排泌和分泌白蛋白、氨基代谢生成尿素等功能。结论大鼠BDTC在AA所致肝损伤环境中或在特定诱导体系内均可以向成熟的、有生理功能的肝脏细胞分化,而且该过程无需通过细胞融合而实现。

关键词：肝脏细胞诱导大鼠 β2M 骨髓白蛋白肝细胞分泌细胞融合细胞核

某海练场地帐篷微小气候动态变化及其对人体影响的初步调查

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中国职业医学 2001年第1期28卷 51-53页

作者：卢晓翠罗海吉邓红闫舫第一军医大学军卫教研室广东广州510515

南方某海岸位于热带地区，属湿热气候，气候特点为高温、高湿、多雨、强太阳辐射。但野外宿营情况下，外界气象因素对住所微小气候影响的具体数据缺乏。而在现代化机动作战条件下，部队往往需要在野外宿营。为保障南方近海区域野外宿营... 详细信息

南方某海岸位于热带地区，属湿热气候，气候特点为高温、高湿、多雨、强太阳辐射。但野外宿营情况下，外界气象因素对住所微小气候影响的具体数据缺乏。而在现代化机动作战条件下，部队往往需要在野外宿营。为保障南方近海区域野外宿营的卫生工作，我们对该区域某海练场内帐篷的微小气候变化及对指战员生理反应的影响进行了初步调查。1　方法与器材1.1　方法　选海练场内临海设营的A连的帐篷1(其周边全日掀起)和在距海岸500 m处设营的B营营区对角线四端距中心1/2处的周边全日掀起与放下的帐篷各1，观察从6：30到20：30每小时帐篷内高度1.5 m和0.7 m两处的气温、气湿、气流和辐射热的动态变化，并观察晨醒时、午休醒时居住人员的皮温(三点法)［1］、体温(腋温)、血压、心率，并询问其温热感觉，每帐篷测定7人。对帐篷的架设与地形进行一般性调查。1.2　仪器　阿斯曼通风干湿计、FSR-Ⅱ辐射热计、AM4201便携式数字风速计、WNY-01数字温度计、腕式电子血压计、水银口温计。1.3　统计方法　由SPSS统计软件系统处理，生理指标的比较用t检验，微小气候取算术平均数。

关键词：海练场地帐篷微小气候变化人体影响

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静脉溶栓治疗急性脑梗死31例临床效果分析

中外医疗 2013年第26期32卷 93-94页

作者：闫舫长春市中心医院神经内科吉林长春130000

目的探讨和研究r-tPA静脉溶栓在治疗急性脑梗死的治疗效果以及安全性和有效性。方法将该院收治的急性脑梗死患者62例随机分成rtPA组与对照组各为31例。对照组患者运应用低分子右旋糖酐另加复方丹参静脉滴注对于rtPA组患者,给予重组组织... 详细信息

目的探讨和研究r-tPA静脉溶栓在治疗急性脑梗死的治疗效果以及安全性和有效性。方法将该院收治的急性脑梗死患者62例随机分成rtPA组与对照组各为31例。对照组患者运应用低分子右旋糖酐另加复方丹参静脉滴注对于rtPA组患者,给予重组组织型的纤溶酶原激活物rtPA(爱通立),加入到生理盐水中静脉滴注,在90 min内滴完。在次日经过头颅CT证实没有出血以后,再使用低分子肝素每隔12 h进行一次腹部皮下注射,均治疗一周后对比治疗前、治疗后24 h、21 d两组间的差异。结果在患者治疗后24 h和21 d治疗组和对照组对比差异有统计学意义(P<0.01)。经过3个月治疗后,rtPA组临床治愈率为41.9%,对照组的临床治愈率为16.1%,两组中该项指标对比差异有统计学意义(P<0.01)。结论 r-tPA静脉溶栓对于治疗急性脑梗死患者,治疗效果确切,并具有以安全性和有效性特点,值得临床推广。

关键词：脑梗死静脉溶栓 rtPA 重组组织型的纤溶酶原

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脑卒中并发吸入性肺炎临床分析

吉林医学 2008年第13期29卷 1090-1091页

作者：闫舫长春市中心医院神经内科吉林长春130022

目的：探讨脑卒中并发吸入性肺炎的发病机制、诊断、治疗方法及其预防措。方法：对2003年1月1日~2007年12月31日收住我院的脑卒中并发吸入性肺炎患者的临床表现及治疗进行回顾性分析。结果：全部72例患者均为脑卒中并发吸入性肺炎,临床... 详细信息

目的：探讨脑卒中并发吸入性肺炎的发病机制、诊断、治疗方法及其预防措。方法：对2003年1月1日~2007年12月31日收住我院的脑卒中并发吸入性肺炎患者的临床表现及治疗进行回顾性分析。结果：全部72例患者均为脑卒中并发吸入性肺炎,临床表现主要为咳嗽,咯痰和发热。胸部X光检查表现为吸入部位的浸润影。反复多次发作43例,治疗后60例存活,12例死亡。结论：吸入性肺炎是导致脑卒中患者死亡和影响其功能恢复的最重要原因,必须重视早期预防,及时诊断和合理使用抗生素。阻断吸入是防治的关键。

关键词：吸入性肺炎脑卒中临床分析治疗方法

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转基因肝星状细胞株对肝细胞生长的支持作用

中华肝脏病杂志 2005年第1期13卷 45-48页

作者：王韫芳南雪李艳华张锐岳文闫舫裴雪涛军事医学科学院输血医学研究所干细胞生物学研究室北京100850

目的探讨转基因肝星状细胞株CFSC/HGF对大鼠肝细胞生长的支持作用.方法将大鼠原代肝细胞培养于稳定表达肝细胞生长因子(HGF)的肝星状细胞株CFSC/HGF所构建的饲养层上,连续动态观察肝细胞的形态、超微结构、白蛋白分泌、尿素合成以及吲... 详细信息

目的探讨转基因肝星状细胞株CFSC/HGF对大鼠肝细胞生长的支持作用.方法将大鼠原代肝细胞培养于稳定表达肝细胞生长因子(HGF)的肝星状细胞株CFSC/HGF所构建的饲养层上,连续动态观察肝细胞的形态、超微结构、白蛋白分泌、尿素合成以及吲哚氰绿摄取排泌功能的变化,同时与传统胶原贴壁培养的肝细胞进行比较,并通过半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测HGF受体c-Met表达的变化.结果共培养的肝细胞体外培养至7～10d时细胞增殖、白蛋白分泌及尿素合成达到峰值,以后逐渐下降,至35d时仍保持一定的存活和功能.与传统胶原上培养的肝细胞相比,其寿命、形态和功能的维持时间明显延长; RT-PCR结果显示,与CFSC/HGF饲养层细胞共培养1周后,肝细胞表面c-Met表达上调2.2 3倍.结论转基因肝星状细胞株CFSC/HGF对肝细胞较长时间内保持高活性、高密度的生长有显著的支持作用,CFSC/HGF诱导的肝细胞表面c-Met表达上调可能参与了该支持作用.

关键词：肝细胞 HGF 肝星状细胞 c-Met表达白蛋白胶原上调转基因饲养层共培养

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螺旋藻对提高热耐力的初步观察

中国公共卫生 1999年第5期15卷 436-437页

作者：罗海吉卢晓翠闫舫孙峻松第一军医大学军队卫生学教研室

观察螺旋藻（Ｓｐｉｒｕｌｉｎａ，ＳＰ）对提高高温环境下热耐力的作用，结果显示ＳＰ具有一定的提高热耐力作用，补充１．０ｇ／ｋｇ体重的ＳＰ，小鼠热致死时间比对照组延长。受热９０ｍｉｎ后，喂高剂量ＳＰ组和低剂量ＳＰ＋Ｌ－Ａ... 详细信息

观察螺旋藻（Ｓｐｉｒｕｌｉｎａ，ＳＰ）对提高高温环境下热耐力的作用，结果显示ＳＰ具有一定的提高热耐力作用，补充１．０ｇ／ｋｇ体重的ＳＰ，小鼠热致死时间比对照组延长。受热９０ｍｉｎ后，喂高剂量ＳＰ组和低剂量ＳＰ＋Ｌ－ＡＳＰ＋ＴＹｒ组小鼠肛温比对照组低０．３～０．５℃（Ｐ＜０．０５）。上述结果提示ＳＰ具有增强耐热能力。

关键词：高温螺旋藻热耐力

转基因肝星状细胞定向诱导骨髓Thy-1^+β_2M^-细胞向肝细胞分化

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科学通报 2004年第6期49卷 549-553页

作者：王韫芳南雪张锐李艳华岳文闫舫裴雪涛军事医学科学院输血研究所干细胞研究室北京100850

体内移植研究表明,骨髓来源的干细胞具有向成熟的肝细胞分化的能力。然而,成体干细胞向肝细胞诱导分化的效率、分化细胞的功能状态、微环境对细胞分析的影响等均存在许多疑问。以高效、稳定表达肝细胞生长因子的肝星状细胞株CFSC/HGF作... 详细信息

体内移植研究表明,骨髓来源的干细胞具有向成熟的肝细胞分化的能力。然而,成体干细胞向肝细胞诱导分化的效率、分化细胞的功能状态、微环境对细胞分析的影响等均存在许多疑问。以高效、稳定表达肝细胞生长因子的肝星状细胞株CFSC/HGF作为饲养细胞,成功地将大鼠骨髓来源的Thy-1+β2M-细胞(bone marrow derived Thy-1+β2M- cells,BDTCs)诱导为肝细胞,经RT-PCR和免疫荧光化学检测证实,该条件下诱导后的BDTCs表达幼稚或成熟肝细胞特异性的基因,分化细胞具有成熟肝细胞特有的靛青绿摄取排泌、氨基代谢和白蛋白分泌的功能,提示肝细胞生长因子、肝脏非实质细胞及其产生的细胞外基质为骨髓干细胞向肝细胞分化提供了适宜的微环境。这为以骨髓干细胞为基础的再生医学在终末期肝病治疗中的应用提供了理论和技术上的支持。

关键词：分化转基因肝星状细胞肝细胞生长因子微环境定向诱导肝病骨髓干细胞移植

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转基因肝星状细胞株的建立及生物学特性

中华实验外科杂志 2004年第12期21卷 1465-1467页

作者：王韫芳南雪李艳华张锐岳文闫舫裴雪涛北京军事医学科学院输血医学研究所干细胞生物学研究室 100850

目的　建立稳定表达肝细胞生长因子 (HGF)的肝星状细胞株CFSC/HGF。方法　构建携带hgf基因全长序列的重组逆转录病毒pMSCV HGF ,反复感染肝星状细胞系CFSC建立转基因肝星状细胞株。对建立的CFSC/HGF用逆转录聚合酶链反应 (RT PCR )和... 详细信息

目的　建立稳定表达肝细胞生长因子 (HGF)的肝星状细胞株CFSC/HGF。方法　构建携带hgf基因全长序列的重组逆转录病毒pMSCV HGF ,反复感染肝星状细胞系CFSC建立转基因肝星状细胞株。对建立的CFSC/HGF用逆转录聚合酶链反应 (RT PCR )和酶联免疫吸附试验 (ELISA)分别从基因和蛋白水平进行鉴定 ,并通过免疫细胞化学检测、细胞增殖活性测定 ,以及对人肝癌细胞HepG2的扩散试验等对其生物学特性进行初步研究。结果　构建了重组逆转录病毒质粒 pMSCV HGF及包装细胞株PT/HGF ,建立并筛选出HGF表达水平分别为0 .15、2 .2 3、5 .48、9.76μg/L的 4个细胞株CFSC/HGF ,细胞表达结蛋白和α 平滑肌肌动蛋白 ;随HGF表达水平不同 ,CFSC/HGF细胞增殖活性显示出明显的差别 ;CFSC/HGF培养上清可使HepG2细胞扩散 ,生长受抑。结论　建立了稳定表达hHGF的肝星状细胞株CFSC/HGF ,并对其生物学行为进行了初步鉴定。

关键词：转基因肝星状细胞株生物学特性肝细胞生长因子 CFSC/HGF 逆转录病毒载体

人HGF基因重组逆转录病毒表达载体及包装细胞株的构建和鉴定

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军事医学科学院院刊 2004年第3期28卷 205-208页

作者：王韫芳南雪岳文李艳华闫舫裴雪涛军事医学科学院野战输血研究所北京100850

目的 :构建携带肝细胞生长因子 (HGF)的逆转录病毒载体 ,并建立高效、稳定生产HGF的包装细胞株。方法 :以pcDNA3.0 HGF质粒为模板进行PCR反应扩增出HGF基因全长序列 ,亚克隆至逆转录病毒载体pMSCVneo构建重组逆转录病毒质粒 ,以脂质体... 详细信息

目的 :构建携带肝细胞生长因子 (HGF)的逆转录病毒载体 ,并建立高效、稳定生产HGF的包装细胞株。方法 :以pcDNA3.0 HGF质粒为模板进行PCR反应扩增出HGF基因全长序列 ,亚克隆至逆转录病毒载体pMSCVneo构建重组逆转录病毒质粒 ,以脂质体介导转染包装细胞PT6 7,经G4 18筛选 ,进而挑选抗性集落扩大培养后 ,用靶细胞NIH3T3测定病毒滴度 ,筛选出高效产毒细胞株。扩大培养后进行RT PCR鉴定HGFmRNA的表达。扩大培养NIH3T3细胞抗性集落 (NIH3T3/HGF) ,并用细胞培养上清进行人肝癌细胞系HepG2的扩散试验。结果 :PCR反应扩增出 2 2 0 0bp的HGF基因 ,构建了重组逆转录病毒表达载体pMSCV HGF ,测序鉴定正确。经脂质体介导转染包装细胞、G4 18筛选和NIH3T3测定病毒滴度 ,筛选出具有最高病毒滴度 (8.8× 10 7cfu /ml)的细胞集落 ,扩大培养后建立高效表达HGF的包装细胞株PT/HGF ,RT PCR证实HGF基因在PT/HGF中有转录。NIH3T3/HGF培养上清可使HepG2细胞扩散 ,形态改变。结论 :成功构建了携带HGF的逆转录病毒载体pMSCV HGF ,并建立了稳定、高效生产有活性的HGF的产毒细胞株PT/HGF。

关键词：肝细胞生长因子包装细胞PT67 逆转录病毒载体 FF/HGF细胞株转染